附件：堿性磷酸酶測(cè)定試劑注冊(cè)審查指導(dǎo)原則（2024修訂版）（2024年第19號(hào)）.doc

堿性磷酸酶測(cè)定試劑注冊(cè)審查指導(dǎo)原則
（2024年修訂版）

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）測(cè)定試劑注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門審評(píng)注冊(cè)申報(bào)資料提供參考。

本指導(dǎo)原則是對(duì)堿性磷酸酶測(cè)定試劑的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是供注冊(cè)申請(qǐng)人和技術(shù)審評(píng)人員使用的指導(dǎo)文件，不涉及注冊(cè)審批等行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。如有能夠滿足法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應(yīng)提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍

本指導(dǎo)原則適用于以分光光度法為基本原理對(duì)人血清或血漿中堿性磷酸酶活性進(jìn)行體外定量檢測(cè)的試劑。

從方法學(xué)考慮，本指導(dǎo)原則主要指以堿性磷酸酶水解底物引起特定產(chǎn)物的吸光度的改變，對(duì)堿性磷酸酶活性進(jìn)行定量檢測(cè)的體外診斷試劑，不包括干化學(xué)、酶聯(lián)免疫及金標(biāo)類檢測(cè)試劑。對(duì)于其他方法學(xué)的堿性磷酸酶測(cè)試劑注冊(cè)可參照本指導(dǎo)原則，但應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用。

本指導(dǎo)原則不適用于單獨(dú)申請(qǐng)注冊(cè)的堿性磷酸酶校準(zhǔn)品和堿性磷酸酶質(zhì)控品。

二、注冊(cè)審查要點(diǎn)

注冊(cè)申報(bào)資料的撰寫應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求及說明》的相關(guān)要求。

（一）監(jiān)管信息

1.產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品名稱一般由三部分組成。第一部分：被測(cè)物質(zhì)名稱，如堿性磷酸酶；第二部分：用途，如測(cè)定試劑盒；第三部分：方法或者原理，如NPP底物-AMP緩沖液法等，本部分應(yīng)當(dāng)在括號(hào)中列出。

2.分類依據(jù)

根據(jù)2013版《體外診斷試劑分類子目錄》，堿性磷酸酶測(cè)定試劑產(chǎn)品類別為：Ⅱ-4 用于酶類檢測(cè)的試劑，管理類別為二類，分類編碼為6840。

3.注冊(cè)單元?jiǎng)澐?/p>

按照《醫(yī)療器械注冊(cè)單元?jiǎng)澐种笇?dǎo)原則》對(duì)注冊(cè)單元?jiǎng)澐帧Ｈ绨煌陌b規(guī)格，不同規(guī)格間僅試劑組分裝量或檢測(cè)數(shù)有差異，原則上劃分為同一注冊(cè)單元；如包含不同的包裝規(guī)格，不同規(guī)格間除試劑裝量或檢測(cè)數(shù)的差異外，適用于不同的儀器機(jī)型，原則上劃分為同一注冊(cè)單元。校準(zhǔn)品、質(zhì)控品可以與配合使用的堿性磷酸酶測(cè)定試劑合并申請(qǐng)注冊(cè)，也可以單獨(dú)申請(qǐng)注冊(cè)。

4.其他信息還包括產(chǎn)品列表、關(guān)聯(lián)文件、申報(bào)前與監(jiān)管機(jī)構(gòu)的聯(lián)系情況和溝通記錄以及符合性聲明等文件。

（二）綜述資料

主要包括產(chǎn)品描述、預(yù)期用途、申報(bào)產(chǎn)品上市歷史等內(nèi)容。其中，需注意以下內(nèi)容：

1.產(chǎn)品描述

1.1產(chǎn)品綜述

描述產(chǎn)品所采用的技術(shù)原理，產(chǎn)品組成，原材料的來源及制備方法，主要生產(chǎn)工藝，檢驗(yàn)方法，校準(zhǔn)品（如有）的制備方法及溯源情況、定值情況，質(zhì)控品（如有）的制備方法及賦值情況等。

1.2與同類和/或前代產(chǎn)品的比較

應(yīng)著重從技術(shù)原理、預(yù)期用途、使用方法、性能指標(biāo)、臨床應(yīng)用情況等方面寫明擬申報(bào)產(chǎn)品與境內(nèi)、外已上市同類產(chǎn)品和/或前代產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。

2.預(yù)期用途

產(chǎn)品用于體外定量檢測(cè)血清或血漿中的堿性磷酸酶的活性。應(yīng)明確具體的樣本類型，適用的樣本類型應(yīng)結(jié)合實(shí)際的分析性能研究及臨床研究情況進(jìn)行確認(rèn)。說明堿性磷酸酶的生物學(xué)特征、結(jié)構(gòu)與功能，在體內(nèi)正常和病理狀態(tài)下的代謝途徑和存在形式。與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)證背景情況，如臨床適應(yīng)證的發(fā)生率、易感人群等，相關(guān)的臨床或?qū)嶒?yàn)室診斷方法等。目標(biāo)適用人群的相關(guān)信息等。

應(yīng)當(dāng)明確產(chǎn)品預(yù)期使用者和預(yù)期使用環(huán)境。

（三）非臨床資料

1.產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)管理資料

參照GB/T 42062《醫(yī)療器械風(fēng)險(xiǎn)管理對(duì)醫(yī)療器械的應(yīng)用》等相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)管理活動(dòng)。申請(qǐng)人應(yīng)考慮產(chǎn)品壽命周期的各個(gè)環(huán)節(jié)，從產(chǎn)品設(shè)計(jì)開發(fā)、預(yù)期用途、可能的使用錯(cuò)誤、與安全性有關(guān)的特征、已知及可預(yù)見的危害等方面的判定以及對(duì)患者風(fēng)險(xiǎn)的估計(jì)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)分析，綜合評(píng)價(jià)產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)可接受程度，形成風(fēng)險(xiǎn)管理資料。

