附件：氨基酸、肉堿及琥珀酰丙酮檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2019年第80號）.doc

氨基酸、肉堿及琥珀酰丙酮檢測試劑注冊
技術(shù)審查指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對氨基酸、肉堿及琥珀酰丙酮檢測試劑（串聯(lián)質(zhì)譜法）注冊申報資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門對注冊申報資料的技術(shù)審評提供參考。

本指導(dǎo)原則是針對該類試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進行充實和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是供申請人和審查人員使用的指導(dǎo)性文件，不涉及注冊審批等行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應(yīng)提供詳細(xì)的研究資料和驗證資料。相關(guān)人員應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進行調(diào)整。

一、適用范圍

本指導(dǎo)原則提及的氨基酸、肉堿（包括游離肉堿和酰基肉堿）和琥珀酰丙酮分別是指針對遺傳代謝病的疾病標(biāo)記物。相關(guān)的遺傳代謝病主要包括氨基酸代謝障礙（Disorders of amino acid metabolism）、脂肪酸氧化障礙（Fatty Acid Oxidation disorders）和有機酸代謝障礙（Organic academia disorders）等。一般來說，氨基酸是氨基酸代謝障礙的疾病標(biāo)記物，游離肉堿與?；鈮A是脂肪酸氧化障礙和有機酸代謝障礙的標(biāo)記物，琥珀酰丙酮是酪氨酸血癥I型的主要標(biāo)記物。

遺傳代謝病的發(fā)病機理為維持機體正常代謝所必需的酶類、受體和載體等蛋白質(zhì)缺陷，導(dǎo)致機體的生化反應(yīng)和代謝異常，從而引起一系列臨床表現(xiàn)。其臨床表現(xiàn)主要包括神經(jīng)系統(tǒng)損害、代謝紊亂、相關(guān)器官功能異常、生長遲緩、皮膚及毛發(fā)異常、特殊氣味等。我國相對常見的遺傳代謝病如下表所示：

遺傳代謝病的臨床檢測方法一般包括實驗室生化檢測、影像學(xué)檢測、負(fù)荷試驗、酶學(xué)檢測、氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）分析、串聯(lián)質(zhì)譜（MS-MS）分析、基因檢測等。其中串聯(lián)質(zhì)譜法是臨床檢測的常用方法，其優(yōu)點包括：具有高分析效率和高靈敏度，能同時分析多種代謝物，涵蓋多種遺傳代謝??；可重復(fù)性好；操作相對簡單；干血斑采集和保存方便等。

氨基酸、肉堿及琥珀酰丙酮檢測試劑（串聯(lián)質(zhì)譜法）的預(yù)期用途為利用串聯(lián)質(zhì)譜分析方法，對全血干血斑樣本中氨基酸、肉堿和琥珀酰丙酮的含量進行測量，相關(guān)待測分析物濃度及分析物之間相互比例的異常，可能提示某種遺傳代謝病。其原理是使用含有內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品的溶液對干血斑進行萃取并采用串聯(lián)質(zhì)譜分析，每種待測分析物對于內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品的響應(yīng)程度與它的濃度成比例，根據(jù)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度即可計算分析物的濃度。

該類試劑使用的串聯(lián)質(zhì)譜主要為三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜和四極桿離子阱串聯(lián)質(zhì)譜（Q-trap）。掃描模式主要包括以下四種：前體離子（precursor ion, PI）掃描、中性丟失（NL）掃描、多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）掃描和產(chǎn)物離子（product ion,PI）掃描。前體離子掃描通常用于?；鈮A的分析檢測，在第二級質(zhì)量分析器中選擇特定質(zhì)荷比的產(chǎn)物離子，測定在第一級質(zhì)量分析器中一定質(zhì)量范圍內(nèi)所有能產(chǎn)生該碎片的前體離子。中性丟失掃描通常用于氨基酸的分析檢測，以恒定的質(zhì)量差異，在一定質(zhì)量范圍內(nèi)同時測定第一級、第二級質(zhì)量分析器中所有的前體離子和產(chǎn)物離子，檢測能產(chǎn)生特定中性碎片丟失的前體離子。多反應(yīng)監(jiān)測掃描是將第一級質(zhì)譜設(shè)定為用于篩選特定的前體離子，在第二級質(zhì)譜中指定所需的產(chǎn)物離子，同時監(jiān)測前體離子-產(chǎn)物離子。產(chǎn)物離子掃描是在第一級質(zhì)量分析器中選擇特定質(zhì)荷比的前體離子，測定該前體離子在第二級質(zhì)量分析器中，一定質(zhì)量范圍內(nèi)的所產(chǎn)生的特定產(chǎn)物離子。四種掃描模式各有優(yōu)缺點，在實際中應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特性選擇適合的掃描模式。

