附件：電解質(zhì)鉀、鈉、氯、鈣測定試劑注冊技術(shù)審查指導原則（2017年第213號）.doc

電解質(zhì)鉀、鈉、氯、鈣測定試劑
注冊技術(shù)審查指導原則

本指導原則旨在指導注冊申請人對電解質(zhì)鉀、鈉、氯、鈣四種測定試劑注冊申報資料的準備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門審評注冊申報資料提供參考。

本指導原則是對電解質(zhì)鉀、鈉、氯、鈣測定試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進行充實和細化。

本指導原則是供申請人和審查人員使用的指導文件，不涉及注冊審批等行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如有能夠滿足法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應(yīng)提供詳細的研究資料和驗證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導原則。

本指導原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標準體系及當前認知水平下制定的，隨著法規(guī)、標準體系的不斷完善和科學技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進行調(diào)整。

一、適用范圍

電解質(zhì)鉀、鈉、鈣測定試劑用于體外定量測定人體樣本中鉀離子、鈉離子、鈣離子的含量，臨床上主要用于鉀、鈉、鈣代謝紊亂的輔助診斷。電解質(zhì)氯測定試劑用于體外定量測定人體樣本中氯的含量，臨床上主要用于高氯血癥或低氯血癥的輔助診斷。

從方法學考慮，本指導原則中鉀、鈉、氯測定試劑主要指采用酶法原理，鈣測定試劑主要指采用偶氮砷Ⅲ法、鄰甲酚酞絡(luò)合銅法、甲基麝香草酚藍法原理。利用全自動、半自動生化分析儀或分光光度計，在醫(yī)學實驗室進行鉀離子、鈉離子、氯、鈣離子定量檢驗所使用的臨床化學體外診斷試劑。本文不適用于干式電解質(zhì)鉀、鈉、氯、鈣測定試劑。

依據(jù)《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）、《食品藥品監(jiān)管總局關(guān)于印發(fā)體外診斷試劑分類子目錄的通知》（食藥監(jiān)械管〔2013〕242號），電解質(zhì)鉀、鈉、氯、鈣測定試劑管理類別為二類，分類代碼為6840。

鉀濃度的測定方法目前主要為火焰光度法、離子選擇電極法和酶法測定。從方法學考慮，本指導原則僅適用酶法測定，反應(yīng)原理為利用鉀離子依賴性丙酮酸激酶催化底物磷酸烯醇式丙酮酸（PEP）與二磷酸腺苷（ADP）反應(yīng)生成丙酮酸，丙酮酸在乳酸脫氫酶的催化下與NADH偶聯(lián)生成NAD+，通過在340nm處吸光度的變化，計算鉀離子濃度。

鈉濃度的測定方法目前主要為火焰光度法、離子選擇電極測定法和酶法測定。從方法學考慮，本指導原則僅適用酶法測定。反應(yīng)原理為利用鈉離子依賴的β-半乳糖苷酶催化鄰硝基苯β-D-半乳吡喃糖苷 （ONPG）底物生成產(chǎn)物鄰硝基酚（ONP）和半乳糖。其中生成的ONP在405nm的吸光度值上升與鈉離子濃度成正比，從而根據(jù)吸光度值的變化計算鈉離子的濃度。

氯濃度的測定方法目前主要為放射性核素稀釋法、硝酸汞滴定法、離子選擇電極法和酶法測定。從方法學考慮，本指導原則僅適用酶法測定，反應(yīng)原理為α-淀粉酶在氯離子的激活下，催化其底物如2-氯-4-硝基苯-半乳糖-a-D麥芽三糖苷（CNP-G3）（或其他α-淀粉酶的底物生產(chǎn)其相應(yīng)的產(chǎn)物），生成2-氯-4-硝基酚（CNP）2-氯-4-硝基酚在405nm附近有吸收峰，通過在405nm處吸光度的變化，計算氯離子濃度。

總鈣的測定方法有比色法（最常用的是鄰甲酚酞絡(luò)合酮法、甲基麝香草酚藍法、偶氮砷Ⅲ法）、火焰光度法、原子吸收分光光度法、滴定法（氧化還原滴定法、絡(luò)合滴定法）、放射性核素稀釋質(zhì)譜法等。本指導原則適用于使用偶氮砷Ⅲ法、鄰甲酚酞絡(luò)合酮法、甲基麝香草酚藍法的比色法測定，反應(yīng)原理如下：

1.偶氮砷Ⅲ法

在含有8-羥基喹啉-5-磺酸的反應(yīng)體系中，鎂離子被掩蔽，偶氮砷Ⅲ與鈣離子反應(yīng)形成紫色絡(luò)合物。

2.鄰甲酚酞絡(luò)合酮法

鄰甲酚酞絡(luò)合酮是金屬絡(luò)合指示劑，同時也是酸堿指示劑，在堿性溶液中與鈣及鎂鰲合，生成紫紅色鰲合物。作鈣測定時，在試劑中加入8-羥基喹啉以消除標本中鎂離子的干擾。

3.甲基麝香草酚藍法

血清中鈣離子在堿性溶液中與甲基麝香草酚藍結(jié)合，生成藍色的絡(luò)合物。加入適量的8-羥基喹啉，可消除鎂離子對測定的干擾，與同樣處理的鈣標準液進行比較，以求得血清總鈣的含量。

本指導原則不適用于：

（一）酶法原理之外的其他鉀、鈉、氯測定試劑。

（二）偶氮砷Ⅲ法、鄰甲酚酞絡(luò)合銅法、甲基麝香草酚藍法原理之外的其他鈣測定試劑。

二、注冊申報材料要求

（一）綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、方法學特征、生物安全性評價、研究結(jié)果總結(jié)以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容，應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）的相關(guān)要求。相關(guān)描述應(yīng)至少包含如下內(nèi)容：

1.產(chǎn)品預(yù)期用途及輔助診斷的臨床適應(yīng)證背景情況 

（1）電解質(zhì)鉀、鈉、氯、鈣的生物學特征、結(jié)構(gòu)與功能、在體內(nèi)正常和病理狀態(tài)下的代謝途徑和存在形式。

（2）與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)證背景情況，如臨床相關(guān)疾病的發(fā)生、實驗室診斷方法等。

2.產(chǎn)品描述

包括產(chǎn)品所采用的技術(shù)原理、主要原材料的來源、質(zhì)量控制及制備方法、主要生產(chǎn)工藝過程及關(guān)鍵控制點，質(zhì)控品、校準品的制備方法及溯源情況。

3.有關(guān)生物安全性方面的說明

如果體外診斷試劑中的主要原材料采用各種動物、病原體、人源的組織和體液等生物材料經(jīng)處理或添加某些物質(zhì)制備而成，為保證產(chǎn)品在運輸、使用過程中對使用者和環(huán)境的安全，研究者應(yīng)提供對上述原材料所采用的滅活等試驗方法的說明。人源性材料須對有關(guān)傳染病（HIV、HBV、HCV等）病原體檢測予以說明，并提供相關(guān)的證明文件。

4.有關(guān)產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評價

5.參考文獻

6.其他

包括同類產(chǎn)品在國內(nèi)外批準上市的情況，相關(guān)產(chǎn)品所采用的技術(shù)方法及臨床應(yīng)用情況，申請注冊產(chǎn)品與國內(nèi)外同類產(chǎn)品的異同等。

（二）主要原材料的研究資料（如需提供）

主要原材料的選擇、制備、質(zhì)量標準及實驗驗證研究資料；質(zhì)控品（如產(chǎn)品包含）、校準品（如產(chǎn)品包含）的原料選擇、制備、定值過程及試驗資料；校準品的溯源性文件，包括具體溯源鏈、實驗方法、數(shù)據(jù)及統(tǒng)計分析等詳細資料。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料（如需提供）