申請(qǐng)人應(yīng)根據(jù)堿性磷酸酶測(cè)定試劑自身的特點(diǎn)制定風(fēng)險(xiǎn)可接受標(biāo)準(zhǔn)，確保產(chǎn)品滿足臨床需要。風(fēng)險(xiǎn)分析可考慮以下內(nèi)容：預(yù)期用途錯(cuò)誤包括：設(shè)計(jì)開始時(shí)未設(shè)定預(yù)期分析物、未作適用機(jī)型驗(yàn)證、未針對(duì)特定的樣本類型驗(yàn)證。性能特征失效包括：精密度失效、準(zhǔn)確度失效、非特異性、穩(wěn)定性失效、測(cè)量范圍失效、定量失效、量值溯源失效、校準(zhǔn)失效。不正確的結(jié)果包括：配方錯(cuò)誤、采購的原料未能達(dá)到設(shè)計(jì)要求的性能、原材料儲(chǔ)存條件不正確、使用了過期的原材料、反應(yīng)體系不正確、試劑與包裝材料不相容?？赡艿氖褂缅e(cuò)誤包括：生產(chǎn)者未按照生產(chǎn)流程操作，檢驗(yàn)者未按照原料、半成品、成品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作，裝配過程組分、標(biāo)簽、說明書等漏裝或誤裝，成品儲(chǔ)存或運(yùn)輸不當(dāng)，客戶未參照產(chǎn)品說明書設(shè)置參數(shù)或使用。與安全性有關(guān)的特征包括：有毒化學(xué)試劑的化學(xué)污染、樣本的潛在生物污染、不可回收包裝或塑料的環(huán)境污染。

2.體外診斷試劑安全和性能基本原則清單

說明產(chǎn)品符合《體外診斷試劑安全和性能基本原則清單》各項(xiàng)適用要求所采用的方法，以及證明其符合性的文件。對(duì)于其中不適用的各項(xiàng)要求，應(yīng)當(dāng)說明理由。

對(duì)于包含在產(chǎn)品注冊(cè)申報(bào)資料中的文件，應(yīng)當(dāng)說明其在申報(bào)資料中的具體位置；對(duì)于未包含在產(chǎn)品注冊(cè)申報(bào)資料中的文件，應(yīng)當(dāng)注明該證據(jù)文件名稱及其在質(zhì)量管理體系文件中的編號(hào)以備查。

3.產(chǎn)品技術(shù)要求及檢驗(yàn)報(bào)告

申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)產(chǎn)品研制、前期臨床評(píng)價(jià)等結(jié)果、國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)文獻(xiàn)，按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》的有關(guān)要求，進(jìn)行產(chǎn)品技術(shù)要求編寫。明確保證產(chǎn)品安全、有效、質(zhì)量可控的各項(xiàng)性能指標(biāo)和檢驗(yàn)方法。

3.1適用的產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)

產(chǎn)品應(yīng)當(dāng)符合適用的強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)于強(qiáng)制性行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，若申報(bào)產(chǎn)品結(jié)構(gòu)特征、技術(shù)原理、預(yù)期用途、使用方式等與強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)的適用范圍不一致，申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)提出不適用強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)的說明，并提供經(jīng)驗(yàn)證的證明性資料。

3.2.產(chǎn)品技術(shù)要求

3.2.1主要性能指標(biāo)

堿性磷酸酶測(cè)定試劑作為定量檢測(cè)試劑主要包括以下性能指標(biāo)：試劑的外觀、裝量、空白吸光度、空白吸光度變化率、分析靈敏度、線性區(qū)間、精密度、準(zhǔn)確度等，如試劑盒內(nèi)包含校準(zhǔn)品和/或質(zhì)控品，應(yīng)至少包含校準(zhǔn)品的正確度、均勻性等，質(zhì)控品的預(yù)期結(jié)果、均勻性等。產(chǎn)品技術(shù)要求可參照YY/T 1234《堿性磷酸酶測(cè)定試劑（盒）（NPP底物-AMP緩沖液法）》、YY/T 1549《生化分析儀用校準(zhǔn)物》（如適用）、YY/T 1662《生化分析儀用質(zhì)控物》（如適用）的要求。

具體產(chǎn)品的性能指標(biāo)需結(jié)合方法學(xué)本身特性，確定其性能指標(biāo)或者提供此指標(biāo)不適用的說明。

3.2.2檢驗(yàn)方法

產(chǎn)品的檢驗(yàn)方法需根據(jù)技術(shù)性能指標(biāo)設(shè)定，檢驗(yàn)方法需優(yōu)先采用公認(rèn)的或已頒布的標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法；自建檢驗(yàn)方法需提供相應(yīng)的方法學(xué)依據(jù)及理論基礎(chǔ)，同時(shí)保證檢驗(yàn)方法具有可操作性和可重現(xiàn)性，必要時(shí)可附相應(yīng)圖示進(jìn)行說明，文本較大的可以附錄形式提供。