本指導(dǎo)原則適用于進行注冊申報和相關(guān)許可事項變更的產(chǎn)品。

本指導(dǎo)原則主要適用于利用串聯(lián)質(zhì)譜法，對干血斑樣本中相關(guān)物質(zhì)進行檢測的試劑，包括采用衍生法處理后對氨基酸和肉堿進行檢測的試劑和采用非衍生法對氨基酸、琥珀酰丙酮和肉堿進行檢測的試劑。對于遺傳代謝病相關(guān)的其他特征分析物或采用其他檢測方法（如基于抗原抗體反應(yīng)原理方法）、其他樣本類型進行的檢測，有利之處可參照執(zhí)行。本指導(dǎo)原則不適用于對相關(guān)疾病的確證和產(chǎn)前篩查項目。

二、注冊申報資料要求

（一）綜述資料

綜述資料主要包括臨床適應(yīng)癥背景情況、產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、有關(guān)產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評價以及其他內(nèi)容。其中，其他內(nèi)容包括同類產(chǎn)品在國內(nèi)外批準(zhǔn)上市的情況，應(yīng)著重從檢驗方法及臨床適用范圍等方面寫明擬申報產(chǎn)品與目前市場上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。綜述資料應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號，以下簡稱《辦法》）和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號，以下簡稱《公告》）的相關(guān)要求。

另外，建議申請人對以下幾方面內(nèi)容進行著重介紹：

1.相關(guān)遺傳代謝病的發(fā)病機理、臨床癥狀、臨床發(fā)病率、檢測方法、治療方法等。

2.待測分析物的名稱、種類、相應(yīng)的內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品、經(jīng)臨床驗證的遺傳代謝病與分析物間的對應(yīng)關(guān)系等。

3.串聯(lián)質(zhì)譜法的檢測原理、樣品前處理方法、掃描模式及選擇依據(jù)、數(shù)據(jù)采集及處理方法等。

（二）主要原材料的研究資料

應(yīng)提供主要原材料的選擇與來源、制備及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等的研究資料。

1.氨基酸、肉堿和琥珀酰丙酮內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品：一般為經(jīng)過同位素標(biāo)記的待測分析物。每種待測分析物應(yīng)對應(yīng)其標(biāo)記后的內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品，如有特殊情況無法對應(yīng)其自身標(biāo)記的內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品，應(yīng)說明理由，并提交使用替代內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品是否會對產(chǎn)品性能產(chǎn)生影響的評價資料。應(yīng)提交內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品的化學(xué)式、對應(yīng)的待測分析物、賦值資料以及質(zhì)量控制資料（一般包括分子量、化學(xué)純度、同位素純度等）。

2.氨基酸、肉堿和琥珀酰丙酮標(biāo)準(zhǔn)品：應(yīng)提供標(biāo)準(zhǔn)品的來源、選擇依據(jù)、性能指標(biāo)和溯源資料。

3.質(zhì)控品：質(zhì)控品為包含所有待測分析物的干血斑。質(zhì)控品使用的濾紙應(yīng)明確型號。應(yīng)至少設(shè)置高、低兩個濃度水平的質(zhì)控品。質(zhì)控品中的質(zhì)控物質(zhì)應(yīng)與待測分析物相同，如使用與待測分析物特性相似的其他物質(zhì)作為其質(zhì)控物，應(yīng)說明理由，并提交使用替代質(zhì)控物是否會對產(chǎn)品性能產(chǎn)生影響的評價資料。應(yīng)提供質(zhì)控品的選擇、制備和賦值資料。

4.企業(yè)參考品：應(yīng)提供企業(yè)內(nèi)部參考品的原料選擇、制備、定值、統(tǒng)計學(xué)分析及相關(guān)的實驗驗證資料。企業(yè)參考品應(yīng)盡量使用實際待測樣本即全血干血斑，如需采用向全血基質(zhì)中模擬添加被測物的形式制備干血斑（即模擬干血斑），則應(yīng)說明理由。企業(yè)應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特性建立穩(wěn)定的參考品體系，至少應(yīng)包括：

4.1檢測限參考品

應(yīng)建立能夠覆蓋所有待測分析物的檢測限參考品。參考品中的待測分析物濃度應(yīng)為檢測限濃度，或略高于檢測限濃度。檢測限參考品應(yīng)盡量使用全血干血斑，考慮到檢測限濃度的樣本難以獲得的情況，可采用內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品替代待測分析物的方式，來模擬制備檢測限參考品，例如將檢測限水平的內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品加入人全血基質(zhì)中制備模擬干血斑等。

如需使用待測分析物/內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品的替代物質(zhì)制備參考品，應(yīng)提交相應(yīng)的評估資料。

4.2精密度參考品

應(yīng)選擇能夠代表所有待測分析物結(jié)構(gòu)及性能評估要求的分析物建立精密度參考品。

精密度參考品應(yīng)設(shè)置多個具有代表性意義的濃度水平，一般包括正常內(nèi)源性水平、醫(yī)學(xué)決定水平、異常值（異常高值/異常低值）水平等，各待測分析物可根據(jù)臨床實際情況和指標(biāo)設(shè)置的臨床意義，選擇不同的濃度水平設(shè)定參考品，并提交選擇設(shè)定的依據(jù)。