應(yīng)包含產(chǎn)品的工藝流程圖和關(guān)鍵控制點、反應(yīng)原理介紹、確定反應(yīng)溫度、時間、緩沖體系比較等條件的研究資料、確定反應(yīng)所需物質(zhì)用量的研究資料等。

（四）分析性能評估資料

應(yīng)至少包括具體的研究方法、試驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計方法、研究結(jié)論等。性能評估時應(yīng)將試劑和所選用的校準品、質(zhì)控品作為一個整體進行評價，評估整個系統(tǒng)的性能是否符合要求。

性能評估應(yīng)至少包括試劑空白、準確度、精密度、線性范圍、分析特異性（抗干擾能力）、其他影響檢測的因素等。

1.試劑空白

試劑空白包括試劑空白吸光度與試劑空白吸光度變化率（如適用）。在特定溫度、波長、光徑條件下，記錄測試啟動時的吸光度（A1）或約5min（t）后的吸光度（A2），A2測試結(jié)果即為試劑空白吸光度測定值；計算出吸光度變化值（｜A2-A1｜/t）（t為測量時間間隔）即為試劑空白吸光度變化率。

2.準確度

對測量準確度的評價方法依次包括：相對偏差、回收試驗、比對試驗等方法。該研究項目已有相應(yīng)國家（國際）參考物質(zhì)，優(yōu)先使用國家（國際）參考物質(zhì)進行驗證。

2.1相對偏差

使用參考物質(zhì)或有證參考物質(zhì)（CRM）作為樣本進行測試，重復測定3次，計算平均值與標示值的相對偏差。

或用由參考方法定值的高、低2個濃度的待測樣本對試劑盒進行測試，每個濃度樣本重復測定3次，分別取測試結(jié)果均值，計算相對偏差。

2.2回收試驗

在待測樣本中加入一定量的標準品或純品，每個濃度重復測定3次，計算回收率。

回收試驗注意事項：

2.2.1加入的溶液體積與待測樣本體積比應(yīng)不大于1：9或其體積比不會產(chǎn)生基質(zhì)的變化。

2.2.2加入溶液后樣本總濃度應(yīng)在試劑盒測定線性范圍內(nèi)。

2.2.3標準品或校準品應(yīng)有溯源性（建議使用第三方提供的參考物質(zhì)或有證參考物質(zhì)（CRM））。

2.3方法學比對

采用參考方法或國內(nèi)/國際普遍認可的已上市同類試劑作為參比方法，與擬申報試劑同時檢測一批待測樣本（至少40例樣本），從測定結(jié)果間的差異了解擬申報試劑與參比方法間的偏倚。如偏倚很小或在允許的誤差范圍內(nèi)，說明兩檢測系統(tǒng)對樣本測定結(jié)果基本相符，對同一份臨床樣本的醫(yī)學解釋，擬申報試劑與參比方法相比不會產(chǎn)生差異結(jié)果。

在實施方法學比對前，應(yīng)分別對擬申報試劑和參比試劑進行初步評估，只有在確認兩者都分別符合各自相關(guān)的質(zhì)量標準后方可進行比對試驗。方法學比對時應(yīng)注意質(zhì)量控制、樣本類型、濃度分布范圍并對結(jié)果進行合理的統(tǒng)計學分析。其中，濃度分布應(yīng)覆蓋產(chǎn)品的可報告范圍。

3.精密度

測量精密度的評估應(yīng)至少包括正常范圍和病理范圍兩個濃度水平的樣本進行。

測量精密度的評價方法并無統(tǒng)一的標準可依，可根據(jù)不同的試劑特征或申請人的研究習慣進行，建議參考相關(guān)的美國臨床實驗室標準化協(xié)會批準指南（CLSI-EP）或國內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的文件進行。

4.線性范圍

建立試劑線性范圍所用的樣本基質(zhì)應(yīng)盡可能與臨床實際檢測的樣本相似，理想的樣本為分析物濃度接近預(yù)期測定上限的混合人血清/血漿，且應(yīng)充分考慮多倍稀釋對樣本基質(zhì)的影響。

超出線性范圍的樣本如需稀釋后測定，應(yīng)作相關(guān)研究，明確稀釋液類型及最大可稀釋倍數(shù)，研究過程應(yīng)注意基質(zhì)效應(yīng)影響，必要時應(yīng)提供基質(zhì)效應(yīng)研究有關(guān)的資料。

5.分析特異性

應(yīng)明確已知干擾因素對測定結(jié)果的影響：可采用回收實驗對不同濃度的溶血、黃疸、脂血、維生素C對檢測結(jié)果的影響進行評價，干擾物濃度的分布應(yīng)覆蓋人體生理及病理狀態(tài)下可能出現(xiàn)的物質(zhì)濃度，明確干擾物質(zhì)影響的最大濃度。藥物干擾的研究可根據(jù)需要由申請人選擇是否進行或選擇何種藥物及其濃度進行。

6.分析靈敏度

用已知濃度的樣本進行測試，記錄在試劑（盒）規(guī)定參數(shù)下產(chǎn)生的吸光度改變。換算為n單位吸光度差值（ΔA）或吸光度變化（ΔA/min）即為本產(chǎn)品的分析靈敏度。

7.其他需注意問題

7.1不同適用機型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別評估，不同樣本類型、不同包裝規(guī)格應(yīng)分別進行分析性能評估。如不同包裝規(guī)格之間不存在性能差異，需要提交包裝規(guī)格之間不存在性能差異的詳細說明，具體說明不同包裝規(guī)格之間的差別及可能產(chǎn)生的影響。

分析性能評估報告應(yīng)明確所用儀器設(shè)備型號、試劑、校準品、質(zhì)控品等的產(chǎn)品名稱、生產(chǎn)企業(yè)名稱、產(chǎn)品批號等信息。

7.2校準品溯源及質(zhì)控品賦值

應(yīng)參照GB/T 21415—2008《體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準品和控制物質(zhì)賦值的計量學溯源性》的要求，提供企業(yè)（工作）校準品及試劑盒配套校準品定值及不確定度的研究資料，提供質(zhì)控品賦值及其靶值范圍確定的研究資料。

（五）參考區(qū)間確定資料

提供參考區(qū)間確定所采用的樣本來源、確定方法及詳細的試驗資料, 如可參考WS/T 404.3—2012《臨床常用生化檢驗項目參考區(qū)間 第3部分：血清鉀、鈉、氯》。研究結(jié)論應(yīng)與產(chǎn)品說明書【參考區(qū)間】的相應(yīng)描述保持一致。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。這里主要指試劑的穩(wěn)定性，通常包括實時穩(wěn)定性（有效期）、開瓶穩(wěn)定性、復溶穩(wěn)定性等（各3個批次）,如有需要可增加運輸穩(wěn)定性、機載穩(wěn)定性研究等。申請人應(yīng)至少提供實時穩(wěn)定性和開瓶穩(wěn)定性、干粉試劑同時應(yīng)提供復溶穩(wěn)定性研究資料。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實施方案、詳細的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論，應(yīng)涵蓋產(chǎn)品中受穩(wěn)定性影響的性能指標（如準確度、線性范圍等）。

實時穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少3批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

適用樣本的穩(wěn)定性主要包括室溫保存、冷藏和冷凍條件下的有效期驗證，可以在合理溫度范圍內(nèi)選擇溫度點（溫度范圍），每間隔一定的時間段即對儲存樣本進行性能的分析驗證，從而確認不同類型樣本的效期穩(wěn)定性。適于冷凍保存的樣本還應(yīng)對凍融次數(shù)進行評價。

試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果均應(yīng)在說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】兩項中進行詳細說明。

（七）臨床評價資料

根據(jù)《關(guān)于發(fā)布免于進行臨床試驗的第二類醫(yī)療器械目錄（第二批）的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2016年第133號）和《關(guān)于發(fā)布第三批免于進行臨床試驗醫(yī)療器械目錄的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2017年第170號），電解質(zhì)鉀、鈉、氯、鈣測定試劑可免于臨床試驗。

