附件：人細(xì)小病毒B19 IgM/IgG抗體檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2021年第24號(hào)）.doc

人細(xì)小病毒B19 IgM/IgG抗體檢測(cè)試劑
注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)人細(xì)小病毒B19 IgM/IgG抗體檢測(cè)試劑注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門審評(píng)注冊(cè)申報(bào)資料提供依據(jù)。

本指導(dǎo)原則是對(duì)人細(xì)小病毒B19 IgM/IgG抗體檢測(cè)試劑的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是對(duì)申請(qǐng)人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊(cè)審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料，相關(guān)人員應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍

人細(xì)小病毒B19 IgM/IgG抗體檢測(cè)試劑是指基于抗原抗體反應(yīng)原理，采用免疫層析法、酶聯(lián)免疫法和化學(xué)發(fā)光法等檢測(cè)技術(shù)，對(duì)來源于血清或血漿等人體樣本中的B19 IgM/IgG抗體進(jìn)行體外定性檢測(cè)的試劑。其臨床預(yù)期用途為：結(jié)合臨床表現(xiàn)和其他實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，可用于急性及慢性人細(xì)小病毒B19感染的輔助診斷及免疫狀態(tài)的評(píng)估和急性及慢性感染患者抗體的血清學(xué)轉(zhuǎn)換的判定。

人細(xì)小病毒B19（parvovirus B19，簡(jiǎn)稱B19病毒）屬于細(xì)小病毒科（Parvoviridaefamily），紅病毒屬（Erythrovirusgenus），無包膜，是單鏈線狀DNA病毒?？梢员环譃?、2、3三種基因型，其中1型和3型又各自分為兩種亞型。B19病毒感染在人群中普遍存在，可通過呼吸道、血液、胎盤等進(jìn)行傳播，并且可在各年齡段中發(fā)生，尤其在孕婦和兒童中多見。易感人群還包括免疫功能缺陷或者不全的患者及貧血患者。兒童感染后最常引發(fā)傳染性紅斑；免疫力正常人群感染后一般為輕型自限性癥狀；孕婦感染可造成胎兒水腫和貧血，嚴(yán)重時(shí)導(dǎo)致胎兒死亡；先天免疫缺陷患者、獲得性免疫缺陷患者、腫瘤或器官移植手術(shù)后進(jìn)行化療的患者感染會(huì)導(dǎo)致慢性貧血癥；鐮狀細(xì)胞貧血癥等血液系統(tǒng)疾病患者感染會(huì)發(fā)生一過性再生障礙性危象而導(dǎo)致急性貧血；部分感染患者會(huì)出現(xiàn)關(guān)節(jié)疼痛等癥狀，隨后演變?yōu)槎喟l(fā)性關(guān)節(jié)炎。

病毒血癥的后期階段，特異性IgM抗體開始出現(xiàn)。IgM抗體出現(xiàn)后可持續(xù)約5個(gè)月或者更久，對(duì)B19病毒特異IgM進(jìn)行檢測(cè)可用于近期感染和疾病的早期診斷。B19病毒感染后約第15天，開始出現(xiàn)特異性IgG抗體，持續(xù)數(shù)月甚至終生。B19病毒有兩種衣殼蛋白VP1和VP2，一個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白NS1。其中VP1和VP2組成衣殼包裹在B19病毒DNA表面，構(gòu)成B19病毒的抗原性。針對(duì)結(jié)構(gòu)蛋白VP1和VP2構(gòu)象性表位的IgG抗體可維持高滴度數(shù)月，并長(zhǎng)期存在體內(nèi)，對(duì)該類IgG抗體進(jìn)行檢測(cè)可用于既往感染的診斷和流行病學(xué)調(diào)查研究。

不同人群感染B19病毒后產(chǎn)生不同強(qiáng)度的免疫應(yīng)答反應(yīng)。健康成年人感染B19病毒后抗體反應(yīng)非常強(qiáng)，能檢測(cè)到高滴度的特異性IgM抗體。B19病毒感染后在免疫功能正常兒童可產(chǎn)生特異性抗體，發(fā)病后數(shù)日可檢出IgM，持續(xù)數(shù)月。當(dāng)患有溶血性貧血兒童感染B19病毒并發(fā)生再障危象時(shí)，IgM抗體反應(yīng)特別強(qiáng)。此外，慢性血液病患者、免疫缺陷或抑制患者，有時(shí)缺乏可檢測(cè)到的抗體反應(yīng)。