4.3線性參考品

應(yīng)建立能夠覆蓋所有待測分析物的線性參考品。線性參考品應(yīng)選擇多個梯度濃度水平進行設(shè)置并覆蓋整個線性范圍。如需使用待測分析物的替代物質(zhì)制備參考品，應(yīng)提交相應(yīng)的評估資料。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料

主要生產(chǎn)工藝主要包括工作液的配制、分裝和包裝等，反應(yīng)體系研究指完成檢測所涉及到的最佳反應(yīng)條件的選擇確定過程。主要包括以下內(nèi)容：

1.主要生產(chǎn)工藝及流程，可以圖表方式表示。應(yīng)標(biāo)明關(guān)鍵工藝質(zhì)控步驟，并詳細(xì)說明該步驟的質(zhì)控方法及質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。

2.樣本采集、處理的要求和質(zhì)控品、企業(yè)參考品的干血斑制備的要求，具體可參照相關(guān)管理規(guī)范的內(nèi)容。

3.各試劑（包括各級工作液、萃取試劑、衍生化試劑、流動相等）的選擇、配比、用量的確定和驗證過程。

4.分析條件，如萃取方法、衍生條件、進樣條件、質(zhì)譜條件等。

（四）分析性能評估資料

申請人應(yīng)提交對試劑盒的全部性能進行評估的資料，對于每項分析性能的評價都應(yīng)包括研究目的、實驗設(shè)計、研究方法、可接受標(biāo)準(zhǔn)、實驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計方法等詳細(xì)資料。有關(guān)分析性能評估的背景信息也應(yīng)在申報資料中有所體現(xiàn)，包括實驗地點（實驗室）、人員及數(shù)量、適用儀器、儀器掃描模式、試劑規(guī)格、批號、臨床樣本來源（如涉及）等。分析性能評估的實驗方法可以參考相關(guān)文件或國內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的指導(dǎo)原則進行。建議著重對以下分析性能進行研究：

1.檢測限

檢測限確定過程的研究方法有很多，因通常情況下不易獲得低于內(nèi)源水平的樣本，申請人可自行設(shè)計合理的模擬方法進行研究。例如，將不同濃度的內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品添加至人全血中制備成一系列干血斑，用空白萃取液萃取后進行檢測；或者用含不同濃度內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品的萃取液對干血斑萃取后進行檢測，等等。其目的是使基質(zhì)中分析物濃度不變，內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度遞減，最終通過檢測內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度來模擬研究檢測限。測量的結(jié)果符合試劑偏差及精密度等要求的最低濃度水平作為檢測限。

研究過程中應(yīng)對各物質(zhì)濃度進行精確的確認(rèn)，每一濃度樣本應(yīng)平行檢測多次。根據(jù)該類試劑的預(yù)期用途，每個待測分析物的檢測限應(yīng)等于或低于預(yù)期使用人群的內(nèi)源性水平。應(yīng)詳細(xì)說明檢測限的建立過程，明確使用的樣本類型、試驗方法、接受標(biāo)準(zhǔn)和研究結(jié)論等。

2.線性范圍

線性范圍的確定研究可使用含有梯度濃度待測分析物的模擬干血斑，分析至少9-11個濃度水平，每個水平重復(fù)多次，通過評價一定范圍內(nèi)的線性關(guān)系及準(zhǔn)確度等建立所有待測分析物的線性范圍。分析物濃度水平覆蓋范圍應(yīng)具臨床意義，至少包含典型的內(nèi)源水平、醫(yī)學(xué)決定水平等。應(yīng)結(jié)合性能指標(biāo)和臨床意義，設(shè)定合理的線性范圍。

3.準(zhǔn)確度

準(zhǔn)確度包括正確度和精密度，受系統(tǒng)誤差和隨機誤差共同影響，申請人應(yīng)綜合考慮偏倚和不精密度的影響，對產(chǎn)品的準(zhǔn)確度進行研究。

3.1正確度

建議采用回收實驗方法進行正確度的評價，同時可結(jié)合其他合理方法（如方法學(xué)比對等）進行研究?；厥諏嶒灧椒ㄒ话銥椋合蛉刑砑硬煌瑵舛却郎y分析物，制備成干血斑，檢測后計算回收率，回收率的計算方法為在含有已知“理論”分析物含量的干血斑提取物中實際測得的該分析物含量，以百分比表示。回收率的結(jié)果應(yīng)在可接受范圍內(nèi)。干血斑中分析物各濃度水平應(yīng)具臨床意義并盡量覆蓋檢測范圍。詳細(xì)描述評價方法中樣本制備過程、評價方案、試驗過程、試驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計方法、研究結(jié)論等內(nèi)容。

