附件：乙型肝炎病毒e抗原、e抗體檢測試劑注冊技術(shù)審查指導原則（2020年第16號）.doc

乙型肝炎病毒e抗原、e抗體檢測試劑注冊
技術(shù)審查指導原則

本指導原則旨在指導注冊申請人對乙型肝炎病毒e抗原、e抗體檢測試劑注冊申報資料的準備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門審評注冊申報資料提供參考。

本指導原則是針對乙型肝炎病毒e抗原、e抗體檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進行充實和細化。

本指導原則是供申請人和審查人員使用的指導性文件，不涉及注冊審批等行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如有能夠滿足法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應(yīng)提供詳細的研究資料和驗證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導原則。

本指導原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標準體系及當前認知水平下制定的，隨著法規(guī)、標準的不斷完善和科學技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進行調(diào)整。

一、適用范圍

（一）背景簡介

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）屬嗜肝DNA 病毒科，是乙型病毒性肝炎的病原體。HBV 主要經(jīng)血（如不安全注射等）、母嬰及性接觸傳播。HBV 感染呈世界性流行，但不同地區(qū)HBV感染的流行強度差異很大。據(jù)世界衛(wèi)生組織報道，全球約20億人曾感染HBV，其中2.4 億人為慢性HBV感染者，每年約有65萬人死于HBV感染所致的肝功能衰竭、肝硬化和肝細胞癌（HCC）。

通過免疫學方法檢測HBV標志物是臨床最常用的HBV感染的病原學診斷方法。HBV具有三個抗原系統(tǒng)，如：乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）與乙型肝炎病毒表面抗體（抗-HBs）、乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）與乙型肝炎病毒e抗體（抗-HBe）、乙型肝炎病毒核心抗體（抗-HBc）及抗-HBc-IgM。HBV抗原與抗體的血清學標志物與臨床關(guān)系復雜，必須對幾項標志物綜合分析，方有助于臨床診療。

HBeAg是從病毒C基因的第一個起始密碼子開始翻譯產(chǎn)生的包含Pre C及C序列的蛋白，該蛋白經(jīng)細胞內(nèi)蛋白酶切除其N端19個氨基酸及C端34個氨基酸后成為可分泌的e抗原。HBeAg為可溶性蛋白質(zhì)，產(chǎn)生后分泌入血，在患者癥狀出現(xiàn)后大約1周出現(xiàn)，通常在幾周后消失，但在HBV慢性感染者體內(nèi)可能持續(xù)存在。

血清HBeAg與HBV復制及疾病傳染性相關(guān)，HBV感染患者的血清中存在HBeAg是病毒活躍復制的指標。在HBsAg陽性人群中，HBeAg的消失以及抗-HBe的出現(xiàn)是血清學轉(zhuǎn)換的標志，表示病毒復制活躍程度的下降。但是，臨床上存在病毒復制活躍的患者血清中HBeAg為陰性的情況，如：HBV基因組前C區(qū)1896位堿基的終止密碼變異，可導致HBeAg陰性。

（二）本指導原則適用范圍

1.本指導原則適用于利用酶聯(lián)免疫法、化學發(fā)光法、時間分辨免疫熒光法等免疫學方法，對來源于血清或血漿等人體樣本中的HBeAg、抗-HBe進行體外檢測，其臨床預期用途如下：

1.1HBeAg適用于：急性及慢性乙型肝炎病毒感染的輔助診斷；慢性乙型肝炎病毒感染者HBeAg陽性與陰性人群區(qū)分；慢性乙型肝炎患者HBeAg 血清學轉(zhuǎn)換的判定。該指標定量檢測可用于抗病毒療效的監(jiān)測等。

1.2抗-HBe適用于：急性及慢性乙型肝炎病毒感染的輔助診斷及慢性乙型肝炎患者HBeAg 血清學轉(zhuǎn)換的判定。目前該標志物定量檢測的臨床意義尚不明確。

