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　　引言：新冠肺炎疫情持續(xù)暴發(fā)，在這場(chǎng)沒有硝煙的戰(zhàn)爭(zhēng)中，病毒的感染診斷成為疫情防控重中之重。而此次新型冠狀病毒能夠在全國(guó)范圍內(nèi)快速、高效的檢測(cè)，得益于我國(guó)體外診斷試劑的快速研發(fā)。

　　近年來(lái)，隨著生物技術(shù)的飛速發(fā)展，用于疾病診斷、指導(dǎo)用藥的IVD產(chǎn)品越來(lái)越多。試驗(yàn)用樣本的保存、運(yùn)輸及操作過(guò)程規(guī)范化的重要性日益突出，對(duì)提升體外診斷試驗(yàn)樣本管理規(guī)范性，提高體外診斷試劑臨床試驗(yàn)結(jié)果的可靠性至關(guān)重要。筆者結(jié)合本醫(yī)院開展的試驗(yàn)項(xiàng)目，探討IVD臨床試驗(yàn)樣本保存、運(yùn)輸以及操作的特殊性。

　　IVD及其臨床試驗(yàn)

　　體外診斷（IVD）試劑是在疾病的預(yù)防、診斷、治療監(jiān)測(cè)、預(yù)后觀察、健康狀態(tài)評(píng)價(jià)以及遺傳性疾病的預(yù)測(cè)過(guò)程中，用于對(duì)人體樣本（各種體液、細(xì)胞、組織樣本等）進(jìn)行體外檢測(cè)的試劑、試劑盒、校準(zhǔn)品（物）、質(zhì)控品（物）等。在我國(guó)，第二類、第三類IVD產(chǎn)品在獲得注冊(cè)進(jìn)入市場(chǎng)前，為驗(yàn)證產(chǎn)品的安全性、有效性及與“金標(biāo)準(zhǔn)”或目前臨床廣泛評(píng)價(jià)品質(zhì)較好的已上市產(chǎn)品間的等效性，需開展臨床試驗(yàn)。

　　IVD臨床試驗(yàn)（包括與已上市產(chǎn)品進(jìn)行的比較研究試驗(yàn)）是指在相應(yīng)的臨床環(huán)境中，對(duì)體外診斷試劑的臨床性能進(jìn)行的系統(tǒng)性研究，其目的是確認(rèn)產(chǎn)品的風(fēng)險(xiǎn)/受益比是否可接受，并確定產(chǎn)品的適用人群及適應(yīng)證。臨床試驗(yàn)的整個(gè)過(guò)程中樣本保存、運(yùn)輸及操作環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性起著關(guān)鍵的作用，是臨床試驗(yàn)質(zhì)量保證的重要環(huán)節(jié)，決定了上市后體外診斷試劑是否安全有效，直接關(guān)系到公眾身體健康。與藥物臨床試驗(yàn)相比，IVD臨床試驗(yàn)涉及的生物樣本類型多樣，具有臨床試驗(yàn)樣本需求量大、試驗(yàn)周期短的特點(diǎn)。

　　臨床試驗(yàn)樣本的保存

　　根據(jù)體外診斷試劑臨床試驗(yàn)樣本量要求，第三類產(chǎn)品臨床試驗(yàn)的總樣本數(shù)至少1000例，第二類產(chǎn)品臨床試驗(yàn)的總樣本數(shù)至少200例。因此，相對(duì)于藥物或器械臨床試驗(yàn)，體外診斷試劑臨床試驗(yàn)需要的樣本量較大，實(shí)際上常常篩選后需保存一段時(shí)間后才會(huì)集中檢測(cè)。如果樣本需要經(jīng)過(guò)一定時(shí)間的保存時(shí)，需要記錄樣本冷凍或冷藏的起始時(shí)間、使用時(shí)間、保存期間溫度，相關(guān)人員均需簽字確認(rèn)。冷凍或冷藏樣本要在方案要求的保存時(shí)間范圍內(nèi)完成試驗(yàn)，否則樣本作廢。不同的樣本會(huì)有不同的保存條件要求，除了根據(jù)臨床常規(guī)的樣本保存，還需要遵循試驗(yàn)方案的規(guī)定，如樣本保存不當(dāng)有可能導(dǎo)致假陰性。如在我院開展的某基因檢測(cè)試劑盒臨床試驗(yàn)，采集的尿液樣本室溫（10℃-30℃）可保存5天，未能及時(shí)檢測(cè)的樣本需在-80℃條件下保存，并避免重復(fù)凍融；用膠體金免疫層析法檢測(cè)N-末端腦鈉肽前體的檢測(cè)試劑盒，在收集血清或血漿樣本后，一周內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)可存放在2℃-8℃，超過(guò)一周后應(yīng)放于-20℃以下，如采集的標(biāo)本為靜脈血標(biāo)本則不能冷凍；石蠟包埋組織樣本一般可在10℃-30℃條件下保存3年，而使用核酸提取試劑提取后的核酸標(biāo)本，根據(jù)不同方案的要求，DNA樣本保存于-20℃以下，RNA樣本保存于-70℃以下，一般不超過(guò)6個(gè)月，避免反復(fù)凍融，凍融次數(shù)控制在方案規(guī)定次數(shù)內(nèi)。