申請人可依照《總局關(guān)于發(fā)布免于進行臨床試驗的體外診斷試劑臨床評價資料基本要求（試行）的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2017年第179號）開展評價。申請人如無法按要求對“目錄”中產(chǎn)品進行臨床評價，應(yīng)進行臨床試驗。

臨床試驗中的基本要求包括：

1.研究方法

選擇境內(nèi)已批準上市的性能不低于試驗用體外診斷試劑的同類產(chǎn)品作為參比試劑，采用試驗用體外診斷試劑（以下稱待評試劑）與之進行對比試驗研究，證明本品與已上市產(chǎn)品等效。

2.臨床試驗機構(gòu)的選擇

至少應(yīng)當選定不少于2家（含2家）臨床試驗機構(gòu)，臨床試驗機構(gòu)實驗操作人員應(yīng)有足夠的時間熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（試劑、質(zhì)控及操作程序等），熟悉評價方案。在整個實驗中，待評試劑和參比試劑都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準確性及可重復性。

3.臨床試驗方案

臨床試驗實施前，研究人員應(yīng)從流行病學、統(tǒng)計學、臨床醫(yī)學、檢驗醫(yī)學等多方面考慮，設(shè)計科學合理的臨床研究方案。各臨床研究機構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)保持一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預(yù)定的方案實施，不可隨意改動。整個試驗過程應(yīng)在臨床研究機構(gòu)的實驗室內(nèi)并由本實驗室的技術(shù)人員操作完成，申報單位的技術(shù)人員除進行必要的技術(shù)指導外，不得隨意干涉實驗進程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。

試驗方案中應(yīng)確定嚴格的病例納入/排除標準，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗操作過程中和判定試驗結(jié)果時應(yīng)采用盲法以保證試驗結(jié)果的客觀性。各研究單位選用的參比試劑及所用機型應(yīng)保持一致，以便進行合理的統(tǒng)計學分析。另外，待評試劑的樣本類型應(yīng)與產(chǎn)品說明書一致，且不應(yīng)超越參比試劑對樣本類型的檢測要求，如果選擇了參比試劑適用樣本類型以外的樣本，則應(yīng)采用其他合理方法對額外的樣本類型進行驗證。

開展體外診斷試劑臨床試驗，申請人應(yīng)當按照試驗用體外診斷試劑的類別、風險、預(yù)期用途等特性，組織制定科學、合理的臨床試驗方案。一般應(yīng)當包括以下內(nèi)容：

（1）一般信息（包括產(chǎn)品信息、臨床試驗開展的時間和人員等相關(guān)信息、申請人相關(guān)信息等）。

（2）臨床試驗的背景資料。

（3）試驗?zāi)康摹?/p>

（4）試驗設(shè)計。

（5）評價方法。

（6）統(tǒng)計方法。

（7）對臨床試驗方案修正的規(guī)定。

（8）臨床試驗涉及的倫理問題和說明、《知情同意書》文本（如有）。

（9）數(shù)據(jù)處理與記錄保存。

（10）其他需要說明的內(nèi)容。

4.研究對象選擇

臨床試驗應(yīng)選擇具有特定癥狀/體征人群作為研究對象。企業(yè)在建立病例納入標準時，應(yīng)考慮到不同人群的差異，盡量覆蓋各類適用人群。在進行結(jié)果統(tǒng)計分析時，建議對各類人群分別進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析?？傮w樣本數(shù)不少于200例，異常值樣本數(shù)不少于60例。

血漿應(yīng)明確抗凝劑的要求、存貯條件、可否凍融等要求及避免使用的樣本。實驗中，盡可能使用新鮮樣本，避免貯存。

申報的樣本類型均應(yīng)在臨床試驗中進行驗證。如果聲稱同時適用于血清和血漿樣本，可完成一個樣本類型（血清或血漿）不少于200例的臨床研究，同時可選至少100例血清或血漿同源樣本進行比對研究（采用考核試劑評價），其中不同濃度樣本分布情況與總例數(shù)中分布情況應(yīng)一致。

如產(chǎn)品發(fā)生涉及檢測條件優(yōu)化、增加與原樣本類型具有可比性的其他樣本類型等變更事項，臨床樣本總數(shù)至少為100例，并在至少兩家臨床試驗機構(gòu)開展臨床試驗；變更參考區(qū)間及增加臨床適應(yīng)證等變更事項，應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品具體變更情況，酌情增加臨床試驗總樣本數(shù)。

5.統(tǒng)計學分析

對臨床試驗結(jié)果的統(tǒng)計應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計方法，如相關(guān)分析、線性回歸、絕對偏倚/偏差及相對偏倚/偏差分析等。對于對比實驗的等效性研究，最常用是對待評試劑和參比試劑兩組檢測結(jié)果的相關(guān)及線性回歸分析，應(yīng)重點觀察相關(guān)系數(shù)（r值）或判定系數(shù)（R2）、回歸擬合方程（斜率和y軸截距）等指標。結(jié)合臨床試驗數(shù)據(jù)的正/偏態(tài)分布情況，建議統(tǒng)計學負責人選擇合理的統(tǒng)計學方法進行分析，統(tǒng)計分析應(yīng)可以證明兩種方法的檢測結(jié)果無明顯統(tǒng)計學差異。在臨床研究方案中應(yīng)明確統(tǒng)計檢驗假設(shè)，即評價待評試劑與參比試劑是否等效的標準。

6.結(jié)果差異樣本的驗證

對于比較研究試驗中測定結(jié)果不符的樣本，應(yīng)采用“金標準”或其他合理的方法進行復核，以便對臨床試驗結(jié)果進行分析。如無需復核，應(yīng)詳細說明理由。

7.臨床試驗報告撰寫

根據(jù)《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）的要求，臨床試驗報告應(yīng)該對試驗的整體設(shè)計及各個關(guān)鍵點給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對整個臨床試驗實施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法。申請人或臨床試驗牽頭單位應(yīng)對各臨床試驗機構(gòu)的報告進行匯總，并完成臨床試驗總結(jié)報告。臨床試驗報告的格式及內(nèi)容如下：

7.1首篇

首篇是每份臨床試驗報告的第一部分，所有臨床試驗報告均應(yīng)包含該部分內(nèi)容。

7.1.1封面標題

包括試驗用體外診斷試劑的通用名稱、試驗開始日期、試驗完成日期、主要研究者（簽名）、臨床試驗機構(gòu)（蓋章）、統(tǒng)計學負責人簽名及單位蓋章、申請人（蓋章）、申請人的聯(lián)系人及聯(lián)系方式、報告日期、原始資料保存地點。

7.1.2目錄

列出整個臨床試驗報告的內(nèi)容目錄和對應(yīng)頁碼。

7.1.3研究摘要

對臨床試驗情況進行簡單的介紹。

7.1.4試驗研究人員

列出臨床試驗主要研究人員的姓名、單位、在研究中的職責及其簡歷（列于附件中），主要研究人員包括主要研究者及各單位的主要參加人員、統(tǒng)計學負責人、臨床試驗報告的撰寫人。

7.1.5縮略語

臨床試驗報告中所用的縮略語的全稱。

7.2正文內(nèi)容和報告格式

7.2.1基本內(nèi)容

引言：介紹與臨床試驗產(chǎn)品有關(guān)的背景情況，包括（1）被測物的來源、生物及理化性質(zhì)；（2）臨床預(yù)期使用目的，所針對的目標適應(yīng)證人群，目前針對該適應(yīng)證所采用的臨床或?qū)嶒炇以\斷方法等；（3）所采用的方法、原理、技術(shù)要求等；（4）國內(nèi)外已批準上市產(chǎn)品的應(yīng)用現(xiàn)狀等。說明申請人和臨床試驗機構(gòu)間的合作關(guān)系。