2.本指南適用于檢測HBeAg、抗-HBe的定性檢測試劑，關(guān)于HBeAg的定量檢測可參考本指南。

二、注冊申報資料要求

（一）綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品預期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、有關(guān)產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評價以及其他等內(nèi)容。其中，與預期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)癥應(yīng)重點描述申報產(chǎn)品臨床預期用途，包括適用人群、適應(yīng)癥及臨床使用環(huán)境；產(chǎn)品描述應(yīng)明確申報產(chǎn)品主要組成成分及檢測原理；同類產(chǎn)品在國內(nèi)外批準上市的情況，應(yīng)著重從預期用途、產(chǎn)品性能等方面寫明擬申報產(chǎn)品與目前市場上已獲批準的同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。綜述資料的撰寫應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）的相關(guān)要求。

（二）主要原材料研究資料

1.主要原材料的范圍

體外診斷試劑產(chǎn)品主要原材料是指影響檢測反應(yīng)的靈敏度與特異性的生物活性物質(zhì)，本指導原則涉及產(chǎn)品的主要原材料如下：

1.1 HBeAg檢測試劑：包被用抗-HBe，標記用抗-HBe，反應(yīng)體系中各種信號放大、顯示系統(tǒng)中涉及的生物活性物質(zhì)，試劑盒中包含的定標液/對照品（如涉及）、質(zhì)控品（如涉及）等。

1.2抗-HBe檢測試劑：包被用抗-HBe，標記用抗-HBe，HBeAg，反應(yīng)體系中各種信號放大、顯示系統(tǒng)中涉及的生物活性物質(zhì)，試劑盒中包含的定標液/對照品（如涉及）、質(zhì)控品（如涉及）等。

2.主要原材料的篩選

申請人應(yīng)提供主要原材料的篩選過程及相關(guān)研究資料。主要原材料的篩選過程應(yīng)有科學合理的實驗設(shè)計、完整的實驗過程、詳實的實驗數(shù)據(jù)及統(tǒng)計分析過程，申請人應(yīng)能夠依據(jù)研究過程確定產(chǎn)品的主要原材料。

2.1如主要原材料為外購，應(yīng)確定供應(yīng)商名稱，供應(yīng)商應(yīng)為原材料的生產(chǎn)商，供應(yīng)商應(yīng)固定，不得隨意更換。同時，抗原應(yīng)明確抗原名稱、生物學來源；抗體明確抗體名稱、生物學來源、刺激免疫原名稱及其來源（天然或重組）、克隆號（如為單克隆抗體）等信息。

2.2如主要原材料為申請人自制，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)明確原材料的制備原理，描述制備過程。如抗原為天然抗原，應(yīng)明確抗原制備所選病毒毒株、病毒的培養(yǎng)、抗原提取及純化、抗原鑒定等方法及相關(guān)參數(shù)；如為重組抗原，則應(yīng)寫明目的基因的選擇及來源、基因克隆過程（如特定脫氧核糖核酸（DNA）分子的體外處理、重組連接、轉(zhuǎn)化和宿主細胞繁殖等實驗過程）、抗原表達及抗原純化鑒定等方法及相關(guān)參數(shù)。針對主要原材料抗體，應(yīng)明確免疫刺激原的名稱及來源。如為多克隆抗體，應(yīng)明確免疫動物品系及抗體的收集、純化過程；如為單克隆抗體，應(yīng)明確免疫動物品系，雜交瘤細胞的制備、細胞的培養(yǎng)及抗體的收集、純化過程。

3.主要原材料的質(zhì)量控制標準

主要原材料的質(zhì)量控制標準是生產(chǎn)企業(yè)對主要原材料的質(zhì)量控制，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)依據(jù)質(zhì)量控制標準對原材料進行檢驗，檢驗合格方可用于生產(chǎn)。申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品生產(chǎn)需求，制定科學、合理的主要原材料質(zhì)量控制標準，在制定標準過程中建議遵循以下幾點：