3.3產(chǎn)品檢驗(yàn)報(bào)告

在保證產(chǎn)品原材料和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定可靠的基礎(chǔ)上，采用在符合醫(yī)療器械質(zhì)量管理體系相關(guān)要求的條件下生產(chǎn)的產(chǎn)品進(jìn)行檢驗(yàn)。堿性磷酸酶產(chǎn)品目前尚無注冊(cè)檢驗(yàn)用體外診斷試劑國家標(biāo)準(zhǔn)品，如果申報(bào)試劑今后有適用的國家標(biāo)準(zhǔn)品發(fā)布，應(yīng)當(dāng)使用國家標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行檢驗(yàn)?？商峤灰韵氯我恍问降臋z驗(yàn)報(bào)告：

3.3.1申請(qǐng)人出具的自檢報(bào)告。

3.3.2委托有資質(zhì)的醫(yī)療器械檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)出具的檢驗(yàn)報(bào)告。

如產(chǎn)品提交自檢報(bào)告，還需按照《醫(yī)療器械注冊(cè)自檢管理規(guī)定》的要求提交相應(yīng)資料。

4.分析性能研究

申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)在原材料和生產(chǎn)工藝經(jīng)過選擇和確認(rèn)、質(zhì)量管理體系得到有效控制并且保證產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定的基礎(chǔ)上，進(jìn)行產(chǎn)品的分析性能評(píng)估。

分析性能評(píng)估主要包括樣本穩(wěn)定性、適用的樣本類型、校準(zhǔn)品的量值溯源和質(zhì)控品的賦值（如適用）、正確度、精密度、空白限、檢出限及定量限、分析特異性、測(cè)量區(qū)間及可報(bào)告區(qū)間、分析靈敏度、試劑空白等項(xiàng)目的研究資料，應(yīng)當(dāng)采用多批產(chǎn)品進(jìn)行性能評(píng)估。建議申請(qǐng)人依據(jù)《定量檢測(cè)體外診斷試劑分析性能評(píng)估指導(dǎo)原則》以及國內(nèi)外有關(guān)體外診斷產(chǎn)品分析性能評(píng)估的文件開展研究。如申報(bào)產(chǎn)品適用不同的機(jī)型，需要提交在不同機(jī)型上進(jìn)行評(píng)估的資料。如申報(bào)產(chǎn)品包含不同的包裝規(guī)格，需要對(duì)各包裝規(guī)格進(jìn)行分析或驗(yàn)證。

性能評(píng)估時(shí)應(yīng)將試劑、儀器和所選用的校準(zhǔn)品、質(zhì)控品作為一個(gè)整體進(jìn)行評(píng)價(jià)，評(píng)估整個(gè)系統(tǒng)的性能是否符合要求。有關(guān)分析性能驗(yàn)證的背景信息也應(yīng)在申報(bào)資料中有所體現(xiàn)，包括試驗(yàn)時(shí)間、地點(diǎn)、檢驗(yàn)人員、適用儀器、試劑規(guī)格和批號(hào)、所選用的校準(zhǔn)品和質(zhì)控品等。

對(duì)于本試劑，建議主要對(duì)以下分析性能進(jìn)行研究：

4.1樣本穩(wěn)定性

申請(qǐng)人應(yīng)充分考慮實(shí)際使用過程中樣本采集、處理、運(yùn)輸及保存等各個(gè)階段的條件，對(duì)不同類型樣本的穩(wěn)定性分別進(jìn)行評(píng)價(jià)并提交研究資料。內(nèi)容包括建議的保存條件、允許的凍融次數(shù)（如適用）、添加劑（如抗凝劑）和運(yùn)輸條件(如涉及）等。樣本穩(wěn)定性內(nèi)容的研究結(jié)果應(yīng)在說明書【樣本要求】中進(jìn)行詳細(xì)說明。

4.2適用的樣本類型

血清、肝素抗凝血漿是堿性磷酸酶測(cè)定的適宜樣本。其他抗凝劑如草酸鹽、檸檬酸鹽、EDTA鈉鹽等，對(duì)堿性磷酸酶活性存在干擾，此類血漿不宜用于堿性磷酸酶的檢測(cè)。申請(qǐng)人應(yīng)對(duì)適用的樣本類型及添加劑進(jìn)行適用性確認(rèn)。如申報(bào)產(chǎn)品適用于血清和血漿，可采用一定數(shù)量血清、血漿同源樣本進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)的方法，證明不同樣本類型是否可比。樣本量應(yīng)體現(xiàn)一定的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

4.3校準(zhǔn)品的量值溯源和質(zhì)控品的賦值（如適用）

申請(qǐng)人應(yīng)明確申報(bào)產(chǎn)品適用的校準(zhǔn)品和質(zhì)控品。申請(qǐng)人應(yīng)提供試劑配套校準(zhǔn)品量值溯源相關(guān)資料，提供質(zhì)控品賦值及其質(zhì)控范圍確定的相關(guān)資料。

可參照GB/T 21415《體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測(cè)量 校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計(jì)量學(xué)溯源性》、YY/T 1709《體外診斷試劑用校準(zhǔn)物測(cè)量不確定度評(píng)定》、YY/T 1549《生化分析儀用校準(zhǔn)物》的要求，提供校準(zhǔn)品溯源以及校準(zhǔn)品定值及不確定度計(jì)算的相關(guān)資料?？蓞⒄誝Y/T 1662《生化分析儀用質(zhì)控物》《質(zhì)控品注冊(cè)審查指導(dǎo)原則——質(zhì)控品賦值研究》的要求，提供質(zhì)控品的賦值資料。