B19病毒感染檢測(cè)的常用方法有血清學(xué)抗體檢測(cè)、核酸檢測(cè)以及抗原檢測(cè)，其中B19病毒血清學(xué)抗體檢測(cè)是目前B19病毒感染臨床輔助診斷和流行病學(xué)調(diào)查研究的主要方法，用于對(duì)傳染性紅斑患者、或有B19病毒感染者接觸史、不明原因發(fā)熱、關(guān)節(jié)痛癥狀的高危對(duì)象進(jìn)行檢測(cè)。血清學(xué)抗體檢測(cè)常應(yīng)用于母體出現(xiàn)B19病毒感染臨床癥狀、有可疑或確診的B19病毒感染暴露史以及發(fā)現(xiàn)胎兒貧血后的情況。如懷疑孕婦有B19病毒接觸史以及發(fā)現(xiàn)胎兒存在貧血的癥狀，建議盡早對(duì)母體血液中B19病毒的IgM和IgG抗體進(jìn)行檢測(cè)，聯(lián)合使用B19病毒DNA檢測(cè)、超聲檢查以及持續(xù)觀察有無胎兒水腫或貧血等手段，用于妊娠期B19病毒感染的輔助診斷以及免疫狀態(tài)的評(píng)價(jià)。

鑒于母體感染細(xì)小病毒B19不能作為胎兒感染的證據(jù)，并且大多數(shù)妊娠期急性細(xì)小病毒B19感染無不良妊娠結(jié)局的發(fā)生，本類試劑不用于孕期B19病毒感染的產(chǎn)前篩查。即該類產(chǎn)品不用于對(duì)母體以及胎兒無細(xì)小病毒B19相關(guān)癥狀的人群進(jìn)行檢測(cè)。

二、注冊(cè)申報(bào)資料要求

（一）綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、研究結(jié)果的總結(jié)評(píng)價(jià)以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容。建議申請(qǐng)人對(duì)以下幾方面內(nèi)容進(jìn)行著重介紹：

1.臨床適應(yīng)癥背景情況

描述B19病毒的生物學(xué)特征、流行病學(xué)特征、抗體的分布情況（濃度水平、產(chǎn)生和消失的時(shí)間等）、易感人群、感染后的臨床表現(xiàn)和相關(guān)疾病、現(xiàn)有的臨床診斷方法或其他實(shí)驗(yàn)室檢查方法等。

2.同類產(chǎn)品上市情況

從技術(shù)方法及預(yù)期用途等方面寫明申報(bào)產(chǎn)品與現(xiàn)行臨床診斷方法以及目前市場(chǎng)上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的主要異同點(diǎn)。

（二）主要原材料研究資料

由于B19病毒不同的抗原（VP1或VP2）以及表位（線性或構(gòu)象）類型對(duì)于IgM/IgG抗體的檢出能力不同；因此在選擇產(chǎn)品原料時(shí)，應(yīng)注重上述抗原以及表位的選擇，避免抗原或者表位的差異造成的假陰性。原材料研究資料中應(yīng)詳述此方面的考慮。另外，建議加入產(chǎn)品校準(zhǔn)品。

1.試劑盒所用病原體抗原

首先應(yīng)詳述確定該抗原作為主要原材料的依據(jù)，此外應(yīng)提交抗原來源、制備、篩選、鑒定及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（蛋白純度、濃度、功能性試驗(yàn)等）等詳細(xì)試驗(yàn)資料。

主要包括以下兩種情況：

1.1企業(yè)自制抗原

如為天然抗原，則應(yīng)對(duì)B19病毒毒株選擇、培養(yǎng)、抗原提取、純化、鑒定等實(shí)驗(yàn)過程予以詳述。如為重組抗原，則應(yīng)提交有關(guān)特定基因選擇、序列信息，克隆構(gòu)建及轉(zhuǎn)化，抗原表達(dá)及純化、鑒定等詳細(xì)資料。

1.2企業(yè)外購抗原

應(yīng)詳述抗原的名稱，抗原生物學(xué)來源，供應(yīng)商名稱，提交供應(yīng)商選擇的研究資料及供應(yīng)商出具的抗原性能檢驗(yàn)報(bào)告。

2.其他主要原輔料

應(yīng)提交各種原輔料的選擇及驗(yàn)證資料，如固相載體、硝酸纖維素膜、化學(xué)發(fā)光劑、反應(yīng)緩沖液等，應(yīng)詳述確定該原輔料作為主要原輔料的依據(jù)，說明每一原輔料的供應(yīng)商名稱，提交供應(yīng)商出具的每一原輔料性能指標(biāo)及檢驗(yàn)報(bào)告，詳述申請(qǐng)人對(duì)每一原輔料技術(shù)指標(biāo)要求并提交檢驗(yàn)數(shù)據(jù)。免疫層析方法學(xué)的產(chǎn)品如適用于全血，應(yīng)介紹血細(xì)胞去除方式及相關(guān)原材料，并驗(yàn)證去除效果。

3.試劑盒質(zhì)控品（如有）

應(yīng)包括原料來源、質(zhì)控品制備、陰陽性確認(rèn)等研究資料。質(zhì)控品至少包含陰性和弱陽性兩個(gè)水平，陽性質(zhì)控品可選擇臨床陽性樣本，陰性質(zhì)控品可選擇臨床陰性樣本或樣本稀釋液。免疫層析方法學(xué)應(yīng)詳述質(zhì)控線相關(guān)原材料（例如羊抗鼠IgG多克隆抗體）的選擇依據(jù)和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