3.1 主要原材料的質(zhì)量控制標準應(yīng)包括相應(yīng)實驗方法及原材料應(yīng)達到的客觀評價標準。

3.2主要原材料的質(zhì)量控制標準，應(yīng)至少包括原材料的功能性指標要求，功能性指標可以為功能性實驗指標或其他體現(xiàn)原材料相應(yīng)生物活性的指標。

3.3人源或其他生物源性原材料質(zhì)量控制標準中應(yīng)包含生物安全性指標。

3.4對于涉及標記的主要原材料，如外購方提供的為已標記好的原材料，則原材料質(zhì)量控制標準除了對原材料本身的質(zhì)量控制外，還應(yīng)依據(jù)標記物特性，針對標記物制定相應(yīng)的質(zhì)量控制標準。

3.5質(zhì)控品、定標液/對照品，主要原材料質(zhì)量控制標準除被分析物外，還應(yīng)包含基質(zhì)的質(zhì)量控制標準，例如基質(zhì)中被分析物的濃度要求、陰陽性要求及生物安全性指標（如適用），質(zhì)控品應(yīng)明確賦值方法。

本指導原則涉及的主要原材料常見的質(zhì)量控制指標見表1。申請人可根據(jù)產(chǎn)品生產(chǎn)及質(zhì)量控制需求，針對主要原材料制定合理的控制標準。申請人需在申報資料中提供依據(jù)主要原材料的質(zhì)量控制標準對原材料進行質(zhì)檢的資料，如主要原材料為外購，還需提供主要原材料供應(yīng)商的出廠檢測報告。

4.企業(yè)參考品

申請人應(yīng)提交企業(yè)參考品的原料選擇、制備、陰陽性確認等詳細研究資料。

企業(yè)參考品的基質(zhì)建議與申報產(chǎn)品適用的樣本類型一致。企業(yè)參考品應(yīng)至少包括：陽性參考品、陰性參考品、檢測限參考品、精密度參考品。參考品設(shè)置建議參考國家參考品，陽性參考品應(yīng)著重考慮抗原濃度/抗體滴度要求，陰性參考品則主要考慮對產(chǎn)品分析特異性（交叉反應(yīng)）的驗證情況。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料

1.主要生產(chǎn)工藝介紹，可用流程圖方式表示，并簡要說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。

2.產(chǎn)品基本反應(yīng)原理介紹，HBeAg檢測試劑一般采用雙抗體夾心法，抗-HBe檢測試劑一般為競爭法。

3.申請人應(yīng)提供產(chǎn)品生產(chǎn)工藝確定的研究資料，如：包被工藝、標記工藝（如涉及）、顯色（發(fā)光）系統(tǒng)等研究資料。

4.反應(yīng)條件確定：申請人應(yīng)考慮反應(yīng)時間、反應(yīng)溫度、洗滌次數(shù)等條件對產(chǎn)品性能的影響，通過實驗確定上述條件的最佳組合。如涉及，申請人應(yīng)提供酶催化底物（發(fā)光或變色）的最適條件研究。

5.體系中樣品加樣方式及加樣量確定：申請人應(yīng)考慮樣品加樣方式、加樣量對產(chǎn)品檢測結(jié)果的影響，通過實驗確定最佳的加樣方式及加樣量。如樣本需采取稀釋或其他必要的方法進行處理后方可用于最終檢測，申請人還應(yīng)對可用于樣本稀釋的基質(zhì)或處理方法進行研究，通過實驗確定最終選擇的用于樣本稀釋的基質(zhì)或處理方法。

6.不同適用機型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別研究。

（四）分析性能評估資料

申請人應(yīng)提交產(chǎn)品所有性能評價的研究資料，對于每項分析性能的評價都應(yīng)包括具體研究目的、實驗方法、可接受標準、實驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計方法等詳細資料。有關(guān)分析性能驗證的背景信息也應(yīng)在申報資料中有所體現(xiàn)，包括實驗地點、適用儀器、試劑規(guī)格、批號、臨床樣本來源等。