7.2.2研究目的。

說明本臨床試驗所要達到的目的。

7.2.3試驗管理。

對試驗管理結(jié)構(gòu)的描述：管理結(jié)構(gòu)包括主要研究者、主要參加人員、實驗室質(zhì)量控制情況、統(tǒng)計/數(shù)據(jù)管理情況以及試驗中發(fā)生的問題及其處理措施等。

7.2.4試驗設(shè)計。

7.2.4.1試驗總體設(shè)計及方案的描述。

試驗的總體設(shè)計和方案的描述應(yīng)清晰、簡潔，必要時采用圖表等直觀的方式。試驗進行時方案修改的情況和任何方案以外的信息來源也應(yīng)詳細敘述。應(yīng)包括：

a.臨床試驗的整體管理情況、臨床試驗機構(gòu)選擇、臨床主要研究人員簡介等基本情況介紹。

b.病例納入/排除標準、不同年齡段人群的預(yù)期選擇例數(shù)及標準。

c.樣本類型，樣本的收集、處理及保存等。

d.統(tǒng)計學方法、統(tǒng)計軟件、評價統(tǒng)計結(jié)果的標準。

7.2.4.2試驗設(shè)計及試驗方法選擇。

試驗設(shè)計中應(yīng)包括以下內(nèi)容：

a.樣本量及樣本量確定的依據(jù)。

b.樣本選擇依據(jù)、入選標準、排除標準和剔除標準。

c.樣本采集、保存、運輸方法等。

d.對比試劑的確立。

e.臨床試驗用所有產(chǎn)品的名稱、規(guī)格、來源、批號、效期及保存條件，對比試劑的注冊情況?？己嗽噭┖蛥⒈仍噭┑拿Q、批號、有效期及所用機型等信息。

f.質(zhì)量控制方法：對質(zhì)量控制方法進行簡要的闡述。試驗人員培訓、儀器日常維護、儀器校準、質(zhì)控品運行情況，對檢測精密度、質(zhì)控品回收（或測量值）、抽查結(jié)果評估。

g.臨床試驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析方法：

對各研究單位的病例數(shù)、病種分布情況進行總合，建議以列表或圖示方式給出具體例數(shù)及百分比。

數(shù)據(jù)預(yù)處理、差異數(shù)據(jù)的重新檢測或第三方驗證以及是否納入最終數(shù)據(jù)統(tǒng)計、對異常值或缺失值的處理、研究過程中是否涉及對方案的修改。

定量值相關(guān)性和一致性分析：用回歸分析驗證兩種試劑結(jié)果的相關(guān)性，以y=a+bx和R2的形式給出回歸分析的擬合方程，其中：y是考核試劑結(jié)果，x是參比試劑結(jié)果，b是方程斜率，a是y軸截距，R2是判定系數(shù)，同時應(yīng)給出b的95%（或99%）置信區(qū)間，定量值結(jié)果應(yīng)無明顯統(tǒng)計學差異。

h.具體試驗過程，樣本檢測、數(shù)據(jù)收集、樣本長期保存、結(jié)果不一致樣本的校驗等。

i.試驗過程中方案的修改。

一般情況下，臨床試驗方案不宜更改。試驗過程中對方案的任何修改均應(yīng)說明，對更改的時間、理由、更改過程及有無備案進行詳細闡述并論證其對整個研究結(jié)果評價的影響。

7.2.5臨床試驗結(jié)果及分析。

7.2.6討論和結(jié)論。對總體結(jié)果進行總結(jié)性描述并簡要分析試驗結(jié)果，對本次臨床研究有無特別說明，最后得出臨床試驗結(jié)論。

7.3有關(guān)臨床試驗中特別情況的說明

7.4附件

7.4.1臨床試驗中所采用的其他試驗方法或其他診斷試劑產(chǎn)品的基本信息，如試驗方法、診斷試劑產(chǎn)品來源、產(chǎn)品說明書及注冊批準情況。

7.4.2臨床試驗中的所有試驗數(shù)據(jù)，需由臨床試驗操作者、復核者簽字，臨床試驗機構(gòu)蓋章（封面蓋章和騎縫章）。

7.4.3主要參考文獻。

7.4.4主要研究者簡歷。

7.4.5申請人需要說明的其他情況等。

（八）產(chǎn)品風險分析研究資料

申請人應(yīng)考慮產(chǎn)品壽命周期的各個環(huán)節(jié)，從預(yù)期用途、可能的使用錯誤、與安全性有關(guān)的特征、已知及可預(yù)見的危害等方面的判定以及對患者風險的估計進行風險分析，應(yīng)符合YY/T 0316/ISO 14971《醫(yī)療器械風險管理對醫(yī)療器械的應(yīng)用》的要求（最新版本適用）。

（九）產(chǎn)品技術(shù)要求

產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）、《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）和《關(guān)于發(fā)布醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的相關(guān)要求。

該產(chǎn)品技術(shù)要求中涉及的產(chǎn)品適用的引用文件和主要性能指標等相關(guān)內(nèi)容如下：

1.產(chǎn)品適用的標準（最新版本適用）

（1）GB/T 21415《體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準品和控制物質(zhì)賦值的計量學溯源性》

（2）GB/T 191《包裝儲運圖示標志》

（3）GB/T 26124《臨床化學體外診斷試劑（盒）》

（4）YY/T 0316《醫(yī)療器械 風險管理對醫(yī)療器械的應(yīng)用》

（5）YY/T 0466.1《醫(yī)療器械 用于醫(yī)療器械標簽、標記和提供信息的符號 第1部分：通用要求》

（6）YY/T 1202《鉀測定試劑盒（酶法）》

（7）YY/T 1203《鈉測定試劑盒（酶法）》

（8）YY/T 1229《鈣測定試劑（盒）》

（9）YY/T 1196《氯測定試劑盒（酶法）》

2.主要性能指標

2.1鉀測定試劑盒（酶法）主要性能指標

2.1.1外觀

應(yīng)與技術(shù)要求中表明的試劑外觀一致。這里應(yīng)當包括試劑包裝外觀、試劑內(nèi)包裝外觀、試劑的外觀。

2.1.2裝量

試劑裝量應(yīng)不少于標示裝量或規(guī)定限。

2.1.3試劑空白

2.1.3.1試劑空白吸光度

在37℃、340nm、1cm光徑條件下，試劑空白吸光度應(yīng)不小于1.0。

2.1.3.2試劑空白吸光度變化率

在37℃、340nm、1cm光徑條件下，試劑空白吸光度變化率（ΔA/min）應(yīng)不大于0.200。

2.1.4分析靈敏度

用已知濃度的樣本測試試劑，記錄試劑在37℃、340nm、1cm光徑條件下的吸光度變化率。按照生產(chǎn)企業(yè)規(guī)定的分析靈敏度計算公式計算分析靈敏度，應(yīng)符合生產(chǎn)企業(yè)聲稱的要求。

2.1.5線性區(qū)間

試劑線性范圍應(yīng)覆蓋濃度2.5mmol/L～7mmol/L區(qū)間。

2.1.5.1線性相關(guān)系數(shù)（r）應(yīng)不小于0.9900。

2.1.5.2線性相對偏差應(yīng)不超過±15.0%。

用接近線性區(qū)間下限的低濃度（活性）樣本稀釋接近線性區(qū)間上限的高濃度（活性）樣本，混合成至少5個有效稀釋濃度（xi），分別測試試劑，每個稀釋濃度測試1—3次，分別求出測定結(jié)果的均值（yi）。以稀釋濃度（xi）為自變量，以測定結(jié)果均值（yi）為因變量求出線性回歸方程。按公式（1）計算線性回歸的相關(guān)系數(shù)（r）。

稀釋濃度（xi）代入線性回歸方程，計算yi的估計值及yi與估計值的相對偏差。

2.1.6精密度

2.1.6.1重復性

用同批號的試劑盒對高低值樣本（分為正常范圍和病理范圍），重復測試至少10次，分別計算測量值的平均值（）和標準差（SD）。計算變異系數(shù)（CV）應(yīng)不大于5.0%。