3.2精密度

精密度的評價方法并無統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)可依，可根據(jù)不同產(chǎn)品特征或研究習(xí)慣進行，前提是必須保證研究的科學(xué)合理性，具體實驗方法可以參考相關(guān)指南或國內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的指導(dǎo)原則進行。應(yīng)對每項精密度指標(biāo)的評價標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求，如標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)的范圍等。針對本類產(chǎn)品的精密度評價主要包括以下要求：

3.2.1對可能影響檢測精密度的主要變量進行驗證，除檢測試劑本身的影響外，應(yīng)對不同儀器、操作者、地點、精密度評價周期等要素進行相關(guān)的驗證。

例如：為期至少XX天的連續(xù)檢測，每天至少由X人完成不少于X次的完整檢測，從而對批內(nèi)/批間、日內(nèi)/日間以及不同操作者之間的精密度進行綜合評價。申請人還應(yīng)選擇不同的實驗室進行重復(fù)實驗以對室間精密度進行評價。

3.2.2精密度的評價應(yīng)選擇多個濃度水平進行，一般來說應(yīng)包含正常內(nèi)源性水平、醫(yī)學(xué)決定水平、異常值（異常高值/異常低值）水平等，各待測分析物可根據(jù)臨床實際情況和指標(biāo)設(shè)置的臨床意義，選擇不同的濃度水平進行研究，并提交濃度選擇的依據(jù)。

4.特異性

應(yīng)對樣本中常見的干擾物質(zhì)和可能引起交叉反應(yīng)的物質(zhì)進行研究。特異性研究的樣本可為全血干血斑或模擬添加被研究物的模擬干血斑。

4.1干擾物質(zhì)

干擾物質(zhì)應(yīng)至少包括血紅蛋白、脂類、膽紅素等。其他還可能包括潛在患者（如母親）引入的化合物、樣本采集過程中加入的化合物、血液中存在的其他化合物等，例如常用藥物、麻醉劑、消毒劑、服用的營養(yǎng)物質(zhì)、機體其他代謝產(chǎn)物等。

建議申請人在干擾物質(zhì)的潛在最大濃度（即“最差條件”）條件下進行評價。建議至少在內(nèi)源性水平附近濃度對每種干擾物質(zhì)的干擾影響進行評價。

4.2交叉反應(yīng)

交叉反應(yīng)物質(zhì)一般是指在血液中存在的，在待測分析物掃描模式下，與待測分析物有相同質(zhì)荷比的其他化合物。應(yīng)研究血液中可能存在的交叉反應(yīng)物質(zhì)對待測分析物造成的干擾，對每一對交叉反應(yīng)物質(zhì)/分析物進行統(tǒng)計學(xué)和臨床意義上的分析，評估可能存在的風(fēng)險。常見的交叉反應(yīng)物質(zhì)有天冬酰胺、羥脯氨酸、甲硫氨酸砜、甲硫氨酸硫氧化物、谷氨酸鹽和不完全丁基化的?；鈮A等。應(yīng)至少對上述幾種交叉反應(yīng)物質(zhì)進行研究，并結(jié)合申報試劑的臨床適應(yīng)癥對其他可能存在交叉反應(yīng)的物質(zhì)進行評估。

5.殘留

對于該類試劑來說，還應(yīng)考慮進樣器等分析系統(tǒng)的殘留對結(jié)果產(chǎn)生的影響。例如，設(shè)計高低兩個濃度樣本交叉連續(xù)進樣，并重復(fù)多次，較低濃度樣本的檢測結(jié)果應(yīng)符合其準(zhǔn)確性的要求。

6.在分析性能評估資料中還需注意以下幾點：

6.1應(yīng)明確性能研究使用的儀器掃描模式，不同的掃描模式可能會導(dǎo)致不同的研究結(jié)果，必要時應(yīng)分別描述不同模式下的性能指標(biāo)。若不同的機型會導(dǎo)致不同的研究結(jié)果，也應(yīng)分別進行詳述。

6.2進行性能研究所使用的樣本形式應(yīng)為干血斑，且應(yīng)從萃取溶解開始進行分析性能的評價。

6.3 以上性能研究原則上應(yīng)包括所有的待測分析物，并應(yīng)盡可能使用全血干血斑進行評估。由于某些待測分析物的特殊性質(zhì)，可能無法采用上述常規(guī)方法進行實驗研究，需使用其他方法或替代物質(zhì)進行研究的，應(yīng)對具體情況進行說明，并提供相應(yīng)的研究資料。

（五）陽性判斷值/參考區(qū)間確定資料

對于此類試劑，應(yīng)對每種待測分析物設(shè)定陽性判斷值或參考區(qū)間。應(yīng)盡量獲取足夠大的樣本量，設(shè)定合理的臨床靈敏度和臨床特異度預(yù)期值進行陽性判斷值/參考區(qū)間的研究。根據(jù)該類試劑的臨床用途，應(yīng)盡量降低產(chǎn)品的假陰性率，并將假陽性率控制在一定范圍。應(yīng)采用合理的方法進行相關(guān)研究，并明確方法的選擇依據(jù)。