分析性能評價的實驗方法可以參考國際或國內(nèi)有關(guān)體外診斷試劑性能評估的指導原則進行。對于此類產(chǎn)品，性能評估中所用樣品（除非特別說明）可參考上述企業(yè)參考品的制備要求。各項性能評價應(yīng)符合以下要求。

1.陰/陽性參考品符合率

申請人應(yīng)考察申報產(chǎn)品檢測企業(yè)陰/陽性參考品的符合情況，陽性參考品重在評估產(chǎn)品包容性，陰性參考品旨在評價試劑特異性。企業(yè)參考品的檢測應(yīng)符合參考品說明書的要求。

2.最低檢測限（分析靈敏度）

申報產(chǎn)品最低檢測限的性能評估資料應(yīng)包含最低檢測限的確定及驗證過程。

2.1選取至少3份高濃度臨床樣本，采用臨床參考方法或國家/國際標準品對其檢測靶物質(zhì)濃度進行確定，之后將臨床樣本做系列倍比稀釋，將檢測結(jié)果的陽性率在90%～95%（n≥20）的最大稀釋倍數(shù)作為試劑盒的最低檢測限。

2.2申報產(chǎn)品檢測企業(yè)最低檢測限參考品，檢測結(jié)果應(yīng)滿足相應(yīng)要求。

3.準確性

采用多份陰性及陽性臨床樣本，將試驗用體外診斷試劑與已上市同類產(chǎn)品等進行對比試驗，評價檢測結(jié)果一致性。臨床樣本收集過程中應(yīng)考慮不同濃度及患者感染病毒的基因型（我國主要流行的B、C、D型）。

4.精密度

企業(yè)應(yīng)對申報產(chǎn)品精密度指標，如標準差或變異系數(shù)等評價標準作出合理要求。因模擬樣本并不能體現(xiàn)臨床樣本可能帶來的所有變異因素，因此精密度評價中所用樣本應(yīng)至少包含精密度參考品及若干臨床樣本。針對本類產(chǎn)品的精密度評價主要包括以下要求：

4.1對可能影響檢測精密度的主要變量進行驗證，除檢測試劑本身的影響外，還應(yīng)對分析儀、操作者、實驗地點、檢測批次等要素進行相關(guān)的驗證。

4.2設(shè)定合理的精密度評價周期，例如：為期至少20天的檢測，每天至少由2人完成不少于2次的完整檢測，從而對批內(nèi)/批間、日內(nèi)/日間以及不同操作者之間的精密度進行綜合評價。

4.3用于精密度評價的臨床樣本均應(yīng)至少包含3個水平：臨界陽性樣品、中及強陽性樣品，并根據(jù)產(chǎn)品特性設(shè)定適當?shù)木芏纫蟆?/p>

5.分析特異性

5.1交叉反應(yīng)：

申請人應(yīng)針對可能出現(xiàn)在檢測樣本中的病原體進行交叉反應(yīng)驗證，用于交叉反應(yīng)驗證的樣品，除乙型肝炎病毒相關(guān)標志物外，評估 HBeAg檢測試劑交叉反應(yīng)的樣本應(yīng)盡量采用滅活病原體培養(yǎng)物或臨床相關(guān)病原體抗原陽性樣本；評估抗-HBe檢測試劑交叉反應(yīng)的樣本應(yīng)盡量采用臨床相關(guān)病原體抗體陽性樣本。病原體種類應(yīng)包括人類EB病毒（EBV）、巨細胞病毒（CMV）、人類免疫缺陷病毒（HIV）、乙型肝炎病毒（表面抗原/抗體、核心抗體）、丙型肝炎病毒（HCV）等。建議在病毒感染的醫(yī)學決定水平進行交叉反應(yīng)的驗證，申請人應(yīng)詳細說明交叉反應(yīng)樣本來源、病原體鑒定和滴度確定的方法和結(jié)果等。

5.2干擾物質(zhì)