4.企業(yè)參考品

應(yīng)提交企業(yè)參考品的原料選擇、制備、陰陽性及濃度/滴度確認(rèn)等相關(guān)驗(yàn)證資料，說明參考品陰陽性及濃度/滴度確認(rèn)的方法或試劑（建議采用國(guó)內(nèi)已上市的、臨床上普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類試劑）。B19病毒 IgG 抗體的量值單位可以IU/ml表示。企業(yè)參考品的基質(zhì)應(yīng)與待測(cè)樣本相同。對(duì)于同時(shí)檢測(cè)IgM和IgG抗體的試劑，應(yīng)對(duì)IgM和IgG抗體分別設(shè)置企業(yè)參考品。建議如下：

4.1陽性參考品和陰性參考品

陽性參考品應(yīng)考慮B19病毒 IgM/IgG 抗體檢出能力的驗(yàn)證，可選擇多份確認(rèn)為陽性的臨床樣本，并設(shè)置不同滴度水平。陰性參考品應(yīng)考慮檢測(cè)特異性的評(píng)價(jià)，納入類風(fēng)濕因子、ToRCH病原體（弓形蟲、風(fēng)疹病毒、巨細(xì)胞病毒及單純皰疹病毒）以及人類免疫缺陷病毒特異性抗體陽性樣本。

4.2檢測(cè)限參考品

可為參考物質(zhì)或臨床陽性樣本的系列稀釋樣本，其中應(yīng)包含檢測(cè)限水平。

4.3精密度參考品

至少包括弱陽性水平參考品。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料

1.主要生產(chǎn)工藝介紹，可用流程圖方式表示，并簡(jiǎn)要說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。

2.產(chǎn)品基本反應(yīng)原理介紹。

3.包被工藝研究，申請(qǐng)人應(yīng)考慮如包被液量、濃度、時(shí)間等指標(biāo)對(duì)產(chǎn)品性能的影響，通過試驗(yàn)確定上述指標(biāo)的最佳組合。

4.顯色（發(fā)光）系統(tǒng)、酶作用底物等的介紹。

5.實(shí)驗(yàn)體系反應(yīng)條件確定：申請(qǐng)人應(yīng)考慮反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)溫度、洗滌次數(shù)等條件對(duì)產(chǎn)品性能的影響，通過試驗(yàn)確定上述條件的最佳組合。

6.酶催化底物（發(fā)光或變色）的最適條件研究。

7.體系中樣品加樣方式及加樣量確定：申請(qǐng)人應(yīng)考慮樣品加樣方式、加樣量對(duì)產(chǎn)品檢測(cè)結(jié)果的影響，通過實(shí)驗(yàn)確定最佳的加樣方式及加樣量。如樣本需采取稀釋或其他必要的方法進(jìn)行處理后方可用于最終檢測(cè)，申請(qǐng)人還應(yīng)對(duì)可用于樣本稀釋的基質(zhì)或處理方法進(jìn)行研究，通過試驗(yàn)確定最終選擇的用于樣本稀釋的基質(zhì)或處理方法。

8.對(duì)于IgM抗體檢測(cè)試劑，如采用間接法，建議考慮高濃度特異性IgG對(duì)結(jié)果的影響，合理設(shè)置IgG去除相關(guān)樣本處理步驟（例如采用含有IgG吸附劑的樣本稀釋液等），或者詳述產(chǎn)品設(shè)計(jì)中采用的避免IgG對(duì)IgM檢測(cè)結(jié)果造成影響的合理措施。

（四）分析性能評(píng)估資料

企業(yè)應(yīng)提交在產(chǎn)品研制或成品驗(yàn)證階段對(duì)試劑盒進(jìn)行的所有性能驗(yàn)證的研究資料，包括具體研究方法、驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)、試驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)分析方法等詳細(xì)資料。對(duì)于本類產(chǎn)品建議著重對(duì)以下分析性能進(jìn)行研究。IgM抗體、IgG抗體應(yīng)分別研究。

1.適用的樣本類型

如果試劑適用于多種樣本類型，應(yīng)采用合理方法評(píng)價(jià)每個(gè)樣本類型的適用性。對(duì)于可比樣本（如血清、血漿），可采用同源比對(duì)的方法進(jìn)行驗(yàn)證；對(duì)于不可比樣本，應(yīng)對(duì)每個(gè)樣本類型分別進(jìn)行性能評(píng)估。

2.最低檢測(cè)限

確定：建議選取特定滴度的特異性抗體陽性樣本梯度稀釋進(jìn)行最低檢測(cè)限確定。建議設(shè)置多個(gè)濃度梯度，每個(gè)濃度重復(fù)檢測(cè)不少于3次，以100%可檢出的最低濃度水平作為預(yù)設(shè)檢測(cè)限。在此濃度附近制備若干濃度梯度樣品，每個(gè)濃度至少重復(fù)檢測(cè)20次，將具有95%陽性檢出率的最低濃度作為最低檢測(cè)限。

驗(yàn)證：選擇具有時(shí)間和區(qū)域特征性的至少3個(gè)臨床樣本（與最低檢測(cè)限確定不同樣本）在最低檢測(cè)限濃度水平進(jìn)行驗(yàn)證，應(yīng)達(dá)到95%陽性檢出率。