應(yīng)明確樣本入組標(biāo)準(zhǔn)（例如體重、年齡等），并說明試驗方案及其合理性。

另外，如存在灰區(qū)，應(yīng)提交灰區(qū)設(shè)定的依據(jù)，并在說明書【陽性判斷值】和【檢驗結(jié)果的解釋】項進行解釋說明。如無灰區(qū)設(shè)置，也應(yīng)提交相關(guān)的依據(jù)。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。主要涉及兩部分內(nèi)容，申報產(chǎn)品的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。

1.申報產(chǎn)品的穩(wěn)定性研究主要包括實時穩(wěn)定性（有效期）、運輸穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制等研究。對于實時穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

2.適用樣本的穩(wěn)定性研究：本類試劑的適用樣本類型為干血斑，可參考相關(guān)管理規(guī)范等文件對樣本的穩(wěn)定性進行研究。主要包括冷藏和冷凍條件下的儲存條件研究、有效期驗證、運輸穩(wěn)定性驗證以及干血斑萃取后儲存條件的驗證等?？梢栽诤侠淼臏囟确秶鷥?nèi)選擇溫度點（溫度范圍），每間隔一定的時間段對儲存樣本進行檢測，從而確認(rèn)樣本的穩(wěn)定性。由于某些化合物在干血斑中不穩(wěn)定，應(yīng)對這些分析物的情況進行研究，提供其在干血斑中的儲存有效期數(shù)據(jù)。樣本保存時間對檢測結(jié)果的影響應(yīng)在說明書中進行說明。

（七）臨床評價資料

1.研究方法

建議以前瞻性的臨床試驗方式為主，以試驗用體外診斷試劑（以下稱考核試劑）與臨床診斷結(jié)果進行比較研究的方法，評價考核試劑的臨床診斷性能相關(guān)指標(biāo)，從而證明其臨床性能滿足預(yù)期用途的要求。臨床診斷結(jié)果中陽性病例的確認(rèn)應(yīng)有充分的依據(jù)，包括采用現(xiàn)有條件下公認(rèn)的、可靠的、權(quán)威的疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)，疾病診療指南中明確的疾病診斷方法，行業(yè)內(nèi)的專家共識等。

申請人還應(yīng)同時選擇已批準(zhǔn)上市、臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為對比試劑，與考核試劑進行一定例數(shù)的比較研究試驗，以評價考核試劑的臨床準(zhǔn)確性。

2.臨床試驗機構(gòu)及人員

應(yīng)選擇至少3家臨床試驗機構(gòu)，按照相關(guān)法規(guī)、指導(dǎo)原則的要求開展臨床試驗。臨床試驗機構(gòu)的選擇應(yīng)盡量考慮擬申報產(chǎn)品的特點和預(yù)期用途。建議選擇不同地區(qū)的臨床試驗機構(gòu)開展臨床試驗，且臨床試驗機構(gòu)應(yīng)具有相關(guān)檢測的優(yōu)勢。操作人員應(yīng)經(jīng)過相應(yīng)的培訓(xùn)，并能熟練操作實驗。機構(gòu)和人員應(yīng)遵循《醫(yī)療機構(gòu)臨床實驗室管理辦法》及其他相關(guān)規(guī)定。試驗應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。

3.適用人群及樣本量

臨床試驗應(yīng)選擇預(yù)期適用人群作為研究對象，樣本的采集、處理和保存應(yīng)符合產(chǎn)品說明書及其他相關(guān)指導(dǎo)文件的要求。所有樣本均應(yīng)可以溯源。若適用人群包含新生兒，應(yīng)設(shè)定合理、明確的樣本入組標(biāo)準(zhǔn)（例如體重、年齡等）。

應(yīng)根據(jù)疾病發(fā)病率和性能要求等估算合理的樣本量，并在臨床試驗方案中明確樣本量確定的依據(jù)。在與同類產(chǎn)品進行對比試驗時，試驗樣本應(yīng)盡量覆蓋各分析物的線性范圍，樣本量應(yīng)滿足統(tǒng)計學(xué)要求。

根據(jù)臨床發(fā)病率、臨床診治情況及其他因素綜合考慮，對于我國相對常見的遺傳代謝病如高苯丙氨酸血癥（HPA）、甲基丙二酸血癥（MMA）、原發(fā)性肉堿缺乏癥（PCD）等,應(yīng)通過前瞻性臨床試驗檢出真陽性病例；其他發(fā)病率相對更低的疾病也應(yīng)盡可能在前瞻性臨床試驗中檢出所聲稱疾病病例。建議聲稱的遺傳代謝病種類應(yīng)盡量覆蓋我國常見的病種，可參考表1中所列的疾病。同時，臨床試驗檢測結(jié)果應(yīng)盡量覆蓋所有待測分析物指標(biāo)異常情況。