應(yīng)根據(jù)所采集樣本類型，針對可能存在的干擾情況進行驗證。建議申請人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度條件（“最差條件”）下進行評價，干擾物質(zhì)的選取應(yīng)至少包括：血紅蛋白、膽紅素、甘油三酯、類風濕因子、自身抗體及常見治療性藥物等。建議采用弱陽性水平樣本對每種干擾物質(zhì)的干擾影響進行檢測。

5.3其他

抗凝劑研究，如申請人聲稱產(chǎn)品適用樣本類型為血漿或血清，建議申請人采用血清血漿同源比對的方式對抗凝劑干擾進行研究，研究應(yīng)能夠覆蓋所有聲稱的抗凝劑種類。

6.鉤狀（HOOK）效應(yīng)

須采用多份高濃度樣本進行梯度稀釋后由低濃度至高濃度開始檢測，每個梯度的稀釋液重復3～5份，對鉤狀效應(yīng)進行合理的驗證。用于該項研究的樣本可為人工構(gòu)建樣本，建議在產(chǎn)品說明書上明示對鉤狀效應(yīng)的研究結(jié)果。申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的反應(yīng)原理選擇是否進行此項研究。

7.血清學轉(zhuǎn)換研究

如果申報產(chǎn)品聲稱檢測試劑還適用于血清學轉(zhuǎn)換的檢測，應(yīng)進行相應(yīng)性能研究。可采用申報產(chǎn)品與已上市同類產(chǎn)品同時檢測不少于五套經(jīng)充分確認的乙型肝炎患者系列采集樣本，也可采用申報產(chǎn)品檢測不少于五套的商業(yè)化的血清轉(zhuǎn)換盤。研究應(yīng)當顯示出患者發(fā)生血清學轉(zhuǎn)換過程中HBeAg消失、抗-HBe出現(xiàn)的趨勢，同時，申報產(chǎn)品檢測結(jié)果應(yīng)與已上市同類產(chǎn)品檢測結(jié)果一致，或滿足商業(yè)化的血清轉(zhuǎn)換盤的使用要求。

（五）陽性判斷值確定資料

此類產(chǎn)品臨界值通常采用定標液/對照品檢測結(jié)果經(jīng)特定的計算公式得出，樣本檢測結(jié)果通過與臨界值進行比較以判斷檢測結(jié)果的陰陽性。建議申請人采用受試者工作特征（ROC）曲線的方式進行臨界值的研究，明確臨界值的計算公式。研究過程中應(yīng)選取適當?shù)呐R床樣本，應(yīng)包括經(jīng)確認的標志物為陽性的樣本及經(jīng)確認標志物為陰性的樣本。研究所需的樣本量應(yīng)滿足統(tǒng)計學要求。

如申報產(chǎn)品陽性判斷值包含灰區(qū)，應(yīng)明確灰區(qū)的確定依據(jù)，并提供相應(yīng)支持性資料。

在陽性判斷值設(shè)定后，申請人應(yīng)當選取一定數(shù)量陰、陽性真實臨床樣本進行實驗驗證。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。前者主要包括實時穩(wěn)定性（有效期）、開瓶穩(wěn)定性等研究，申請人可根據(jù)實際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實施方案、詳細的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對于實時穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

申請人應(yīng)對樣本穩(wěn)定性進行研究，主要包括冷藏和冷凍兩種條件下的有效期驗證，可以在合理的溫度范圍內(nèi)，每間隔一定的時間段對儲存樣本進行性能分析驗證，從而確認不同類型樣本的穩(wěn)定性。適于冷凍保存的樣本還應(yīng)對凍融次數(shù)進行評價。

試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果均應(yīng)在說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】兩項中進行詳細說明。

（七）臨床試驗

臨床試驗的開展、方案的制定以及報告的撰寫等均應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)及《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導原則》的要求。

1.研究方法

該類產(chǎn)品臨床試驗建議采用觀察性研究。臨床試驗可采用試驗用體外診斷試劑與已上市同類產(chǎn)品（對比試劑）進行比較研究，評價兩種方法檢測結(jié)果的一致性，評價指標通常包括陽性符合率、陰性符合率等。對比試劑在預期用途、適用人群、樣本類型、檢測方法學、檢測性能等方面應(yīng)與試驗用體外診斷試劑具有較好的可比性。