采用的稀釋液應(yīng)與適用樣本類型的基質(zhì)一致，可采用陰性樣本進(jìn)行稀釋。同時(shí)應(yīng)提供詳細(xì)的抗體類型和滴度的確認(rèn)方法及驗(yàn)證結(jié)果。

3.包容性驗(yàn)證

選擇中國(guó)境內(nèi)來源于不同地域、不同人群的不少于30份B19病毒抗體弱陽性的患者樣本進(jìn)行研究。制備方式可為臨床陰性樣本作為基質(zhì)稀釋陽性樣本，樣本性質(zhì)的確認(rèn)方法可為臨床診斷結(jié)果或已上市同類產(chǎn)品檢測(cè)結(jié)果。如有條件，盡量納入不同B19病毒基因型的患者樣本進(jìn)行驗(yàn)證。

4.分析特異性

4.1交叉反應(yīng)

4.1.1用于B19病毒交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病原體種類主要考慮以下幾方面：抗原結(jié)構(gòu)具有同源性（如在分類學(xué)上的近緣病毒）、易引起相同或相似的臨床癥狀、易并發(fā)感染的其他微生物（見表1），以及高濃度病原體特異性IgG抗體與特異性IgM抗體的交叉反應(yīng)驗(yàn)證。

4.1.2如果檢測(cè)試劑采用基因重組抗原，應(yīng)增加對(duì)重組基因?qū)胛⑸锾禺愋钥贵w的交叉反應(yīng)評(píng)價(jià)。例如，如果采用大腸桿菌作為宿主菌，建議考慮大腸桿菌自身蛋白或載體骨架編碼的蛋白產(chǎn)生的抗體與被測(cè)物之間可能產(chǎn)生的交叉反應(yīng)。

其中用于交叉反應(yīng)研究用的抗體類型應(yīng)與待測(cè)目的抗體類型相同，如申報(bào)兩種抗體類型，用于交叉反應(yīng)研究的病原體的IgM抗體、IgG抗體應(yīng)分別進(jìn)行驗(yàn)證。應(yīng)提交所有用于交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病原體抗體樣本來源、陰陽性、種屬確認(rèn)等相關(guān)信息。

4.2干擾實(shí)驗(yàn)

4.2.1內(nèi)源性及外源性干擾

應(yīng)對(duì)樣本中可能存在的內(nèi)源性及外源性干擾物質(zhì)（見表2）進(jìn)行研究。建議對(duì)B19病毒抗體弱陽性、陽性的臨床樣本，使用潛在最大濃度的干擾物質(zhì)分別進(jìn)行添加，確定是否產(chǎn)生干擾。如有干擾，梯度稀釋干擾物并進(jìn)一步確定可接受的干擾物質(zhì)的最高濃度水平，或產(chǎn)生干擾的濃度水平。應(yīng)使用多份臨床樣本，每個(gè)樣本重復(fù)檢測(cè)不少于3次。申請(qǐng)人應(yīng)描述干擾物質(zhì)的種類，說明樣本的制備方法及待測(cè)物的水平，以及不產(chǎn)生干擾的驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)。

4.2.2抗凝劑的干擾

如果試劑盒適用樣本類型包括血漿和/或全血樣本，可采用一定數(shù)量血清、血漿、全血同源樣本進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)研究，以驗(yàn)證不同抗凝劑的適用性。

4.2.3 B19病毒IgM抗體檢測(cè)特異性驗(yàn)證

對(duì)于IgM抗體檢測(cè)試劑，可采用對(duì)至少10份含有B19病毒特異性IgM抗體的樣本進(jìn)行IgM破壞實(shí)驗(yàn)研究，方法為采用特定的化學(xué)制劑（如2－巰基乙醇或二硫蘇糖醇）處理樣本后，重新進(jìn)行檢測(cè)，IgM檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為陰性；或者選用其他合理的方法進(jìn)行驗(yàn)證。

5.精密度

具體試驗(yàn)方法可以參考相關(guān)的美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)批準(zhǔn)指南（CLSI-EP）文件或國(guó)內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評(píng)估的文件。企業(yè)應(yīng)對(duì)每項(xiàng)精密度指標(biāo)的驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求，如標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)的范圍等。

5.1影響精密度的條件包括：操作者、測(cè)量?jī)x器、測(cè)量程序、試劑批次、校準(zhǔn)（校準(zhǔn)品批次，校準(zhǔn)周期）、運(yùn)行、時(shí)間、地點(diǎn)、環(huán)境條件等。除申報(bào)試劑本身外，還應(yīng)對(duì)以上可能影響檢測(cè)精密度的主要變量進(jìn)行驗(yàn)證。

5.2設(shè)定合理的精密度評(píng)價(jià)周期。

5.3用于精密度評(píng)價(jià)的樣本應(yīng)使用臨床樣本。至少包括三個(gè)水平：陰性、弱陽性以及中等陽性的樣本。

6.鉤狀（HOOK）效應(yīng)