2.1.6.2批內(nèi)瓶間差（適用于干粉或凍干試劑）

用高低值樣本分別測試同一批號的20個待檢試劑（盒），并計算20個測量值的平均值（x1）和標準差（SD1）。

用高低值樣本對該批號的1個待檢試劑（盒）重復測試20次，計算結(jié)果的均值（x2）和標準差（SD2）。按式（2）、式（3）計算瓶間差的變異系數(shù)（CV），批內(nèi)瓶間差均應(yīng)不大于5.0%。

當s1＜s2時，令CV=0

2.1.6.3批間差

用同一份樣本分別測試3個不同批號的試劑，每個批號測試3次，分別計算每批3次測定的均值（i=1,2,3），按公式（4）、（5）計算相對極差（R）。

式中：

試劑批間差應(yīng)不大于10.0%。

2.1.7準確度

可選用以下方法進行驗證，優(yōu)先采用相對偏差的方法。

2.1.7.1相對偏差：相對偏差應(yīng)不超過±15.0%。

用參考物質(zhì)或有證參考物質(zhì)（CRM）對試劑（盒）進行測試，重復檢測3次，取測試結(jié)果均值（M）按式（6）計算相對偏差（B）。

或用由參考方法定值的高、低2個濃度的人血清/血漿樣本（可參照EP6-A的要求適當添加被測物，以獲得高濃度的樣本）對試劑盒進行測試，每個濃度樣本重復測定3次，分別取測試結(jié)果均值，按式（6）計算相對偏差（B）。

式中：

B—相對偏差；

M—測試結(jié)果均值；

T—有證參考物質(zhì)標示值，或各濃度人源樣本定值。

2.1.7.2回收試驗 在臨床樣本中加入一定體積標準溶液（標準溶液體積與臨床樣本體積應(yīng)不會產(chǎn)生基質(zhì)的變化，加入標準溶液后樣本總濃度必須在試劑測定線性范圍內(nèi)）或純品，回收試驗一般選取兩個或兩個以上濃度進行，回收率應(yīng)在90%—110%之間。

2.1.7.3比對試驗：相關(guān)系數(shù)r不小于0.9900，相對偏差應(yīng)不超過企業(yè)聲稱的要求。

參照CLSL EP9—A2的方法，用不少于40個在檢測范圍內(nèi)不同濃度的人源樣本，用生產(chǎn)企業(yè)指定的分析系統(tǒng)作為比對方法，每份樣本按待測試劑操作方法及比對方法分別測試。用線性回歸方法計算兩組結(jié)果的相關(guān)系數(shù)及相對偏差。

2.1.8穩(wěn)定性

可選用以下方法之一進行驗證：

2.1.8.1效期穩(wěn)定性：生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)規(guī)定產(chǎn)品的有效期。取到有效期后的樣品檢測，試劑外觀、空白吸光度、空白吸光度變化率、分析靈敏度、準確度、線性范圍、重復性應(yīng)符合技術(shù)要求。

2.1.8.2熱穩(wěn)定性試驗：

按要求熱處理后的樣品檢測，試劑外觀、空白吸光度、空白吸光度變化率、分析靈敏度、準確度、線性范圍、重復性應(yīng)符合技術(shù)要求。

注1：熱穩(wěn)定性試驗不能用于推導產(chǎn)品有效期，除非是采用基于大量的穩(wěn)定性研究數(shù)據(jù)建立的推導公式。

注2：根據(jù)產(chǎn)品特性可選擇2.1.8.1、2.1.8.2方法的任意組合，但所選用的方法宜能驗證產(chǎn)品的穩(wěn)定性，以保證在有效期內(nèi)產(chǎn)品的性能符合技術(shù)要求。

凍干品應(yīng)同時進行復溶穩(wěn)定性試驗，產(chǎn)品性能應(yīng)符合試劑外觀、空白吸光度、空白吸光度變化率、分析靈敏度、準確度、線性范圍、重復性技術(shù)要求。

2.1.9校準品和質(zhì)控品的性能指標（如產(chǎn)品中包含）

應(yīng)至少包含外觀、裝量、準確度、均一性、穩(wěn)定性。凍干型校準品和質(zhì)控品還應(yīng)檢測批內(nèi)瓶間差和復溶穩(wěn)定性。

2.2 鈉測定試劑盒（酶法）主要性能指標

2.2.1外觀

應(yīng)與技術(shù)要求中表明的試劑外觀一致。這里應(yīng)當包括試劑包裝外觀、試劑內(nèi)包裝外觀、試劑的外觀。

2.2.2裝量

試劑裝量應(yīng)不少于標示裝量或規(guī)定限。

2.2.3試劑空白

2.2.3.1試劑空白吸光度

在37℃、405nm、1cm光徑條件下，試劑空白吸光度應(yīng)不大于1.0。

2.2.3.2試劑空白吸光度變化率

在37℃、405nm、1cm光徑條件下，試劑空白吸光度變化率（ΔA/min）應(yīng)不大于0.500。

2.2.4分析靈敏度

用已知濃度的樣本測試試劑，記錄在試劑在37℃、405nm、1cm光徑條件下的吸光度變化率。按照生產(chǎn)企業(yè)規(guī)定的分析靈敏度計算公式計算分析靈敏度，應(yīng)符合生產(chǎn)企業(yè)聲稱的要求。

2.2.5線性區(qū)間

試劑線性應(yīng)覆蓋樣本濃度90 mmol/L～160mmol/L 區(qū)間；

2.2.5.1線性相關(guān)系數(shù)（r）應(yīng)不小于0.9900；

2.2.5.2線性相對偏差應(yīng)不超過±15.0%。

用接近線性區(qū)間下限的低濃度（活性）樣本稀釋接近線性區(qū)間上限的高濃度（活性）樣本，混合成至少5個有效稀釋濃度（xi），分別測試試劑，每個稀釋濃度測試1-3次，分別求出測定結(jié)果的均值（yi）。以稀釋濃度（xi）為自變量，以測定結(jié)果均值（yi）為因變量求出線性回歸方程。按公式（1）計算線性回歸的相關(guān)系數(shù)（r）。

稀釋濃度（xi）代入線性回歸方程，計算yi的估計值及yi與估計值的相對偏差。

2.2.6精密度

2.2.6.1重復性

用同批號的試劑盒對高低值樣本（分為正常范圍和病理范圍），重復測試至少10次，分別計算測量值的平均值（）和標準差（SD）。計算變異系數(shù)（CV）應(yīng)不大于5.0%。

2.2.6.2批內(nèi)瓶間差（適用于干粉或凍干試劑）

用高低值樣本分別測試同一批號的20個待檢試劑，并計算20個測量值的平均值（1）和標準差（SD1）。

用高低值樣本對該批號的1個待檢試劑重復測試20次，計算結(jié)果的均值（2）和標準差（SD2）。按式（2）、式（3）計算瓶間差的變異系數(shù)（CV），批內(nèi)瓶間差均應(yīng)不大于5.0%。

當s1＜s2時，令CV=0

2.2.6.3批間差

用同一份樣本分別測試3個不同批號的試劑，每個批號測試3次，分別計算每批3次測定的均值（i=1,2,3），按公式（4）、（5）計算相對極差（R）。

式中：

試劑批間差應(yīng)不大于10.0%。

2.2.7準確度

可選用以下方法進行驗證；優(yōu)先采用相對偏差的方法。

2.2.7.1相對偏差：相對偏差應(yīng)不超過±15.0%。

用可用于評價常規(guī)方法的有證參考物質(zhì)（CRM）對試劑進行測試，重復檢測3次，取測試結(jié)果均值（M）按式（6）計算相對偏差（B）。

或用由參考方法定值的高、低2個濃度的人血清/血漿樣本（可參照EP6-A的要求適當添加被測物，以獲得高濃度的樣本）對試劑盒進行測試，每個濃度樣本重復測定3次，分別取測試結(jié)果均值，按式（6）計算相對偏差（B）。