若臨床試驗中使用部分已確診（回顧性）的陽性病例進行研究，應(yīng)提供充分的理由，并在試驗方案和報告中對病例選擇的方式和原因進行明確的說明。在產(chǎn)品說明書中應(yīng)根據(jù)臨床結(jié)果對檢出的遺傳代謝病和分析物指標(biāo)異常情況進行描述，其中采用回顧性病例進行的研究應(yīng)另行說明。

4.臨床試驗方案

開展臨床試驗前，申請人應(yīng)與各臨床試驗機構(gòu)協(xié)商制定統(tǒng)一的、科學(xué)合理的臨床試驗方案，并按照臨床試驗方案組織制定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，并進行驗證，以確保臨床試驗操作在各個臨床試驗機構(gòu)之間的一致性。在整個臨床試驗過程中均應(yīng)遵循預(yù)定的方案，不可隨意改動。

臨床試驗應(yīng)在臨床試驗機構(gòu)的實驗室內(nèi)進行，并由本實驗室的技術(shù)人員操作，申報單位的技術(shù)人員除進行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉試驗進程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。

試驗方案中應(yīng)確定合理、嚴(yán)格的病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床試驗都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。方案中應(yīng)明確樣本入組的要求，以及樣本的收集、處理及保存要求等。

在試驗操作過程中和判定試驗結(jié)果時應(yīng)采用盲法，以保證試驗結(jié)果的客觀性，并在臨床試驗方案中明確。

方案中應(yīng)明確，當(dāng)對比試驗結(jié)果不一致時，應(yīng)分析原因并給出解釋，必要時進行第三方復(fù)核。

5.臨床試驗報告

臨床試驗報告應(yīng)該對試驗的整體設(shè)計及各個關(guān)鍵點給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對整個臨床試驗實施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法。應(yīng)對以下內(nèi)容進行詳述：

5.1臨床試驗總體設(shè)計及方案描述

5.1.1 臨床試驗的整體管理情況、臨床試驗機構(gòu)選擇、臨床主要研究人員簡介等基本情況介紹。

5.1.2 病例納入/排除的情況、盲法操作流程等。

5.1.3 樣本類型，樣本的收集、處理及保存等。

5.1.4 統(tǒng)計學(xué)方法、統(tǒng)計軟件、評價統(tǒng)計結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)。

5.2 具體的臨床試驗情況

5.2.1 臨床試驗所用各體外診斷試劑及儀器的名稱、批號、機型等信息。

5.2.2 各試驗機構(gòu)的病例數(shù)、陰性/陽性檢出例數(shù)、檢出的遺傳代謝病情況等。

5.2.3 質(zhì)量控制，試驗人員培訓(xùn)、儀器日常維護、儀器校準(zhǔn)、質(zhì)控品運行情況。

5.2.4 具體試驗過程，樣本檢測、數(shù)據(jù)收集、結(jié)果不一致樣本的校驗；陽性病例后續(xù)操作方法、病例脫落情況，以及是否符合臨床試驗方案等。

5.2.5 具體試驗過程及試驗過程中需要說明的問題，是否涉及對方案的修改等。

5.3統(tǒng)計學(xué)分析

對臨床試驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計方法。應(yīng)對考核試劑與臨床診斷結(jié)果進行統(tǒng)計分析，建議分別對每種待測分析物和每種疾病的臨床性能相關(guān)指標(biāo)（例如臨床靈敏度和臨床特異度、假陽性率和假陰性率、陰性似然比和陽性似然比、陰性預(yù)測值和陽性預(yù)測值等）進行統(tǒng)計。同時，應(yīng)根據(jù)臨床診斷結(jié)果，統(tǒng)計并明確每種疾病與待測分析物指標(biāo)之間的對應(yīng)關(guān)系。

對于考核試劑與對比試劑的比對試驗結(jié)果，應(yīng)采用回歸分析的方法分析其定量結(jié)果的相關(guān)性，同時也可選用特定的數(shù)據(jù)分析模型（如Bland-Altman 模型）對定量分析結(jié)果的一致性進行分析。亦可同時對二者的陰/陽性符合率和總符合率進行分析，對結(jié)果進行χ2檢驗或kappa檢驗以檢驗其定性結(jié)果的一致性。

應(yīng)針對每一種待測分析物（或相關(guān)分析物間的比值）和每種疾病的對比試驗結(jié)果進行單獨統(tǒng)計分析，以列表的形式進行總結(jié)。

應(yīng)明確樣本的納入與排除情況。說明其他情況，如數(shù)據(jù)預(yù)處理、差異數(shù)據(jù)的重新檢測以及最終是否納入數(shù)據(jù)統(tǒng)計、對異常值或缺失值的處理等。