建議采用高滴度的B19病毒抗體陽性臨床樣本進(jìn)行梯度稀釋后分別檢測(cè)，每個(gè)梯度重復(fù)3至5次，將顯色深度或檢測(cè)值隨滴度升高反而變淺或降低時(shí)的滴度作為出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)時(shí)B19病毒抗體的最低滴度。

7.企業(yè)參考品的驗(yàn)證（如適用）：

根據(jù)主要原材料研究資料中企業(yè)參考品的設(shè)置情況，采用三批產(chǎn)品對(duì)企業(yè)參考品進(jìn)行檢驗(yàn)并提供詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

（五）陽性判斷值確定資料

陽性判斷值反映區(qū)分受試者目標(biāo)狀態(tài)的特征。申請(qǐng)人應(yīng)考慮不同地理區(qū)域流行病學(xué)背景以及產(chǎn)生不同強(qiáng)度免疫應(yīng)答反應(yīng)的人群（如免疫缺陷/抑制人群）與正常人群之間的差異，選擇具有代表性的樣本建立陽性判斷值，注意應(yīng)納入一定數(shù)量的弱陽性樣本。

建議采用受試者工作特征曲線（ROC）的方法確定陽性判斷值。如采用其他研究方法，應(yīng)說明其合理性。若試驗(yàn)結(jié)果存在灰區(qū)，建議申請(qǐng)人從臨床意義的角度出發(fā)，合理設(shè)定灰區(qū)范圍并提供灰區(qū)的確定資料。

試驗(yàn)所用樣本來源應(yīng)考慮到年齡（成人或兒童）、不同的感染階段（早期和晚期）和生理狀態(tài)（是否妊娠）等因素的影響。另外，建議申請(qǐng)人考慮建立陽性判斷值時(shí)使用的受試者樣本對(duì)于目標(biāo)人群的代表性，通過臨床試驗(yàn)進(jìn)一步確認(rèn)陽性判斷值的準(zhǔn)確性。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報(bào)試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。前者主要包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性（如涉及）及凍融穩(wěn)定性（如涉及）等研究，申請(qǐng)人可根據(jù)實(shí)際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實(shí)施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對(duì)于實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

樣本穩(wěn)定性一般包括樣本各種實(shí)際運(yùn)輸及儲(chǔ)存（常溫、冷藏和冷凍）條件下的保存期限驗(yàn)證，以確認(rèn)樣本的保存條件及效期（短期、長(zhǎng)期）。需要冷凍保存的樣本同時(shí)應(yīng)對(duì)凍融次數(shù)進(jìn)行合理驗(yàn)證。某些用于防腐、冷凍用途或起穩(wěn)定保護(hù)作用的添加劑可能會(huì)對(duì)檢測(cè)造成影響，如涉及，請(qǐng)對(duì)該添加劑的影響進(jìn)行合理驗(yàn)證。

試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果應(yīng)在說明書【儲(chǔ)存條件及有效期】和【樣本要求】?jī)身?xiàng)中進(jìn)行詳細(xì)說明。

（七）臨床試驗(yàn)資料

臨床試驗(yàn)的開展、方案的制定以及報(bào)告的撰寫等均應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)及《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》（原國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號(hào)）的要求，如相關(guān)法規(guī)、文件有更新，臨床試驗(yàn)應(yīng)符合更新后的要求。

1.試驗(yàn)方法

臨床試驗(yàn)可采用試驗(yàn)用體外診斷試劑與臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行比較研究試驗(yàn)，證明兩者等效，從而間接證明試驗(yàn)用體外診斷試劑臨床性能滿足預(yù)期用途的要求。對(duì)比試劑在預(yù)期用途、適用人群、樣本類型、檢測(cè)性能等方面應(yīng)與試驗(yàn)用體外診斷試劑具有較好的可比性。臨床試驗(yàn)方案中應(yīng)針對(duì)對(duì)比試劑的選擇及依據(jù)進(jìn)行詳細(xì)描述。

對(duì)于B19病毒IgM檢測(cè)試劑，申請(qǐng)人還應(yīng)選擇感染急性期患者采集的樣本進(jìn)行申報(bào)試劑與感染急性期判斷的方法的一致性研究，以評(píng)價(jià)申報(bào)試劑的檢測(cè)性能。用于評(píng)價(jià)的樣本可選擇處于感染急性期患者的采集樣本（不少于30例）；或者選擇商業(yè)血清轉(zhuǎn)化盤（不少于5套）?？刹捎玫挠糜诟腥炯毙云谂袛嗟姆椒ǎ纾築19病毒特異性IgG抗體的血清學(xué)轉(zhuǎn)換（動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)2份或以上的血清IgG，恢復(fù)期與急性期比較IgG呈4倍以上升高）、核酸檢測(cè)等方法，對(duì)于B19病毒感染急性期的判斷應(yīng)密切結(jié)合患者的臨床診斷綜合進(jìn)行。