式中：

B–相對偏差；

M–測試結(jié)果均值；

T–有證參考物質(zhì)標示值，或各濃度人源樣本定值。

2.2.7.2回收試驗 在臨床樣本中加入一定體積標準溶液（標準溶液體積與臨床樣本體積應(yīng)不會產(chǎn)生基質(zhì)的變化，加入標準溶液后樣本總濃度必須在試劑測定線性范圍內(nèi)）或純品，回收試驗一般選取兩個或兩個以上濃度進行，回收率應(yīng)在90%—110%之間。

2.2.7.3比對試驗：相關(guān)系數(shù)r不小于0.9900，相對偏差應(yīng)不超過企業(yè)聲稱的要求。

參照CLSL EP9—A2的方法，用不少于40個在檢測范圍內(nèi)不同濃度的人源樣本，用生產(chǎn)企業(yè)指定的分析系統(tǒng)作為比對方法，每份樣本按待測試劑操作方法及比對方法分別測試。用線性回歸方法計算兩組結(jié)果的相關(guān)系數(shù)及相對偏差。

2.2.8穩(wěn)定性

可選用以下方法之一進行驗證：

2.2.8.1效期穩(wěn)定性：生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)規(guī)定產(chǎn)品的有效期。取到有效期后的樣品檢測，試劑外觀，空白吸光度、空白吸光度變化率、分析靈敏度、準確度、線性范圍、重復性應(yīng)符合技術(shù)要求。

2.2.8.2熱穩(wěn)定性試驗：

按要求熱處理后的樣品檢測，試劑外觀、空白吸光度、空白吸光度變化率、分析靈敏度、準確度、線性范圍、重復性應(yīng)符合技術(shù)要求。

注1：熱穩(wěn)定性試驗不能用于推導產(chǎn)品有效期，除非是采用基于大量的穩(wěn)定性研究數(shù)據(jù)建立的推導公式。

注2：根據(jù)產(chǎn)品特性可選擇2.2.8.1、2.2.8.2方法的任意組合，但所選用的方法宜能驗證產(chǎn)品的穩(wěn)定性，以保證在有效期內(nèi)產(chǎn)品的性能符合技術(shù)要求。

凍干品應(yīng)同時進行復溶穩(wěn)定性試驗，產(chǎn)品性能應(yīng)符合試劑外觀、空白吸光度、空白吸光度變化率、分析靈敏度、準確度、線性范圍、重復性技術(shù)要求。

2.2.9校準品和質(zhì)控品的性能指標（如產(chǎn)品中包含）

應(yīng)至少包含外觀、裝量、準確度、均一性、穩(wěn)定性。凍干型校準品和質(zhì)控品還應(yīng)檢測批內(nèi)瓶間差和復溶穩(wěn)定性。

2.3 鈣測定試劑主要性能指標

2.3.1外觀

應(yīng)與技術(shù)要求中表明的試劑外觀一致。這里應(yīng)當包括試劑包裝外觀、試劑內(nèi)包裝外觀、試劑的外觀。

2.3.2裝量

試劑裝量應(yīng)不少于標示值。

2.3.3試劑空白吸光度

用試劑測試生理鹽水，記錄試劑參數(shù)規(guī)定讀數(shù)點主波長下的吸光度值，應(yīng)符合生產(chǎn)企業(yè)規(guī)定的要求。

2.3.4分析靈敏度

用試劑盒測試已知濃度在（2.50±0.5）mmol/L的樣本，記錄在試劑規(guī)定參數(shù)下的吸光度或吸光度差值，換算為2.50mmol/L樣本的吸光度或吸光度差值，應(yīng)符合生產(chǎn)企業(yè)規(guī)定的要求。

2.3.5線性區(qū)間

測試血清樣本，鄰甲酚酞絡(luò)合酮法、甲基麝香草酚藍法試劑線性在【1.00,3.75】mmol/L區(qū)間內(nèi),偶氮砷Ⅲ法試劑線性在【1.00,4.00】mmol/L區(qū)間：

線性相關(guān)系數(shù)r應(yīng)不小于0.990

在線性區(qū)間內(nèi)，線性偏差應(yīng)不超過±10.0%

用接近線性區(qū)間下限的低濃度樣本稀釋接近線性區(qū)間上限的高濃度樣本，混合成6個稀釋濃度（xi），分別測試試劑，每個稀釋濃度測試3次，分別求出每個稀釋濃度檢測結(jié)果的均值（yi）。以xi為自變量，以yi為因變量求出線性回歸方程。計算線性回歸的相關(guān)系數(shù)r。

稀釋濃度（xi）代入線性回歸方程，計算yi測試均值與相應(yīng)估計值的相對偏差。

2.3.6精密度

2.3.6.1重復性

在重復性條件下，測試濃度在（2.5±0.5）mmol/L的控制血清，重復測試10次，計算測量值的平均值（）和標準差（SD）。計算變異系數(shù)（CV）應(yīng)不大于3%。

2.3.6.2批間差

分別用3個不同批號的試劑測試濃度在（2.5±0.5）mmol/L的控制血清，每個批號測試3次，分別計算每批3次測定的均值 （i=1,2,3），按以下公式計算相對極差（R）。

試劑批間相對極差應(yīng)不大于5%。

2.3.7準確度

相對偏差:相對偏差應(yīng)不超過±5.0%

試劑測試可用于評價常規(guī)方法的有證參考物質(zhì)（CRM）3次，測試結(jié)果記為（xi），按式（6）分別計算相對偏差（Bi），3次結(jié)果相對偏差均應(yīng)不超過±5.0%；如果3次結(jié)果中有1次不符合要求，應(yīng)重新連續(xù)測試20次，并分別按照式（6）計算相對偏差（Bi），當大于等于19次結(jié)果的相對偏差不超過±5.0%，準確度被驗證符合要求。

式中：

xi–測試結(jié)果。

T–有證參考物質(zhì)標示值。

2.3.8穩(wěn)定性

可選用以下方法之一進行驗證：

2.3.8.1效期穩(wěn)定性：生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)規(guī)定產(chǎn)品的有效期。取到有效期后的樣品檢測，試劑外觀、空白吸光度、分析靈敏度、準確度、線性范圍、重復性應(yīng)符合技術(shù)要求。

2.3.8.2熱穩(wěn)定性試驗：按要求熱處理后的樣品檢測，試劑外觀、空白吸光度、空白吸光度變化率、分析靈敏度、準確度、線性范圍、重復性應(yīng)符合技術(shù)要求。

注1：熱穩(wěn)定性試驗不能用于推導產(chǎn)品有效期，除非是采用基于大量的穩(wěn)定性研究數(shù)據(jù)建立的推導公式。

注2：根據(jù)產(chǎn)品特性可選擇2.3.8.1、2.3.8.2方法的任意組合，但所選用的方法宜能驗證產(chǎn)品的穩(wěn)定性，以保證在有效期內(nèi)產(chǎn)品的性能符合技術(shù)要求。

凍干品應(yīng)同時進行復溶穩(wěn)定性試驗，產(chǎn)品性能應(yīng)符合試劑外觀、空白吸光度、分析靈敏度、準確度、線性范圍、重復性技術(shù)要求。

2.3.9校準品和質(zhì)控品的性能指標（如產(chǎn)品中包含）

應(yīng)至少包含外觀、裝量、準確度、均一性、穩(wěn)定性。凍干型校準品和質(zhì)控品還應(yīng)檢測批內(nèi)瓶間差和復溶穩(wěn)定性。