5.4 討論和結(jié)論

對總體結(jié)果進行總結(jié)性描述并簡要分析試驗結(jié)果，對本次臨床研究有無特別說明，最后得出臨床試驗結(jié)論。

6.批準(zhǔn)上市條件

由于該類產(chǎn)品的特殊性，技術(shù)審評中可根據(jù)產(chǎn)品風(fēng)險受益、產(chǎn)品預(yù)期臨床應(yīng)用情況、上市前研究等因素，附帶條件批準(zhǔn)上市。具體情況可參見《用于罕見病防治醫(yī)療器械注冊審查指導(dǎo)原則》的相關(guān)要求。

（八）產(chǎn)品技術(shù)要求

擬定產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)符合《辦法》和《公告》的相關(guān)規(guī)定。申請人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下,根據(jù)申請人產(chǎn)品研制、前期臨床評價等結(jié)果，依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)文獻，按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的有關(guān)要求編寫。

第三類產(chǎn)品技術(shù)要求中還應(yīng)當(dāng)以附錄形式明確主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品要求。附錄中應(yīng)將內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品、標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品的設(shè)計及來源，參考品設(shè)置，生產(chǎn)工藝流程及質(zhì)控關(guān)鍵點等重點內(nèi)容予以明確。

（九）產(chǎn)品檢驗報告

應(yīng)提供該產(chǎn)品在具有相應(yīng)醫(yī)療器械檢驗資質(zhì)和承檢范圍的醫(yī)療器械檢驗機構(gòu)進行的、符合產(chǎn)品技術(shù)要求的產(chǎn)品檢驗報告。應(yīng)提供連續(xù)3個生產(chǎn)批次樣品的檢驗合格報告。

（十）產(chǎn)品說明書

產(chǎn)品說明書的格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求，進口產(chǎn)品的中文說明書除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說明書的一致性，翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達(dá)習(xí)慣。產(chǎn)品說明書的所有內(nèi)容均應(yīng)與申請人提交的注冊申報資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，若某些內(nèi)容引用自參考文獻，則應(yīng)以規(guī)范格式對此內(nèi)容進行標(biāo)注，并單獨列明參考文獻的相關(guān)信息。

結(jié)合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求，下面對說明書的重點內(nèi)容進行詳細(xì)說明。

1.【預(yù)期用途】

1.1第一自然段：描述預(yù)期用途，包括適用人群，樣本類型，被測物等。

舉例：該產(chǎn)品用于定量檢測XXX（適用人群）全血干血斑中的氨基酸、游離肉堿和?；鈮A、琥珀酰丙酮的濃度。

1.2介紹臨床適應(yīng)癥及背景，說明相關(guān)的臨床或?qū)嶒炇以\斷方法等。另外，需明確所有待測分析物名稱、對應(yīng)的內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品、經(jīng)臨床驗證的遺傳代謝病與分析物之間的關(guān)系。建議聲稱的遺傳代謝病應(yīng)盡量覆蓋我國相對常見的病種，可參考表1中所列的疾病。

1.3明確檢測結(jié)果僅能初步提示某種遺傳代謝病，其最終結(jié)果要由相應(yīng)方法進行確認(rèn)。

2.【檢驗原理】

詳細(xì)說明該產(chǎn)品檢測各類分析物的前處理方式（衍生/非衍生）、檢測原理及掃描模式（必要時可用圖示說明）。

3.【主要組成成分】

說明試劑盒所包含組分的名稱、數(shù)量、比例或濃度等信息，說明不同批號試劑盒中各組分是否可以互換。

試劑盒中不包含但該項檢測必需的組分，說明書中應(yīng)列出相關(guān)試劑/耗材的名稱、生產(chǎn)企業(yè)、貨號、注冊證號/備案憑證編號（如有）及其他相關(guān)信息，質(zhì)控品的濾紙應(yīng)明確型號。

4.【儲存條件及有效期】

按照穩(wěn)定性研究資料，說明試劑盒的效期穩(wěn)定性，其他穩(wěn)定性也應(yīng)視情況明確，如開瓶穩(wěn)定性、復(fù)溶穩(wěn)定性、運輸穩(wěn)定性、凍融次數(shù)要求等，應(yīng)標(biāo)明具體的儲存條件及有效期。

5.【適用儀器】

明確所有適用儀器的具體型號，并提供與儀器有關(guān)的重要信息以指導(dǎo)用戶操作。

6.【樣本要求】

樣本的收集、處理和保存：應(yīng)參照相關(guān)文件的要求，并詳細(xì)描述采樣步驟和注意事項。明確采樣前處理、消毒、采樣量、保存條件及期限（短期、長期）、運送條件、凍融次數(shù)的限制等。另外應(yīng)說明采樣過程中使用的濾紙型號應(yīng)與質(zhì)控品的濾紙型號一致。