2.受試者選擇及樣本收集

臨床試驗(yàn)方案中應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)用體外診斷試劑的預(yù)期用途、適用人群和檢測(cè)要求等合理確定臨床試驗(yàn)受試者選擇要求，包括：受試者入組/排除標(biāo)準(zhǔn)、樣本收集的前瞻性和回顧性設(shè)計(jì)等，并在臨床試驗(yàn)過程中嚴(yán)格遵循。

臨床試驗(yàn)的入組人群應(yīng)為產(chǎn)品的預(yù)期適用人群，包括各種可能接受B19病毒感染檢查的人群，例如具有疑似B19病毒感染癥狀的人群。

入組人群應(yīng)包含不同年齡段、不同性別人群，以及一定數(shù)量的孕婦、免疫功能受損、接受免疫抑制治療的人群，應(yīng)盡量覆蓋各類適用人群。

建議臨床試驗(yàn)采用前瞻性收集的樣本進(jìn)行研究，同時(shí)，在嚴(yán)格控制偏倚的前提下，允許入組部分符合要求的回顧性樣本。

另外，建議根據(jù)流行病學(xué)證據(jù)納入不同地區(qū)的患者/人群，以研究本產(chǎn)品的臨床檢出能力。

3.臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)數(shù)量及要求

該類產(chǎn)品臨床試驗(yàn)應(yīng)在三家及以上符合要求的臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)開展。申辦者應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特點(diǎn)及其預(yù)期用途，綜合流行病學(xué)背景，選擇具有一定地域代表性的機(jī)構(gòu)開展臨床試驗(yàn)。原則上應(yīng)具有相關(guān)學(xué)科的優(yōu)勢(shì)，實(shí)驗(yàn)操作人員有足夠的時(shí)間熟悉檢測(cè)系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)，熟悉評(píng)價(jià)方案。

4.樣本類型

B19病毒抗體檢測(cè)試劑的樣本類型通常涉及血清、血漿等。如血清與血漿樣本之間經(jīng)研究不存在性能差異，可以在各具有一定數(shù)量陰/陽性樣本的前提下，通過合并統(tǒng)計(jì)的方式證明兩種樣本類型的適用性。

臨床樣本的采集、處理、保存等應(yīng)分別滿足臨床試驗(yàn)中所涉及各產(chǎn)品說明書相關(guān)要求。

5.臨床試驗(yàn)樣本量估算

適當(dāng)?shù)臉颖玖渴潜ＷC申報(bào)產(chǎn)品臨床性能得到準(zhǔn)確評(píng)價(jià)的必要條件。臨床試驗(yàn)樣本量應(yīng)滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)要求，可采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行估算。

當(dāng)采用申報(bào)產(chǎn)品與已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)時(shí)，可采用單組目標(biāo)值法樣本量公式估算最低樣本量。

公式中，n為樣本量；Z1-α/2、Z1-β為顯著性水平和把握度的標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布的分?jǐn)?shù)位，P0為評(píng)價(jià)指標(biāo)的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)，PT為試驗(yàn)用體外診斷試劑評(píng)價(jià)指標(biāo)預(yù)期值。

對(duì)于B19病毒抗體檢測(cè)試劑的臨床陰/陽性符合率，基于目前的科學(xué)認(rèn)識(shí)，建議P0不低于90%。當(dāng)選定的產(chǎn)品的符合率預(yù)期值（PT）遠(yuǎn)高于預(yù)期目標(biāo)值時(shí)，應(yīng)采用其他的方法進(jìn)行樣本類的估算。當(dāng)評(píng)價(jià)指標(biāo)P接近100%時(shí)，上述樣本量估算方法可能不適用，應(yīng)考慮選擇更加適宜的方法進(jìn)行樣本量估算，如精確概率法等。

臨床試驗(yàn)樣本量除需滿足上述統(tǒng)計(jì)學(xué)估算的最低樣本量要求外，還應(yīng)保證入組病例覆蓋受試者的各種特征；臨床試驗(yàn)樣本應(yīng)包含一定數(shù)量的醫(yī)學(xué)決定水平附近樣本或灰區(qū)樣本。

6.臨床評(píng)價(jià)指標(biāo)的選擇與統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

臨床評(píng)價(jià)指標(biāo)應(yīng)在臨床試驗(yàn)的設(shè)計(jì)階段確定，并在臨床試驗(yàn)方案中予以明確。

對(duì)于此類檢測(cè)試劑的比較研究試驗(yàn)，臨床評(píng)價(jià)指標(biāo)主要包括試驗(yàn)用體外診斷試劑與已上市同類產(chǎn)品相比的陽性符合率、陰性符合率等。統(tǒng)計(jì)分析一般以2×2表的形式總結(jié)兩種分析方法的檢測(cè)結(jié)果，并據(jù)此計(jì)算陽性符合率、陰性符合率、總符合率等指標(biāo)及其95%可信區(qū)間。除此之外，還應(yīng)同時(shí)進(jìn)行假設(shè)檢驗(yàn)評(píng)價(jià)兩種分析方法的一致性。結(jié)果不符樣本的復(fù)核結(jié)果不應(yīng)納入上述統(tǒng)計(jì)。