如校準(zhǔn)品/質(zhì)控品的基質(zhì)不同于臨床常用樣本類型，還應(yīng)提交基質(zhì)效應(yīng)的相關(guān)研究資料。

4.4正確度

正確度（trueness）指無窮多次重復(fù)測(cè)量所得量值的平均值與一個(gè)參考量值間的一致程度。正確度由系統(tǒng)測(cè)量誤差決定，通常用偏倚表示。對(duì)測(cè)量正確度的評(píng)價(jià)方法包括：使用參考物質(zhì)的偏差分析、方法學(xué)比對(duì)等方法，申請(qǐng)人可根據(jù)實(shí)際情況選擇合理方法進(jìn)行研究。

4.4.1使用參考物質(zhì)的正確度評(píng)價(jià)

采用至少兩個(gè)濃度的參考物質(zhì)，代表試劑測(cè)量區(qū)間內(nèi)的不同濃度，其中應(yīng)包括醫(yī)學(xué)決定水平或參考區(qū)間上/下限附近的濃度。如參考物質(zhì)只有一個(gè)水平，且無合理稀釋方法，亦可在說明原因的基礎(chǔ)上，僅采用一個(gè)水平的參考物質(zhì)進(jìn)行正確度評(píng)價(jià)，結(jié)果應(yīng)在申請(qǐng)人給定范圍內(nèi)。

推薦的參考物質(zhì)包括：具有互換性的有證參考物質(zhì)、公認(rèn)的參考品、標(biāo)準(zhǔn)品，參考測(cè)量程序賦值的臨床樣本。

4.4.2方法學(xué)比對(duì)

采用申報(bào)試劑與合理的比較測(cè)量程序同時(shí)檢測(cè)臨床樣本，通過兩者的比對(duì)研究和偏倚估計(jì)，進(jìn)行申報(bào)試劑的正確度評(píng)價(jià)。比較測(cè)量程序可選擇同類試劑或者參考測(cè)量程序。臨床樣本的濃度水平應(yīng)覆蓋申報(bào)試劑的測(cè)量區(qū)間。在性能建立時(shí)，建議對(duì)每個(gè)樣本重復(fù)檢測(cè)，以平均值或中位數(shù)進(jìn)行回歸分析，并評(píng)價(jià)醫(yī)學(xué)決定水平或參考區(qū)間上/下限濃度的偏倚。

在實(shí)施方法學(xué)比對(duì)前，應(yīng)分別對(duì)擬申報(bào)試劑和比較測(cè)量程序進(jìn)行初步評(píng)估，只有在確認(rèn)兩者都分別符合各自相關(guān)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后方可進(jìn)行比對(duì)試驗(yàn)。方法學(xué)比對(duì)時(shí)應(yīng)注意質(zhì)量控制、樣本類型、濃度分布范圍并對(duì)結(jié)果進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

4.5精密度

精密度由隨機(jī)測(cè)量誤差決定，通常用標(biāo)準(zhǔn)差、方差或變異系數(shù)表示。精密度一般包括重復(fù)性、中間精密度和再現(xiàn)性。應(yīng)考慮運(yùn)行、時(shí)間、操作者、測(cè)量儀器、測(cè)量程序、試劑批次、校準(zhǔn)品、地點(diǎn)、環(huán)境條件等影響精密度的條件，設(shè)計(jì)合理的精密度試驗(yàn)方案進(jìn)行評(píng)價(jià)。樣本濃度一般包括測(cè)量區(qū)間高、中、低在內(nèi)的3～5個(gè)水平，應(yīng)有醫(yī)學(xué)決定水平或參考區(qū)間上/下限濃度附近的樣本

4.6空白限、檢出限及定量限

申請(qǐng)人可根據(jù)產(chǎn)品的具體情況選擇適用的方法進(jìn)行檢出能力的研究，建議對(duì)空白限（LoB）、檢出限（LoD）、定量限（LoQ）進(jìn)行評(píng)估并提交研究資料?？蓞⒄铡抖繖z測(cè)體外診斷試劑分析性能評(píng)估注冊(cè)審查指導(dǎo)原則》，提供空白限、檢出限與定量限的建立及驗(yàn)證的研究資料。

4.7分析特異性

應(yīng)評(píng)估分析待測(cè)樣本中和試劑使用過程中潛在干擾物質(zhì)，并對(duì)干擾程度進(jìn)行量化。

常見的干擾物質(zhì)包括但不限于膽紅素、血紅蛋白、甘油三酯、膽固醇、類風(fēng)濕因子、樣本添加劑（抗凝劑或防腐劑）、抗壞血酸、常用藥物及其代謝物及膳食物質(zhì)等，亦應(yīng)考慮文獻(xiàn)中已報(bào)道的對(duì)類似試劑或測(cè)量程序存在干擾的物質(zhì)。

干擾物濃度的分布應(yīng)覆蓋人體生理及病理狀態(tài)下可能出現(xiàn)的物質(zhì)濃度，至少采用臨床樣本中的最高濃度（最差情形）進(jìn)行干擾篩查或驗(yàn)證。樣本量選擇應(yīng)體現(xiàn)一定的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。待評(píng)價(jià)的堿性磷酸酶樣本濃度建議采用至少2個(gè)分析物水平的樣本，其濃度應(yīng)在醫(yī)學(xué)決定水平或參考區(qū)間上/下限附近。

4.8線性區(qū)間、測(cè)量區(qū)間及可報(bào)告區(qū)間

申請(qǐng)人應(yīng)評(píng)估申報(bào)產(chǎn)品的線性區(qū)間、測(cè)量區(qū)間及可報(bào)告區(qū)間并提交研究資料。