2.4氯測定試劑盒主要性能

2.4.1外觀

應(yīng)與技術(shù)要求中表明的試劑外觀一致。這里應(yīng)當包括試劑包裝外觀、試劑內(nèi)包裝外觀、試劑的外觀。

2.4.2裝量

試劑裝量應(yīng)不少于標示裝量或規(guī)定限。

2.4.3試劑空白

2.4.3.1試劑空白吸光度

在37℃、405nm、1cm光徑條件下，試劑空白吸光度應(yīng)不大于1.0。

2.4.3.2試劑空白吸光度變化率

在37℃、405nm、1cm光徑條件下，試劑空白吸光度變化率（ΔA/min）應(yīng)不大于0.300。

2.4.4分析靈敏度

用已知濃度的樣本測試試劑，記錄在試劑在37℃、405nm、1cm光徑條件下的吸光度變化率。按照生產(chǎn)企業(yè)規(guī)定的分析靈敏度計算公式計算分析靈敏度，應(yīng)符合生產(chǎn)企業(yè)聲稱的要求。

2.4.5線性區(qū)間

試劑線性應(yīng)覆蓋樣本濃度60mmol/L～140mmol/L區(qū)間；

2.4.5.1線性相關(guān)系數(shù)（r）應(yīng)不小于0.9900；

2.4.5.2線性相對偏差應(yīng)不超過±15.0%。

用接近線性區(qū)間下限的低濃度（活性）樣本稀釋接近線性區(qū)間上限的高濃度（活性）樣本，混合成至少5個有效稀釋濃度（xi），分別測試試劑，每個稀釋濃度測試1—3次，分別求出測定結(jié)果的均值（yi）。以稀釋濃度（xi）為自變量，以測定結(jié)果均值（yi）為因變量求出線性回歸方程。按公式（1）計算線性回歸的相關(guān)系數(shù)（r）。

稀釋濃度（xi）代入線性回歸方程，計算yi的估計值及yi與估計值的相對偏差。

2.4.6精密度

2.4.6.1重復性

用同批號的試劑盒對高低值樣本（分為正常范圍和病理范圍），重復測試至少10次，分別計算測量值的平均值（x）和標準差（SD）。計算變異系數(shù)（CV）應(yīng)不大于5.0%。

2.4.6.2批內(nèi)瓶間差（適用于干粉或凍干試劑）

用高低值樣本分別測試同一批號的20個待檢試劑，并計算20個測量值的平均值（1）和標準差（SD1）。

用高低值樣本對該批號的1個待檢試劑重復測試20次，計算結(jié)果的均值（2）和標準差（SD2）。按式（2）、式（3）計算瓶間差的變異系數(shù)（CV），批內(nèi)瓶間差均應(yīng)不大于5.0%。

當s1＜s2時，令CV=0

2.4.6.3批間差

用同一份樣本 分別測試3個不同批號的試劑，每個批號測試3次，分別計算每批3次測定的均值（i=1,2,3），按公式（4）、（5）計算相對極差（R）。

試劑批間差應(yīng)不大于10.0%。

2.4.7準確度

可選用以下方法進行驗證；優(yōu)先采用相對偏差的方法。

2.4.7.1相對偏差：相對偏差應(yīng)不超過±15.0%。

用可用于評價常規(guī)方法的有證參考物質(zhì)（CRM）對試劑進行測試，重復檢測3次，取測試結(jié)果均值（M）按式（6）計算相對偏差（B）。

或用由參考方法定值的高、低2個濃度的人血清/血漿樣本（可參照EP6-A的要求適當添加被測物，以獲得高濃度的樣本）對試劑盒進行測試，每個濃度樣本重復測定3次，分別取測試結(jié)果均值，按式（6）計算相對偏差（B）。

式中：

B–相對偏差；

M–測試結(jié)果均值；

T–有證參考物質(zhì)標示值，或各濃度人源樣本定值。

2.4.7.2回收試驗 在臨床樣本中加入一定體積標準溶液（標準溶液體積與臨床樣本體積應(yīng)不會產(chǎn)生基質(zhì)的變化，加入標準溶液后樣本總濃度必須在試劑測定線性范圍內(nèi)）或純品，回收試驗一般選取兩個或兩個以上濃度進行，回收率應(yīng)在90%—110%之間。

2.4.7.3比對試驗：相關(guān)系數(shù)r不小于0.9900，相對偏差應(yīng)不超過企業(yè)聲稱的要求。

參照CLSL EP9-A2的方法，用不少于40個在檢測范圍內(nèi)不同濃度的人源樣本，用生產(chǎn)企業(yè)指定的分析系統(tǒng)作為比對方法，每份樣本按待測試劑操作方法及比對方法分別測試。用線性回歸方法計算兩組結(jié)果的相關(guān)系數(shù)及相對偏差。

2.4.8穩(wěn)定性

可選用以下方法之一進行驗證：

2.4.8.1效期穩(wěn)定性：生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)規(guī)定產(chǎn)品的有效期。取到有效期后的樣本檢測，試劑外觀、空白吸光度、空白吸光度變化率、分析靈敏度、準確度、線性范圍、重復性應(yīng)符合技術(shù)要求。

2.4.8.2熱穩(wěn)定性試驗：

按要求熱處理后的樣品檢測，試劑外觀、空白吸光度、空白吸光度變化率、分析靈敏度、準確度、線性范圍、重復性應(yīng)符合技術(shù)要求。

注1：熱穩(wěn)定性試驗不能用于推導產(chǎn)品有效期，除非是采用基于大量的穩(wěn)定性研究數(shù)據(jù)建立的推導公式。

注2：根據(jù)產(chǎn)品特性可選擇a）、b）方法的任意組合，但所選用的方法宜能驗證產(chǎn)品的穩(wěn)定性，以保證在有效期內(nèi)產(chǎn)品的性能符合技術(shù)要求。

凍干品應(yīng)同時進行復溶穩(wěn)定性試驗，產(chǎn)品性能應(yīng)符合試劑外觀、空白吸光度、空白吸光度變化率、分析靈敏度、準確度、線性范圍、重復性技術(shù)要求。

2.4.9校準品和質(zhì)控品的性能指標（如產(chǎn)品中包含）

應(yīng)至少包含外觀、裝量、準確度、均一性、穩(wěn)定性。凍干型校準品和質(zhì)控品還應(yīng)檢測批內(nèi)瓶間差和復溶穩(wěn)定性。

（十）產(chǎn)品注冊檢驗報告

首次申請注冊的電解質(zhì)鉀、鈉、氯、鈣測定試劑，應(yīng)該在具有相應(yīng)醫(yī)療器械檢驗資質(zhì)和承檢范圍的醫(yī)療器械檢測機構(gòu)進行注冊檢驗，出具注冊檢驗報告和產(chǎn)品技術(shù)要求預(yù)評價意見。

（十一）產(chǎn)品說明書

說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、試驗方法、檢測結(jié)果解釋以及注意事項等重要信息，是指導使用人員正確操作、臨床醫(yī)生準確理解和合理應(yīng)用試驗結(jié)果的重要技術(shù)性文件。產(chǎn)品說明書的格式應(yīng)符合《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑說明書編寫指導原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014第17號）的要求。下面對說明書的重點內(nèi)容進行詳細說明。

1.【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：鉀/鈉/鈣/氯測定試劑盒（方法學）  

2.【包裝規(guī)格】

注明可測試的樣本數(shù)或裝量，如××測試/盒、××人份/盒、××mL，除國際通用計量單位外，其余內(nèi)容均應(yīng)采用中文進行表述。如產(chǎn)品有不同組分,可以寫明組分名稱。如有貨號，可增加貨號信息。

（1）包裝規(guī)格應(yīng)明確單、雙試劑類型。

（2）不得多于技術(shù)要求中所列的包裝規(guī)格。

（3）如不同包裝規(guī)格有與之特定對應(yīng)的機型，應(yīng)同時明確適用機型。

3.【預(yù)期用途】

應(yīng)至少包括以下幾部分內(nèi)容：

（1）鉀/鈉/鈣/氯測定試劑用于體外定量測定人樣本中鉀/鈉/鈣/氯的濃度。

（2）應(yīng)明確與目的檢測物相關(guān)的臨床適應(yīng)證背景情況。鉀/鈉/鈣/氯異常情況常見于哪些疾病，其升高或降低可能有哪些醫(yī)學解釋。