7.結(jié)果不符的樣本

對(duì)于比較研究試驗(yàn)中申報(bào)產(chǎn)品與對(duì)比產(chǎn)品檢測(cè)不一致的結(jié)果，應(yīng)進(jìn)行合理的分析。如采用實(shí)驗(yàn)室參考方法或第三方檢測(cè)試劑進(jìn)行確認(rèn)，結(jié)果不應(yīng)用于修訂原有統(tǒng)計(jì)結(jié)果。

（八）產(chǎn)品技術(shù)要求

申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)申請(qǐng)人產(chǎn)品研制以及前期性能評(píng)價(jià)的結(jié)果，依據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及相關(guān)文獻(xiàn)，按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》（原國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號(hào)）的有關(guān)要求，編寫產(chǎn)品技術(shù)要求。

B19病毒IgM/IgG抗體檢測(cè)試劑的產(chǎn)品性能指標(biāo)應(yīng)主要包括：陰/陽性參考品符合率、最低檢測(cè)限、精密度等。

如果申報(bào)試劑已有適用的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品、參考品發(fā)布，則申請(qǐng)人應(yīng)在產(chǎn)品技術(shù)要求中提出符合性的要求。

按照《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》的規(guī)定，此類產(chǎn)品為第三類體外診斷試劑，申請(qǐng)人應(yīng)按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》的要求，以附錄形式明確主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品要求，附錄的編制應(yīng)符合相關(guān)編寫規(guī)范的要求。

（九）產(chǎn)品檢驗(yàn)報(bào)告

根據(jù)《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》的要求，申請(qǐng)注冊(cè)的第三類體外診斷試劑產(chǎn)品應(yīng)在具有相應(yīng)醫(yī)療器械檢驗(yàn)資質(zhì)和承檢范圍的醫(yī)療器械檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)進(jìn)行連續(xù)3個(gè)生產(chǎn)批次樣品的產(chǎn)品檢驗(yàn)。

對(duì)于已經(jīng)有國(guó)家參考品的項(xiàng)目，應(yīng)提供產(chǎn)品能夠符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品、參考品要求的產(chǎn)品檢驗(yàn)報(bào)告。對(duì)于目前尚無國(guó)家參考品的項(xiàng)目，提供產(chǎn)品能夠符合企業(yè)參考品要求的產(chǎn)品檢驗(yàn)報(bào)告。

（十）產(chǎn)品說明書

1.【預(yù)期用途】

產(chǎn)品預(yù)期用途的描述應(yīng)符合現(xiàn)行的疾病診療指南、專家共識(shí)。應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

1.1該產(chǎn)品用于體外定性檢測(cè)人體血清或血漿等樣本中的人細(xì)小病毒B19lgM/lgG抗體。

適用樣本類型應(yīng)結(jié)合申報(bào)產(chǎn)品臨床性能的確認(rèn)情況進(jìn)行描述。

1.2病毒特征以及臨床適應(yīng)癥背景：簡(jiǎn)要描述B19病毒生物學(xué)特征及致病性，感染后臨床表現(xiàn)，相關(guān)的臨床或?qū)嶒?yàn)室診斷方法等。人群中B19病毒特異性抗體的陽性率，不同類型B19病毒抗體的產(chǎn)生、持續(xù)時(shí)間、臨床提示作用及與B19病毒感染診斷的其他方法的關(guān)聯(lián)等。

1.3目標(biāo)人群：依據(jù)臨床試驗(yàn)的入組人群進(jìn)行編寫。

1.4產(chǎn)品功能：結(jié)合目標(biāo)人群的臨床表現(xiàn)和其他診斷指標(biāo)，用于B19病毒感染的輔助診斷。

1.5明確B19病毒抗體檢測(cè)不得用于無癥狀人群的產(chǎn)前篩查；不得將本試劑的檢測(cè)結(jié)果單獨(dú)作為終止妊娠的依據(jù)。

2.【主要組成成分】

2.1說明試劑盒包含組分的名稱、數(shù)量、比例或濃度等信息，質(zhì)控品應(yīng)明確具體基質(zhì)成分。對(duì)于膠體金試劑應(yīng)描述試劑條/卡結(jié)構(gòu)組成。校準(zhǔn)品應(yīng)明確溯源性，質(zhì)控品應(yīng)提交靶值單。明確不同批次組分能否混用。

2.2介紹檢測(cè)中使用的抗原/抗體信息及標(biāo)記物信息，包括抗原的性質(zhì)（如純化的天然抗原、重組抗原等）、抗體的動(dòng)物源性、抗體的性質(zhì)（單克隆或多克隆）、標(biāo)記物種類等。

2.3試劑盒中不包含但對(duì)該項(xiàng)檢測(cè)必須的組分，企業(yè)應(yīng)列出相關(guān)試劑的名稱、注冊(cè)證號(hào)/備案號(hào)（如有）、貨號(hào)等其他相關(guān)信息。

3.【儲(chǔ)存條件及有效期】

詳細(xì)介紹試劑盒的效期穩(wěn)定性、開封穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性等信息。