4.8.1 線性區(qū)間

線性區(qū)間的研究，需采用高值和零濃度/低值濃度的樣本按比例精確配制的一系列不同濃度的樣本。線性區(qū)間建立時(shí)，需配制出較預(yù)期線性區(qū)間更寬的至少9個(gè)左右不同濃度的樣本（不包括零濃度樣本），每個(gè)樣本進(jìn)行多次重復(fù)檢測(cè)，根據(jù)可接受線性偏差和各濃度的重復(fù)性，確定檢測(cè)次數(shù)。采用重復(fù)檢測(cè)均值和預(yù)期值進(jìn)行直線回歸分析，建議采用加權(quán)最小二乘回歸等分析方法，提供散點(diǎn)圖、線性回歸方程、線性相關(guān)系數(shù)（r）及線性偏差，判斷結(jié)果是否滿足可接受標(biāo)準(zhǔn)。

驗(yàn)證線性區(qū)間時(shí)，可將接近線性區(qū)間上限的高值樣本按一定比例稀釋至少為5個(gè)不同濃度，每一濃度的樣本至少重復(fù)測(cè)定2次，計(jì)算其平均值，求出線性方程。

4.8.2測(cè)量區(qū)間及可報(bào)告區(qū)間

測(cè)量區(qū)間，也稱分析測(cè)量區(qū)間，在該區(qū)間內(nèi)，臨床樣本在未經(jīng)稀釋、濃縮，或非常規(guī)測(cè)量程序中步驟的其他前處理情況下，檢測(cè)結(jié)果的線性偏差、不精密度和偏倚均在可接受范圍內(nèi)。測(cè)量區(qū)間下限為定量限，線性區(qū)間包含測(cè)量區(qū)間。

如對(duì)超出線性區(qū)間的濃度樣本可進(jìn)行稀釋后檢測(cè)，應(yīng)研究適用的稀釋液和聲稱的稀釋倍數(shù)，從而確定試劑的可報(bào)告區(qū)間。

4.9 試劑空白

試劑空白包括試劑空白吸光度和試劑空白吸光度變化率。用生理鹽水或純化水，在特定溫度、波長、光徑條件下，記錄測(cè)試啟動(dòng)時(shí)的吸光度（A1）、和一段時(shí)間的吸光度（A2），A2測(cè)試結(jié)果即為試劑空白吸光度測(cè)定值；計(jì)算出吸光度變化值（｜A2-A1｜/t）（t為測(cè)量時(shí)間間隔）即為試劑空白吸光度變化率。

4.10分析靈敏度

試劑盒測(cè)試給定濃度的被測(cè)物時(shí)，吸光度變化率（ΔA）應(yīng)符合申請(qǐng)人給定范圍。

5.參考區(qū)間確定資料

申報(bào)產(chǎn)品可以通過建立或驗(yàn)證的方法確定產(chǎn)品的參考區(qū)間，可參照《體外診斷試劑參考區(qū)間確定注冊(cè)審查指導(dǎo)原則》的要求進(jìn)行研究。

采用驗(yàn)證的方法確定申報(bào)試劑參考區(qū)間時(shí)，需要滿足以下條件：第一，原始參考區(qū)間的研究應(yīng)系統(tǒng)全面，具有可信性，如已發(fā)布實(shí)施的臨床檢測(cè)參考區(qū)間標(biāo)準(zhǔn)等;第二，檢測(cè)系統(tǒng)需具有可比性；第三，參考區(qū)間研究的分析前因素需具有可比性，如參考個(gè)體的狀態(tài)，標(biāo)本采集和處理程序等; 第四，參考人群的適宜性。原始參考區(qū)間研究所采用的參考人群應(yīng)在人群分布的地理位置、人口統(tǒng)計(jì)學(xué)特征等方面與申報(bào)試劑預(yù)期適用人群相一致，或包含符合參考區(qū)間建立參考樣本數(shù)量要求的上述參考人群。如不能同時(shí)滿足上述條件，申請(qǐng)人需建立自己的參考區(qū)間。

堿性磷酸酶測(cè)定試劑可依據(jù)WS/T 404.1《臨床常用生化檢驗(yàn)項(xiàng)目參考區(qū)間 第1部分：血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、堿性磷酸酶和γ-谷氨?；D(zhuǎn)移酶》的相關(guān)要求，采用驗(yàn)證的方法確定本產(chǎn)品的參考區(qū)間。

無論是建立自己的參考區(qū)間或驗(yàn)證參考區(qū)間，都要確保參考區(qū)間的可溯源性，記錄確定參考區(qū)間的所有步驟，包括參考個(gè)體的選擇、分析前因素、樣本檢測(cè)以及統(tǒng)計(jì)分析方法等。

6.穩(wěn)定性研究

主要包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性（貨架有效期）、使用穩(wěn)定性以及運(yùn)輸穩(wěn)定性等。申請(qǐng)人可根據(jù)實(shí)際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案，同時(shí)應(yīng)注意選取代表性包裝規(guī)格進(jìn)行研究。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方案、研究報(bào)告和研究數(shù)據(jù)。

6.1實(shí)時(shí)穩(wěn)定性（貨架有效期）

提交至少三批申報(bào)產(chǎn)品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究資料。明確儲(chǔ)存的環(huán)境條件（如溫度、濕度和光照）及有效期。

6.2使用穩(wěn)定性

堿性磷酸酶測(cè)定反應(yīng)在堿性條件下進(jìn)行，開封試劑可能因吸收空氣中的二氧化碳而使pH降低，影響測(cè)定結(jié)果，應(yīng)注意開封試劑的使用時(shí)間，采用合適的校準(zhǔn)計(jì)劃。