　　生物樣本的保存設(shè)備，如-70℃超低溫冰箱、-20℃低溫冰箱應(yīng)定期進(jìn)行維護(hù)、檢測(cè)和校準(zhǔn)，確保專人適時(shí)對(duì)試驗(yàn)設(shè)施設(shè)備進(jìn)行質(zhì)量控制檢查，對(duì)儀器資料進(jìn)行歸檔管理。臨床用樣本存放的冰箱多采用節(jié)點(diǎn)記錄溫度的方式，可導(dǎo)出形成完整連貫的溫度曲線記錄。試驗(yàn)樣本保存設(shè)備應(yīng)安裝報(bào)警系統(tǒng)，當(dāng)溫控探頭記錄的溫度超過(guò)設(shè)定的溫度范圍時(shí)，系統(tǒng)即報(bào)警提示，并自動(dòng)發(fā)送報(bào)警短信通知研究者，監(jiān)測(cè)參數(shù)偏離可接受范圍時(shí)，應(yīng)及時(shí)采取應(yīng)急措施，并保存監(jiān)測(cè)和采取應(yīng)急措施的記錄。

　　相較藥物或器械臨床試驗(yàn)，IVD臨床試驗(yàn)的樣本種類多樣，涉及多個(gè)科室，留取病例標(biāo)本各有不同，包括各種血液、體液、病理組織等，數(shù)量繁多，各類試驗(yàn)樣品留取后，保存條件也不盡相同。因此，為保證試驗(yàn)樣本的正確保存，需要加強(qiáng)對(duì)試驗(yàn)人員的培訓(xùn)，熟悉臨床試驗(yàn)方案。主要研究者應(yīng)制定詳細(xì)的職責(zé)分工，指定專人負(fù)責(zé)樣本的保存、分發(fā)管理，其他研究者使用樣本進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)必須取得樣本管理員同意，如實(shí)填寫出入庫(kù)記錄。

　　試驗(yàn)結(jié)束后，檢測(cè)剩余樣本可以根據(jù)臨床試驗(yàn)中心常規(guī)流程進(jìn)行銷毀，但需要保留銷毀記錄；也可根據(jù)實(shí)際需要，統(tǒng)一保存于試驗(yàn)中心，便于后期項(xiàng)目核查。

　　臨床試驗(yàn)樣本的運(yùn)輸

　　對(duì)于在研究機(jī)構(gòu)內(nèi)部進(jìn)行檢測(cè)的樣本，則直接移交給實(shí)驗(yàn)室樣本管理員，移交過(guò)程應(yīng)該符合在臨床試驗(yàn)方案中的要求，例如避光、室溫、2℃-8℃運(yùn)輸?shù)取颖竟芾韱T負(fù)責(zé)核對(duì)樣本的信息和狀態(tài)，填寫樣本入庫(kù)信息。

　　樣本檢測(cè)在本機(jī)構(gòu)之外進(jìn)行時(shí)，則一般采用專業(yè)的冷鏈運(yùn)輸公司將研究機(jī)構(gòu)采集到的樣品運(yùn)送至檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室。由第三方冷鏈運(yùn)輸單位運(yùn)送的樣本應(yīng)具有實(shí)時(shí)溫度監(jiān)控，以監(jiān)測(cè)樣本在運(yùn)輸過(guò)程中是否仍在要求的溫度條件下保存。冷鏈運(yùn)輸后應(yīng)提供運(yùn)送單，包括樣本開始運(yùn)輸時(shí)間和到達(dá)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室接收后的時(shí)間。在此時(shí)間范圍內(nèi)提取溫度監(jiān)控儀上的溫度記錄，打印保存。如果不使用第三方冷鏈運(yùn)輸，則需要配備經(jīng)過(guò)國(guó)家計(jì)量部門定期檢定過(guò)的有效的溫度記錄儀對(duì)試驗(yàn)樣品進(jìn)行實(shí)時(shí)溫度監(jiān)控。此外，接收樣本后還需保存運(yùn)送單和溫度監(jiān)控記錄。

　　臨床試驗(yàn)樣本的操作

　　不同檢測(cè)樣本的檢測(cè)過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格按照操作說(shuō)明書及試驗(yàn)方案進(jìn)行操作。體外診斷試劑臨床試驗(yàn)中因涉及到考核試劑、對(duì)比試劑、第三方復(fù)核試劑，對(duì)試驗(yàn)人員專業(yè)素質(zhì)要求較為嚴(yán)格，試驗(yàn)人員需熟練掌握試驗(yàn)樣品的規(guī)格型號(hào)、技術(shù)要求以及操作標(biāo)準(zhǔn)。需要選擇臨床檢驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)豐富、有資質(zhì)的專業(yè)人員進(jìn)行實(shí)際檢測(cè)工作，所有參與試驗(yàn)的人員必須經(jīng)過(guò)培訓(xùn)，具備專業(yè)資質(zhì)及培訓(xùn)記錄證明其能勝任相關(guān)工作。