上述內(nèi)容均需在穩(wěn)定性研究資料中詳述并進行性能評估驗證。

7.【檢驗方法】

應(yīng)詳細(xì)描述完成完整檢測所需的全部步驟以指導(dǎo)用戶正確操作，包括：

7.1 干血斑的前處理、萃取、衍生化（如有）、復(fù)溶及上機檢測等。

7.2 內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品溶液、各級工作液的配制方式。內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品溶液和工作液的短期和長期保存方式、凍融次數(shù)等。

7.3 上機檢測：儀器準(zhǔn)備、設(shè)置、儀器使用相關(guān)參數(shù)及結(jié)果處理。

7.4 質(zhì)量控制：質(zhì)控品的設(shè)置及檢測時的質(zhì)量控制方法、要求等。

7.5 說明檢測時應(yīng)特別注意的事項，如對精密度的控制措施、溶液的保存條件、其他影響檢測的因素等。

8.【陽性判斷值/參考區(qū)間】

明確設(shè)定及驗證陽性判斷值/參考區(qū)間所使用的樣本例數(shù)及類型、試驗方法、統(tǒng)計方法及計算結(jié)果。

9.【檢驗結(jié)果的解釋】

應(yīng)對不同的檢驗結(jié)果進行解釋，并明確后續(xù)處理方法。如存在灰區(qū)，應(yīng)對灰區(qū)結(jié)果的處理方式一并詳述。

10.【檢驗方法的局限性】

10.1 本試劑盒的檢測結(jié)果僅能初步提示某種遺傳代謝病，其結(jié)果僅供臨床參考，不能作為診斷。對患者的臨床診斷應(yīng)采用相應(yīng)方法并結(jié)合其癥狀/體征、病史等情況綜合進行。

10.2 本試劑盒適用于全血干血斑樣本檢測，不適用于其它樣本檢測。

10.3 異常的紅細(xì)胞比容、年齡、早產(chǎn)、疾病等因素可能會影響檢測結(jié)果。

10.4樣本采集、運輸及處理不當(dāng)、未按說明書操作等均有可能導(dǎo)致假陽性或假陰性結(jié)果，例如：血液未均勻浸透血斑區(qū)域、濾紙干血片打孔時打得太靠近血斑的邊緣、樣品收集或樣品干燥有問題、由于樣品受熱受潮，不能洗脫血斑、血斑濾紙受排泄物污染等等。應(yīng)描述在樣本采集，保存、運輸中需遵循的原則及注意事項。

10.5 說明可能影響檢測結(jié)果的干擾因素。

10.6 單一代謝產(chǎn)物往往無法提供足夠的遺傳代謝病信息，應(yīng)建立代謝物模型來研究相關(guān)疾病。

10.7其他局限性。

11.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

按照分析性能評估資料內(nèi)容描述以下性能指標(biāo)：檢測限、企業(yè)內(nèi)部參考品符合率（如適用）、準(zhǔn)確性、線性、特異性等。各項評估應(yīng)包括評估方法、數(shù)據(jù)和結(jié)果。應(yīng)描述臨床評價的試驗結(jié)果，包括臨床試驗機構(gòu)數(shù)量、樣本情況、試驗結(jié)果等內(nèi)容。

12.【注意事項】

應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

12.1 如該產(chǎn)品含有人源或動物源性物質(zhì)，應(yīng)給出具有潛在感染性的警告。

12.2 檢驗過程有關(guān)的有機溶劑的安全性要求，例如操作和廢棄的注意事項。

12.3 相關(guān)操作人員應(yīng)經(jīng)過專業(yè)的培訓(xùn)，并嚴(yán)格按照說明書的方法來進行試驗。

三、名詞解釋

1.全血干血斑

本指導(dǎo)原則中指臨床檢驗過程中使用的實際待測樣本，即將人全血滴加至濾紙上，再經(jīng)過打孔處理的樣本。

2.模擬干血斑

本指導(dǎo)原則中指在研究過程中，將添加了其他物質(zhì)（例如待測物、干擾物質(zhì)等）的人全血（或模擬血液基質(zhì)）滴加至濾紙上，再經(jīng)過打孔處理的樣本。

3.同位素純度

被同位素標(biāo)記的分子的相對含量。

四、參考文獻

1. 顧學(xué)范.《臨床遺傳代謝病》，人民衛(wèi)生出版社，2015.

2.《中國藥典》（2015年版），中國醫(yī)藥科技出版社.

3.《新生兒疾病篩查技術(shù)規(guī)范》（2010年版），（衛(wèi)婦社發(fā)〔2010〕96號）,2010年12月1日.

4.《新生兒疾病篩查管理辦法》（中華人民共和國衛(wèi)生部令第64號），2009年3月5日.

5. Newborn Screening Test Systems for Amino Acids, Free Carnitine, and Acylcarnitines Using Tandem Mass Spectrometry，Guidance for Industry and FDA Staff，F(xiàn)DA，2004.

6.CLSI.Newborn Screening by Tandem Mass Spectrometry； Approved Guideline. CLSI document I/LA32-A.Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute; 2010.

五、起草單位

國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評中心。