提交至少一批申報(bào)產(chǎn)品實(shí)際使用期間穩(wěn)定性的研究資料，應(yīng)包括所有組成成分的開封穩(wěn)定性。適用時(shí)提交復(fù)溶穩(wěn)定性、機(jī)載穩(wěn)定性及凍融次數(shù)研究資料等。如涉及校準(zhǔn)品，還應(yīng)提交校準(zhǔn)頻率或校準(zhǔn)穩(wěn)定性研究資料。明確產(chǎn)品使用的溫度、濕度條件等。

6.3運(yùn)輸穩(wěn)定性

提交至少一批申報(bào)產(chǎn)品在特定或者預(yù)期的條件下運(yùn)輸?shù)难芯抠Y料，應(yīng)說明產(chǎn)品正確運(yùn)輸?shù)沫h(huán)境條件（如溫度、濕度、光照和機(jī)械保護(hù)等）。同時(shí)說明產(chǎn)品的包裝方式以及暴露的最差運(yùn)輸條件。

7.其他資料

7.1反應(yīng)體系（如需提供）

應(yīng)包含產(chǎn)品確定反應(yīng)溫度、時(shí)間、緩沖體系比較等條件的研究資料、確定樣本和試劑盒組分加樣量的研究資料。

7.2主要原材料研究資料和生產(chǎn)工藝研究資料（如適用）

主要原材料的研究資料包括主要原材料的來源、選擇、制備方法的研究資料，質(zhì)量分析證書，主要原材料質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定和檢驗(yàn)資料。如適用，提交企業(yè)參考品的研究資料，包括來源、組成、陰陽性和/或量值確認(rèn)等。

生產(chǎn)工藝的研究資料包括工作液的配制、分裝和凍干，顯色/發(fā)光等結(jié)果放大系統(tǒng)的確定等。

7.3三批產(chǎn)品的生產(chǎn)及自檢記錄。

提供三批產(chǎn)品生產(chǎn)及自檢記錄的復(fù)印件。如產(chǎn)品包含校準(zhǔn)品和（或）質(zhì)控品，還應(yīng)提供校準(zhǔn)品的定值記錄和質(zhì)控品的賦值記錄

7.4證明產(chǎn)品安全性、有效性的其他非臨床研究資料（如適用）。

（四）臨床評(píng)價(jià)資料

根據(jù)體外診斷試劑臨床評(píng)價(jià)的相關(guān)要求，申報(bào)產(chǎn)品用于肝膽疾病和骨骼疾病的輔助診斷時(shí)屬于列入《免于臨床試驗(yàn)體外診斷試劑目錄》的項(xiàng)目，申請(qǐng)人應(yīng)按照《免于臨床試驗(yàn)的體外診斷試劑臨床評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則》提交臨床評(píng)價(jià)資料，也可通過臨床試驗(yàn)的方式進(jìn)行臨床評(píng)價(jià)。

若產(chǎn)品的預(yù)期用途超出《免于臨床試驗(yàn)體外診斷試劑目錄》中的描述，應(yīng)按照《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》《醫(yī)療器械臨床試驗(yàn)質(zhì)量管理規(guī)范》的要求，提交臨床試驗(yàn)的相關(guān)資料。

（五）產(chǎn)品說明書和標(biāo)簽樣稿

產(chǎn)品說明書和標(biāo)簽應(yīng)符合《醫(yī)療器械說明書和標(biāo)簽管理規(guī)定》和《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求。產(chǎn)品說明書的所有內(nèi)容均應(yīng)與申請(qǐng)人提交的注冊(cè)申報(bào)資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，則應(yīng)以規(guī)范格式對(duì)此內(nèi)容進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)列明參考文獻(xiàn)的相關(guān)信息。產(chǎn)品說明書內(nèi)容原則上應(yīng)全部用中文進(jìn)行表述，如含有國際通用或行業(yè)內(nèi)普遍認(rèn)可的英文縮寫，可在說明書適合位置解釋標(biāo)注；對(duì)于確實(shí)無適當(dāng)中文表述的詞語，可使用相應(yīng)英文或其縮寫。

下面對(duì)堿性磷酸酶測(cè)定試劑盒說明書的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說明，以指導(dǎo)注冊(cè)申報(bào)人員更合理地完成說明書編制。

1.【產(chǎn)品名稱】

試劑（盒）名稱由三部分組成：被測(cè)物名稱、用途、方法或原理。例如：堿性磷酸酶測(cè)定試劑盒（NPP底物-AMP緩沖液法）。

2.【包裝規(guī)格】

應(yīng)注明可測(cè)試的樣本數(shù)或裝量，如××測(cè)試/盒、××人份/盒、××mL，除國際通用計(jì)量單位外，其余內(nèi)容均應(yīng)用中文進(jìn)行表述。

3.【預(yù)期用途】

說明試劑盒用于體外定量檢測(cè)血清或血漿中堿性磷酸酶的活性。

詳細(xì)說明預(yù)期用途，對(duì)堿性磷酸酶進(jìn)行背景介紹，說明相關(guān)的臨床或?qū)嶒?yàn)室診斷方法；說明與預(yù)期用途相關(guān)的臨床背景情況；說明被測(cè)分析物與臨床適應(yīng)證的關(guān)系。

4.【檢驗(yàn)原理】

應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品主要成分簡要說明檢驗(yàn)的原理、方法，必要時(shí)可采取圖示方法表示，檢測(cè)原理的描述應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品主要組成成分、被測(cè)物和產(chǎn)物的關(guān)系進(jìn)行描述：