如申報產(chǎn)品在該類產(chǎn)品現(xiàn)有的臨床預期用途下，有新的臨床預期用途（如：定量檢測產(chǎn)品的治療效果監(jiān)測等），應(yīng)采用試驗用體外診斷試劑與臨床參考標準進行比較研究，對產(chǎn)品新預期用途進行臨床評價。臨床參考標準是指現(xiàn)有條件下臨床上可獲得的能夠用來確定受試者目標狀態(tài)的最佳方法，通常來自臨床和實驗室的醫(yī)學實踐，包括患者跟蹤隨訪等。

如申報產(chǎn)品性能優(yōu)于已上市同類產(chǎn)品，如產(chǎn)品靈敏度顯著高于已上市同類產(chǎn)品，可將試驗用體外診斷試劑與臨床參考標準的比較研究和試驗用體外診斷試劑與境內(nèi)已上市同類產(chǎn)品的比較研究相結(jié)合，對產(chǎn)品的臨床性能進行綜合評價，從而支持預期用途所聲稱的內(nèi)容。

2.受試者選擇及樣本收集

臨床試驗方案中應(yīng)根據(jù)試驗用體外診斷試劑的預期用途、目標人群和檢測要求等合理確定臨床試驗受試者的選擇要求和樣本收集方法，包括：受試者入組/排除標準、樣本收集的前瞻性和回顧性設(shè)計等。

根據(jù)產(chǎn)品臨床驗證的目的，入組人群應(yīng)包含不同年齡段、不同性別人群，以及一定數(shù)量的孕婦。入組人群還應(yīng)包括急性及慢性病毒性乙型肝炎患者，同時根據(jù)臨床驗證需要，入組病例應(yīng)包括不同疾病進展期（如：免疫耐受期、免疫活動期等）的患者。如申報產(chǎn)品聲稱可適用于“疾病監(jiān)測”，臨床試驗應(yīng)入組符合要求的病例，進行患者跟蹤隨訪研究。

臨床試驗中所涉及的樣本類型應(yīng)為實際臨床檢測中常用的樣本類型。如申報產(chǎn)品所適用的樣本類型同時包含血清、血漿等多個樣本類型，應(yīng)針對不同樣本類型進行同源比對。

建議臨床試驗采用前瞻性收集的樣本進行研究，同時，在嚴格控制偏倚的前提下，允許入組部分符合要求的既往留存樣本。

3.臨床試驗機構(gòu)數(shù)量和要求

該類產(chǎn)品臨床試驗應(yīng)在不少于3家（含3家）符合要求的臨床試驗機構(gòu)開展。申辦者應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特點及其預期用途，綜合不同地區(qū)乙型肝炎病毒流行情況等因素選擇具有代表性的機構(gòu)開展臨床試驗，包括受試人群的代表性等。

4.臨床評價指標

該類產(chǎn)品臨床評價指標主要包括試驗用體外診斷試劑與已上市同類產(chǎn)品相比的陽性符合率、陰性符合率等。如試驗用體外診斷試劑與臨床參考方法進行對比研究，其臨床評價標準應(yīng)包括臨床靈敏度、臨床特異度等。

5.臨床試驗樣本量估算

適當?shù)臉颖玖渴潜ＷC申報產(chǎn)品臨床性能得到準確評價的必要條件。臨床試驗樣本量應(yīng)滿足統(tǒng)計學要求，可采用適當?shù)慕y(tǒng)計學方法進行估算。臨床試驗樣本量估算的方法有很多，如單組目標值法、優(yōu)效性試驗的樣本量估算等。

HBeAg、抗-HBe檢測試劑為定性檢測產(chǎn)品，如臨床試驗采用申報產(chǎn)品與已上市同類產(chǎn)品進行比對的試驗設(shè)計，可采用單組目標值法樣本量公式估算最低樣本量。樣本量估算過程中，評價指標的臨床可接受標準（P0）即HBeAg、抗-HBe檢測試劑臨床陰/陽性符合率應(yīng)大于95%。