4.【適用機(jī)型】

對(duì)于采用酶聯(lián)免疫吸附法的檢測(cè)試劑應(yīng)明確適用酶標(biāo)儀的波長(zhǎng)要求，其他方法學(xué)的檢測(cè)試劑應(yīng)明確具體的適用機(jī)型型號(hào)。

5.【樣本要求】重點(diǎn)明確以下內(nèi)容

5.1樣本采集前的要求：如采集時(shí)間、采集量，是否受臨床癥狀、用藥情況等因素的影響。

5.2樣本采集：說明采集方法及樣本類型，對(duì)于血漿樣本，應(yīng)注明對(duì)抗凝劑的要求。

5.3干擾物的影響：明確常見干擾物對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果是否產(chǎn)生影響，明確可接受的最大干擾物濃度。

5.4樣本處理及保存：樣本處理方法、保存條件（如冷藏、冷凍等）及不同保存條件下的保存時(shí)限和運(yùn)輸條件等。冷藏、冷凍樣本檢測(cè)前是否需要恢復(fù)室溫，冷凍樣本的凍融次數(shù)限制等。

6.【檢驗(yàn)方法】

詳細(xì)說明試驗(yàn)操作的各個(gè)步驟：

6.1實(shí)驗(yàn)環(huán)境：檢測(cè)試劑及樣本的復(fù)溫要求等。

6.2試劑配制方法，試劑開封后使用方法等。

6.3高濃度樣本稀釋的方法。

6.4試驗(yàn)條件：操作步驟、溫度、時(shí)間、儀器波長(zhǎng)等。

6.5定標(biāo)（如適用）：標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定，對(duì)需要進(jìn)行重新定標(biāo)情況的說明及對(duì)定標(biāo)周期的建議。

6.6質(zhì)量控制：操作步驟，質(zhì)控結(jié)果的要求（試驗(yàn)有效性的判斷），質(zhì)控結(jié)果不符合要求的處理方式。

6.7對(duì)于膠體金法檢測(cè)試劑可以圖示形式顯示正確的檢驗(yàn)操作方法、程序及注意事項(xiàng)等。特別注意應(yīng)強(qiáng)調(diào)操作溫度及濕度條件、讀取結(jié)果的時(shí)間。

6.8特別說明檢驗(yàn)操作過程中的注意事項(xiàng)。

7.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

詳細(xì)描述檢測(cè)結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)。

建議參考相關(guān)臨床診療指南進(jìn)行描述，包括所有可能出現(xiàn)的B19IgM/IgG結(jié)果組合及相應(yīng)的解釋，后續(xù)的處理措施等。如有灰區(qū)判定，應(yīng)詳細(xì)說明灰區(qū)樣本的處理方式。

8.【檢驗(yàn)方法局限性】

結(jié)合產(chǎn)品的預(yù)期用途、臨床適應(yīng)癥背景、檢測(cè)方法及適用人群等，對(duì)可能出現(xiàn)的局限性進(jìn)行相關(guān)說明。

9.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

詳述以下性能指標(biāo)：

9.1對(duì)相應(yīng)國(guó)家參考品（如有）檢測(cè)的符合情況。

9.2企業(yè)內(nèi)部陽性和陰性參考品符合率。

9.3最低檢測(cè)限：簡(jiǎn)要介紹評(píng)價(jià)方法、所用樣本以及評(píng)價(jià)結(jié)果。

9.4分析特異性

9.4.1交叉反應(yīng)：詳述交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病原體種類，及有/無交叉反應(yīng)的濃度水平。

9.4.2干擾物質(zhì)：說明驗(yàn)證的干擾物質(zhì)種類及有/無干擾反應(yīng)的濃度水平。

9.5精密度：簡(jiǎn)要介紹評(píng)價(jià)方法、所用樣本以及評(píng)價(jià)結(jié)果。

9.6鉤狀（HOOK）效應(yīng)：對(duì)鉤狀效應(yīng)的驗(yàn)證情況進(jìn)行總結(jié)。

9.7包容性驗(yàn)證：簡(jiǎn)要介紹樣本來源和結(jié)論。

10.【注意事項(xiàng)】

應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

10.1有關(guān)試劑盒內(nèi)人源組分（如有）生物安全性的警告。如：試劑盒內(nèi)對(duì)照品（質(zhì)控品）或其他可能含有人源物質(zhì)的組分，雖已經(jīng)通過了乙型肝炎病毒表面抗原（HBs-Ag）、人類免疫缺陷病毒1/2型抗體（HIV1/2-Ab）、丙型肝炎病毒抗體（HCV-Ab）等項(xiàng)目的檢測(cè)，結(jié)果為陰性，但截至目前，沒有任何一項(xiàng)檢測(cè)可以確保絕對(duì)安全，故仍應(yīng)將這些組分作為潛在傳染源對(duì)待。

10.2有關(guān)實(shí)驗(yàn)操作、樣本保存及處理等其他注意事項(xiàng)。

三、參考文獻(xiàn)

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四、起草單位

國(guó)家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評(píng)中心。