如：本產(chǎn)品以磷酸對(duì)硝基苯酚（4-NPP）為底物，2-氨基-2-甲基-1-丙醇（AMP）為磷酸?；荏w物質(zhì)，增進(jìn)酶反應(yīng)速率，在堿性磷酸酶（ALP）催化下，4-NPP分裂出磷酸基團(tuán)，生成游離的對(duì)硝基苯酚（4-NP），后者在堿性溶液中轉(zhuǎn)變成醌式結(jié)構(gòu)，呈現(xiàn)較深的黃色。反應(yīng)式如下：

由于反應(yīng)中4-NP的生成速率與ALP活性呈正比，因此在37℃、405nm波長下監(jiān)測(cè)吸光度上升速率，可得出ALP的活性。

5.【主要組成成分】

5.1對(duì)于產(chǎn)品中包含的試劑組分，說明各組分的名稱、數(shù)量、裝量。說明各組分中的核心反應(yīng)成分、顯色物質(zhì)、緩沖液基質(zhì)、防腐劑。生物活性材料應(yīng)提供其生物學(xué)來源、活性及其他特性。必要時(shí)，明確組分在基質(zhì)中的濃度、比例等信息，多組分試劑盒應(yīng)明確說明不同批號(hào)試劑盒中各組分是否可以互換(如適用)。

5.2.需要但未提供的試劑。對(duì)于產(chǎn)品中不包含，但對(duì)該試驗(yàn)必需的試劑如單獨(dú)注冊(cè)的校準(zhǔn)品/質(zhì)控品、樣本保存液等應(yīng)列出各組分的名稱、生產(chǎn)商及其注冊(cè)證號(hào)或備案號(hào)。

5.3.對(duì)于校準(zhǔn)品和質(zhì)控品（如適用），應(yīng)說明濃度水平、核心反應(yīng)成分及其生物學(xué)來源，明確緩沖液基質(zhì)、防腐劑等。注明校準(zhǔn)品的定值及其溯源性。注明質(zhì)控品的靶值、靶值范圍和計(jì)算方法。若校準(zhǔn)品或質(zhì)控品的值為批特異，可注明批特異，并附單獨(dú)的靶值單。

6.【儲(chǔ)存條件及有效期】

6.1明確貨架保存條件及有效期，如2-8℃保存，有效期12個(gè)月。同時(shí)明確特殊保存條件，如禁止冷凍、光線和濕度要求等。保存溫度不應(yīng)有模糊表述，如“常溫”“室溫”，應(yīng)直接以℃為單位。

6.2明確各組分的使用穩(wěn)定性，包括開封保存條件和保存時(shí)長、凍融次數(shù)、機(jī)載穩(wěn)定性等。

6.3明確生產(chǎn)日期、使用期限/失效日期、有效期至見標(biāo)簽。

6.4不同組分保存條件不一致，應(yīng)分別描述。若各組分的有效期不同，則試劑盒的有效期為最短保存時(shí)間。

7.【適用儀器】

說明適用的儀器及其型號(hào)，并提供與儀器有關(guān)的信息以便用戶能夠正確選擇使用。

8.【樣本要求】

應(yīng)明確以下內(nèi)容：

8.1明確適用的樣本類型，詳細(xì)描述樣本的采集和保存方法，明確樣本收集過程中的注意事項(xiàng)。說明為保證樣本各組分穩(wěn)定所必需的抗凝劑等，注明對(duì)抗凝劑的要求（如草酸鹽、檸檬酸鹽、EDTA鈉鹽對(duì)堿性磷酸酶活性造成干擾，應(yīng)明確避免使用的提示）。

8.2樣本穩(wěn)定性：明確能夠保證樣本穩(wěn)定保存的條件。如需凍存，應(yīng)明確凍存條件和凍融次數(shù)的要求。以上內(nèi)容應(yīng)與樣本穩(wěn)定性的研究結(jié)果一致。

8.3若特定樣本不適用或需進(jìn)一步處理后使用，需明確。

9.【檢驗(yàn)方法】

詳細(xì)說明試驗(yàn)操作的各個(gè)步驟，包括：

9.1試劑配制方法、注意事項(xiàng)；

9.2試驗(yàn)條件：溫度、時(shí)間、測(cè)定主/副波長、試劑用量、樣本用量、測(cè)定方法、反應(yīng)類型、反應(yīng)方向、反應(yīng)時(shí)間等以及試驗(yàn)過程中的注意事項(xiàng)；

9.3校準(zhǔn)程序：校準(zhǔn)品的使用方法、注意事項(xiàng)、校準(zhǔn)曲線的繪制。

9.4質(zhì)量控制程序：質(zhì)控品的使用方法、對(duì)質(zhì)控結(jié)果的必要解釋以及推薦的質(zhì)控周期等；建議在本部分注明以下字樣：如果質(zhì)控結(jié)果與預(yù)期不符，提示檢測(cè)結(jié)果不可靠，不應(yīng)出具檢測(cè)報(bào)告。

9.5檢驗(yàn)結(jié)果的計(jì)算：應(yīng)明確檢驗(yàn)結(jié)果的計(jì)算方法。

10.【參考區(qū)間】

明確參考區(qū)間，并簡要說明建立或驗(yàn)證參考區(qū)間的基本信息，包括：樣本量、人群特征（如性別、年齡、種族等）和采用的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法。

建議注明“由于地理、人種、性別和年齡等差異，建議各實(shí)驗(yàn)室建立自己的參考范圍”。

11.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

依據(jù)參考區(qū)間對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行解釋說明，必要時(shí)可采用圖示的方法進(jìn)行說明。說明在何種情況下需要進(jìn)行復(fù)測(cè)或確認(rèn)試驗(yàn)（如需要）。說明可能對(duì)試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響的因素。