如申報產(chǎn)品性能顯著優(yōu)于已上市同類產(chǎn)品，可將試驗用體外診斷試劑與臨床參考標準的比較研究和試驗用體外診斷試劑與境內(nèi)已上市同類產(chǎn)品的比較研究相結(jié)合，進行臨床研究，可采用優(yōu)效性試驗樣本量估算的方法估算樣本量。

樣本量估算過程中需要考慮臨床試驗中病例的剔除率，一般而言，病例剔除率不應(yīng)高于10%。

臨床試驗樣本量除需滿足上述統(tǒng)計學估算的最低樣本量要求外，還應(yīng)保證入組病例覆蓋受試者的各種特征；如臨床試驗研究有更合理的樣本量估算方式，在說明其合理性后亦可采用。

6.統(tǒng)計分析

臨床試驗統(tǒng)計分析，應(yīng)與臨床試驗?zāi)康囊恢?，如臨床試驗?zāi)康臑轵炞C申報產(chǎn)品與已上市產(chǎn)品的一致性，統(tǒng)計分析一般以2×2表的形式總結(jié)兩種分析方法的檢測結(jié)果，并據(jù)此計算陽性符合率、陰性符合率、總符合率、Kappa值等指標及其可信區(qū)間。除此之外，還應(yīng)同時進行假設(shè)檢驗評價兩種分析方法的一致性。

如產(chǎn)品臨床試驗采用其他統(tǒng)計學模型進行統(tǒng)計分析，如優(yōu)效性試驗等，應(yīng)充分說明其合理性。

7.倫理學要求

臨床試驗必須符合赫爾辛基宣言的倫理學準則，必須獲得臨床試驗機構(gòu)倫理委員會的同意。研究者應(yīng)充分考慮臨床試驗用樣本的獲得和試驗結(jié)果對受試者的風險性，應(yīng)提交倫理委員會的審查意見。

8.質(zhì)量控制

臨床試驗開始前，建議進行臨床試驗的預試驗，以熟悉并掌握相關(guān)試驗方法的操作、儀器、技術(shù)性能等，最大限度控制試驗誤差。整個試驗過程都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準確性及可重復性。

9.接受境外臨床試驗數(shù)據(jù)要求

如進口產(chǎn)品提交境外臨床試驗資料作為臨床評價資料時，其境外臨床試驗資料在滿足《接受醫(yī)療器械境外臨床試驗數(shù)據(jù)技術(shù)指導原則》要求的基礎(chǔ)上，應(yīng)至少有一家臨床試驗機構(gòu)在中國境內(nèi)，檢測病例數(shù)不低于總病例數(shù)的1/3。評價過程應(yīng)評估境外和境內(nèi)人群中HBV的流行情況存在的差異。

（八）產(chǎn)品技術(shù)要求

申請人應(yīng)當在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)申請人產(chǎn)品研制、臨床評價等結(jié)果，依據(jù)國家標準、行業(yè)標準及有關(guān)文獻，按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的有關(guān)要求，編寫產(chǎn)品技術(shù)要求。

HBeAg、抗-HBe檢測試劑的產(chǎn)品性能指標應(yīng)主要包括：物理性狀、陰/陽性參考品符合率、精密度、最低檢測限等。申報試劑已有適用的國家標準品、參考品發(fā)布，申請人應(yīng)在產(chǎn)品技術(shù)要求中提出檢測要求。

按照《辦法》的規(guī)定，此類產(chǎn)品為第三類體外診斷試劑，申請人應(yīng)按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導原則》的要求，以附錄形式明確主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品要求，附錄的編制應(yīng)符合相關(guān)編寫規(guī)范的要求。