　　臨床試驗(yàn)開始前，需要充分培訓(xùn)所有參與試驗(yàn)的人員，使其熟悉并掌握試驗(yàn)產(chǎn)品所適用的儀器、技術(shù)性能、操作方法、試驗(yàn)流程等，并確保所有培訓(xùn)都有培訓(xùn)記錄。制定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，避免不同試驗(yàn)人員因操作習(xí)慣不同導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果可能發(fā)生差異，最大限度控制試驗(yàn)人為誤差。

　　臨床試驗(yàn)實(shí)施過(guò)程中，如遇到疑惑或者需要重點(diǎn)討論解決的問(wèn)題，也應(yīng)隨時(shí)進(jìn)行培訓(xùn)并記錄。如需要，試驗(yàn)開始之前應(yīng)做好考核儀器系統(tǒng)的定標(biāo)和質(zhì)控，保證結(jié)果真實(shí)可控。如按照考核試劑說(shuō)明書相關(guān)內(nèi)容使用定標(biāo)品進(jìn)行定標(biāo)，定標(biāo)必須通過(guò)才可進(jìn)行下一步操作；規(guī)定合適的定標(biāo)頻率和定標(biāo)間期；定標(biāo)后使用質(zhì)控品進(jìn)行質(zhì)控，質(zhì)控測(cè)定值必須處于規(guī)定的質(zhì)控限內(nèi)，表明質(zhì)控結(jié)果在控；研究者應(yīng)確保質(zhì)控呈現(xiàn)預(yù)期結(jié)果，方可進(jìn)行下一步操作等。

　　為了實(shí)現(xiàn)在不同研究中心和不同研究者之間檢測(cè)流程的一致性，可以在正式試驗(yàn)之前使用考核試劑檢測(cè)一定數(shù)量的樣本進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)。預(yù)試驗(yàn)為正式試驗(yàn)的模擬，操作流程與正式試驗(yàn)完全一致。預(yù)試驗(yàn)可幫助試驗(yàn)研究人員熟悉試驗(yàn)操作流程。用于預(yù)試驗(yàn)的樣本不納入全分析集。

　　《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)指導(dǎo)原則》中對(duì)新研制體外診斷試劑的臨床試驗(yàn)明確要求采用試驗(yàn)用體外診斷試劑與診斷該疾病的“金標(biāo)準(zhǔn)”進(jìn)行盲法同步比較。在實(shí)際操作過(guò)程中，可以根據(jù)方案要求將原始樣本重新進(jìn)行樣本編號(hào)，去除標(biāo)識(shí)化，樣本編號(hào)和原始樣本的樣本條碼號(hào)一一對(duì)應(yīng)，所有樣本的信息均可以在本中心LIS或HIS中溯源到檢驗(yàn)結(jié)果。為減少因試驗(yàn)人員主觀因素導(dǎo)致的結(jié)果偏差，試驗(yàn)樣本管上除樣本編號(hào)及其他必要信息外，應(yīng)無(wú)其他可識(shí)別受試者身份信息的標(biāo)記，試驗(yàn)過(guò)程中，實(shí)驗(yàn)人員僅可看到樣本編號(hào)。樣本編號(hào)對(duì)應(yīng)的受試者信息對(duì)考核試劑試驗(yàn)操作者及病理組織學(xué)檢測(cè)人員應(yīng)當(dāng)保密。

　　在實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)過(guò)程中，操作人員接觸的臨床樣本均視為可能有污染性樣本，需做好防護(hù)工作，規(guī)避生物風(fēng)險(xiǎn)。具體要求應(yīng)在實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程中有相關(guān)規(guī)定。

　　總結(jié)

　　IVD臨床試驗(yàn)中的樣本貫穿臨床試驗(yàn)的始終，樣本的保存、運(yùn)輸及操作的規(guī)范化直接關(guān)系試驗(yàn)結(jié)果的真實(shí)性和可靠性，與產(chǎn)品最終能否報(bào)批息息相關(guān)，更直接關(guān)系到患者的健康和利益。因此，進(jìn)行體外診斷試劑臨床試驗(yàn)的樣本管理，需提高研究人員樣本管理的規(guī)范化意識(shí)、法規(guī)意識(shí)，做好試驗(yàn)前培訓(xùn)指導(dǎo)工作，嚴(yán)格要求，規(guī)范管理，才能保證體外診斷試劑臨床試驗(yàn)結(jié)果真實(shí)可靠。
　　來(lái)源：中國(guó)食品藥品網(wǎng)