12.【檢驗(yàn)方法的局限性】

說明該檢驗(yàn)方法的局限性。如該試劑盒的檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考，不能單獨(dú)作為臨床診治的依據(jù)，應(yīng)結(jié)合患者性別、年齡、病史及其他實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)等信息綜合考慮。當(dāng)檢驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)與臨床不符甚至相悖的情況，應(yīng)分析查找原因并重新確認(rèn)等。

說明其他可能存在的問題 。

13.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

產(chǎn)品性能指標(biāo)應(yīng)概括描述每項(xiàng)分析性能研究如準(zhǔn)確度/正確度、精密度、空白限、檢出限、定量限、分析靈敏度、線性區(qū)間、分析特異性等適用項(xiàng)目的研究方法和結(jié)果。概括描述臨床評(píng)價(jià)包括免于臨床試驗(yàn)的臨床評(píng)價(jià)和臨床試驗(yàn)的方法和結(jié)果。

14.【注意事項(xiàng)】

建議包括以下內(nèi)容：

14.1產(chǎn)品僅用于體外診斷，試劑中含有的化學(xué)成分接觸人體后是否會(huì)產(chǎn)生不良的影響后果。

14.2如無確切的證據(jù)證明其安全性，對(duì)所有樣本和反應(yīng)廢棄物都應(yīng)視為傳染源對(duì)待，提示操作者采取必要的防護(hù)措施。若試劑組分中，如質(zhì)控品、校準(zhǔn)品等含有人源物質(zhì)的組分，這些組分亦應(yīng)該被視為傳染源對(duì)待；對(duì)于動(dòng)物源性組分，應(yīng)給出具有潛在感染性的警告。

14.3采用不同方法學(xué)的試劑檢測(cè)所得結(jié)果不應(yīng)直接相互比較，以免造成錯(cuò)誤的醫(yī)學(xué)解釋；建議實(shí)驗(yàn)室在發(fā)給臨床醫(yī)生的檢測(cè)報(bào)告注明所用試劑特征。

14.4其他有關(guān)堿性磷酸酶測(cè)定的注意事項(xiàng)。

14.【標(biāo)識(shí)的解釋】

說明書和標(biāo)簽中如有圖形或符號(hào)，請(qǐng)解釋其代表的意義。

（六）質(zhì)量管理體系文件

主要包括綜述、生產(chǎn)制造信息、質(zhì)量管理體系程序、管理職責(zé)程序、資源管理程序、產(chǎn)品實(shí)現(xiàn)程序、質(zhì)量管理體系的測(cè)量、分析和改進(jìn)程序、其他質(zhì)量體系程序信息以及質(zhì)量管理體系核查文件等。

三、參考文獻(xiàn)

[1]尚紅,王毓三,申子瑜.全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程（第4版）[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2015.

[2]國家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局.體外診斷試劑注冊(cè)與備案管理辦法:國家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局令第48號(hào)[Z].

[3]國家食品藥品監(jiān)督管理局.醫(yī)療器械說明書和標(biāo)簽管理規(guī)定:國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第6號(hào)[Z].

[4]國家藥品監(jiān)督管理局.免于臨床試驗(yàn)體外診斷試劑目錄：國家藥監(jiān)局通告2021年第70號(hào)[Z].

[5]國家藥品監(jiān)督管理局.免于臨床試驗(yàn)的體外診斷試劑臨床評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則:國家藥監(jiān)局通告2021年第74號(hào)[Z].

[6]國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械審評(píng)中心.定量檢測(cè)體外診斷試劑分析性能評(píng)估注冊(cè)審查指導(dǎo)原則:國家藥監(jiān)局器審中心通告2022年第32號(hào)[Z].

[7]國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械審評(píng)中心.體外診斷試劑參考區(qū)間確定注冊(cè)審查指導(dǎo)原則:國家藥監(jiān)局器審中心關(guān)于發(fā)布定性檢測(cè)體外診斷試劑分析性能評(píng)估等6項(xiàng)醫(yī)療器械產(chǎn)品注冊(cè)審查指導(dǎo)原則通告2022年第36號(hào)[Z].

[8]國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械審評(píng)中心.體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則：國家藥監(jiān)局器審中心關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑主要原材料研究注冊(cè)審查指導(dǎo)原則等12項(xiàng)注冊(cè)審查指導(dǎo)原則通告2024年第1號(hào)[Z].

[9]國家藥品監(jiān)督管理局.醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則:國家藥監(jiān)局通告2022年第8號(hào)[Z].

[10]GB/T 42062-2022,醫(yī)療器械風(fēng)險(xiǎn)管理對(duì)醫(yī)療器械的應(yīng)用[S].

[11]GB/T 21415-2008,體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測(cè)量 校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計(jì)量學(xué)溯源性[S].

[12]YY/T 1234-2014,堿性磷酸酶測(cè)定試劑（盒）（NPP底物-AMP緩沖液法）[S].

[13]YY/T 1549-2017,生化分析儀用校準(zhǔn)物[S].

[14]YY/T 1662-2019,生化分析儀用質(zhì)控物[S].

[15]YY/T 1709-2020,體外診斷試劑用校準(zhǔn)物測(cè)量不確定度評(píng)定[S].

[16]WS/T 404.1-2018,臨床常用生化檢驗(yàn)項(xiàng)目參考區(qū)間 第1部分：血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、堿性磷酸酶和γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶[S].