（九）產(chǎn)品檢驗報告

根據(jù)《辦法》的要求，首次申請注冊的第三類體外診斷試劑產(chǎn)品應(yīng)在具有相應(yīng)醫(yī)療器械檢驗資質(zhì)和承檢范圍的醫(yī)療器械檢驗機構(gòu)進行連續(xù)3個生產(chǎn)批次樣品的產(chǎn)品檢驗。產(chǎn)品檢驗報告應(yīng)符合相應(yīng)的國家標準品、參考品的要求。

（十）產(chǎn)品說明書

說明書承載了產(chǎn)品預期用途、樣本采集及處理、檢驗方法、檢驗結(jié)果的解釋以及注意事項等重要信息，是指導實驗室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗結(jié)果給出合理醫(yī)學解釋的重要依據(jù)，因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。產(chǎn)品說明書的格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求，進口體外診斷試劑的中文說明書除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說明書的一致性，翻譯力求準確且符合中文表達習慣。產(chǎn)品說明書中相關(guān)技術(shù)內(nèi)容均應(yīng)與申請人提交的注冊申報資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻，則應(yīng)以規(guī)范格式對此內(nèi)容進行標注，并單獨列明文獻的相關(guān)信息。

結(jié)合《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》的要求，HBeAg、抗-HBe檢測試劑說明書編寫應(yīng)重點關(guān)注以下內(nèi)容。

1.預期用途

產(chǎn)品預期用途的描述應(yīng)符合現(xiàn)行的疾病診療規(guī)范、防治指南、專家共識，其臨床試驗入組病例應(yīng)能夠覆蓋產(chǎn)品適用人群。如申報產(chǎn)品存在新的預期用途，應(yīng)有充分的臨床試驗證據(jù)作為支持。

2.檢驗結(jié)果的解釋

結(jié)合對照品（質(zhì)控品）以及樣本的檢測結(jié)果，對所有可能出現(xiàn)的結(jié)果組合及相應(yīng)的解釋進行詳述。檢驗結(jié)果的解釋應(yīng)以陽性判斷值的研究結(jié)論為依據(jù)。如有適用的臨床診療指南，則應(yīng)在此項下引用，相應(yīng)檢驗結(jié)果的解釋應(yīng)符合相關(guān)指南的要求。

3.檢驗方法的局限性

說明書應(yīng)對產(chǎn)品檢測的局限性進行說明，主要包括以下內(nèi)容：

3.1本試劑檢測結(jié)果應(yīng)結(jié)合患者臨床癥狀及其他相關(guān)醫(yī)學檢查結(jié)果進行綜合分析，不得單獨作為患者管理的依據(jù)。

3.2不合理的樣本采集、轉(zhuǎn)運及處理以及不當?shù)膶嶒灢僮骱蛯嶒灜h(huán)境均有可能導致假陰性或假陽性結(jié)果。

3.3申報產(chǎn)品應(yīng)明確不同病程不同階段樣本的陽性率不一致。

三、參考文獻

1.《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號），2014年7月30.

2.《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導原則》，（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第16號），2014年9月11日.

3.《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》，（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第17號），2014年9月11日.

4. 國家食品藥品監(jiān)督管理總局關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告（國家食品藥品監(jiān)管總局公告2014年第44號），2014年9月5日.

5. 中華醫(yī)學會肝病學分會，中華醫(yī)學會感染病學分會.慢性乙型肝炎防治指南（2015年版）.實用肝XVI臟病雜志，第19卷第3期2016年5月：V-XVI.

6. 徐道振.病毒性肝炎臨床實踐，人民衛(wèi)生出版社，2006.

7. European Association for the Study of the Liver. EASL 2017 clinical Practice Guidelines on the management of hepatitis B virus infection. Journal of Hepatology 2017，67：370-398.

8. Norah A. Terrault，et al. Update on Prevention，Diagnosis， and Treatment of Chronic Hepatitis B：AASLD 2018 Hepatitis B Guidance. HEPATOLOGY，2018，67（4）：1560-1599.

9. FDA. Review criteaia for assessment of Hepatitis B “e” antigen and antibody to Hepatitis B “e” antigen in vitro diagnostic devices. 1991.12.

四、起草單位

國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評中心。