作為支持性資料，申請人應(yīng)提供由教科書、臨床專著、核心期刊文獻或英文SCI文獻等有關(guān)臨床適應(yīng)證背景的資料。

4.【檢驗原理】

應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品主要成分簡要說明檢驗的原理、方法，必要時可采取圖示方法表示。 

如：利用鉀離子依賴性丙酮酸激酶催化底物磷酸烯醇式丙酮酸（PEP）與二磷酸腺苷（ADP）反應(yīng)生成丙酮酸，丙酮酸在乳酸脫氫酶的催化下與NADH偶聯(lián)生成NAD+，在340nm處觀察到的吸光度變化值跟鉀離子濃度成正比，從而計算出鉀離子濃度。

反應(yīng)式如下：

如：利用鈉離子依賴的β-半乳糖苷酶催化底物鄰硝基苯-β-D-半乳糖苷（ONPG）（又名鄰硝基苯β-D-半乳吡喃糖苷）水解，生成產(chǎn)物鄰硝基酚（ONP）和半乳糖。其中生成的鄰硝基酚在405nm附近的吸光度值上升與鈉離子濃度成正比，從而根據(jù)吸光度值的變化計算鈉離子的濃度。

反應(yīng)式如下：

MTB:甲基麝香草酚藍絡(luò)合劑

甲基麝香草酚藍在堿性條件下與鈣離子形成穩(wěn)定的有色絡(luò)合物，在波長612nm處，其吸光度與樣本中鈣含量成正比。

如：α-淀粉酶在氯離子的激活下，水解底物2-氯-4-硝基苯-半乳糖-a-D麥芽三糖苷（CNP-G3）生成2-氯-4-硝基酚（CNP）和麥芽三糖（G3），CNP在405nm附近有吸收峰。在一定的氯離子濃度范圍內(nèi)，2-氯-4-硝基酚的生成速率與氯離子的濃度成正比。所以可以通過監(jiān)測405nm吸光度變化值計算樣本中的氯離子濃度。

反應(yīng)式如下：

5.【主要組成成分】

應(yīng)明確以下內(nèi)容：

試劑盒提供的試劑組分的名稱、數(shù)量、每個組成成分在反應(yīng)體系中的比例或濃度。

如檢測中需使用校準品或質(zhì)控品，應(yīng)明確說明，并提供校準品溯源性，溯源性應(yīng)寫明溯源的最高級別，包括標準物質(zhì)或參考物的發(fā)布單位及編號，質(zhì)控品應(yīng)明確靶值范圍等。

試劑盒如果配備校準品，需注明校準品定值信息及溯源性（量值最終溯源至國際參考物質(zhì)或國家參考物質(zhì)GBW或其他有證參考物質(zhì)，應(yīng)注明參考物質(zhì)編號）。試劑盒如果配備質(zhì)控品，需注明質(zhì)控品靶值范圍。

6.【儲存條件及有效期】

（1）應(yīng)明確未開封的試劑實際儲存條件及有效期，開瓶穩(wěn)定期。干粉試劑應(yīng)明確復溶穩(wěn)定期。

（2）說明產(chǎn)品的儲存條件，如：2～8℃、避免/禁止冷凍或-18℃以下等。其他影響穩(wěn)定性的條件，如：光線、濕度等也必須說明。

（3）如試劑盒各組分的穩(wěn)定性不一致，則應(yīng)對各組分的儲存條件和有效期分別進行描述。

7.【適用儀器】

說明可適用的儀器及型號，并提供與儀器有關(guān)的信息以便用戶能夠正確選擇使用。

8.【樣本要求】

重點明確以下內(nèi)容：

樣本類型、為保證樣本各組分穩(wěn)定所必需的抗凝劑或保護劑等、保存期限及保存條件（短期、長期），能夠保證樣本穩(wěn)定的儲存、處理和運輸方法、已知的干擾物等。如有血漿樣本，應(yīng)注明對抗凝劑的要求。特殊體液標本還應(yīng)詳細描述對采集條件、保存液、容器等可能影響檢測結(jié)果的要求。

9.【檢驗方法】

詳細說明試驗操作的各個步驟，包括：

（1）試劑配制方法、注意事項。

（2）試驗條件：溫度、時間、測定主/副波長、試劑用量、樣本用量、測定方法、反應(yīng)類型、反應(yīng)方向、反應(yīng)時間等以及試驗過程中的注意事項。

（3）校準程序（如果需要）：校準品的使用方法、注意事項、校準曲線的繪制。

（4）質(zhì)量控制程序：質(zhì)控品的使用方法、對質(zhì)控結(jié)果的必要解釋以及推薦的質(zhì)控周期等。 

（5）檢驗結(jié)果的計算：應(yīng)明確檢驗結(jié)果的計算方法。包括對每個系數(shù)及對每個計算步驟的解釋。如果可能，應(yīng)舉例說明。

如果超出線性范圍，樣本需要稀釋測定時，應(yīng)根據(jù)試劑特性說明稀釋液的種類及最大稀釋倍數(shù)。

10.【參考區(qū)間】

應(yīng)注明常用樣本類型及反應(yīng)方式的參考區(qū)間，并說明參考區(qū)間確定方法。注明“由于地理、人種、性別和年齡等差異，建議各實驗室建立自己的參考值（范圍）”。

血漿鉀比血清鉀結(jié)果低0.1—0.7mmol/L，由于血液體外凝固時血小板破裂會釋放出一部分鉀，如果產(chǎn)品可以檢測兩種不同的樣本類型，應(yīng)分別注明兩個不同參考范圍。

11.【檢驗結(jié)果的解釋】

說明可能對檢驗結(jié)果產(chǎn)生影響的因素。說明在何種情況下需要進行確認試驗。

12.【檢驗方法的局限性】

說明該檢驗方法的局限性，如：存在的干擾因素，明確黃疸、溶血、脂濁及藥物等內(nèi)、外源性干擾物對測定的影響，同時列出干擾物的具體濃度。

13.【產(chǎn)品性能指標】

至少應(yīng)詳述以下性能指標，性能指標應(yīng)不低于標準有關(guān)技術(shù)指標的要求。

（1）試劑空白吸光度和/或試劑空白吸光度變化率。

（2）分析靈敏度。

（3）準確度。

（4）精密度（重復性和批間差）。

（5）線性區(qū)間（線性相關(guān)系數(shù)和線性偏差）。

14.【注意事項】

應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

（1）本試劑盒僅供體外檢測使用，試劑中含有的化學成分應(yīng)說明接觸人體后產(chǎn)生不良的影響后果。

（2）有關(guān)人源組分的警告（如適用），如：試劑盒內(nèi)的質(zhì)控品、校準品或其他人源組分，雖已經(jīng)通過了HBs-Ag、HIV1/2-Ab、HCV-Ab、TP等項目的檢測，但截至目前，沒有任何一項檢測可以確保絕對安全，故仍應(yīng)將這些組分作為潛在傳染源對待。

（3）試劑盒的使用說明書中對試劑盒的操作環(huán)境、人員保護應(yīng)有詳細的說明。由于試劑盒的檢測對象為人血清樣本，可能帶有致病病原體，所以應(yīng)按傳染病實驗室要求操作。

（4）溶血或延遲分離血清均可使血清鉀濃度增高，應(yīng)及時分離血清，置于具塞試管內(nèi)冰箱保存。若遇標本溶血，應(yīng)在報告單上注明，以便于臨床醫(yī)生對結(jié)果的解釋。

（5）許多生化試劑中含有鈉離子，在做測定時，注意分析儀通道間的交叉污染。鈉鉀聯(lián)合測定時，應(yīng)將鉀編排在鈉以前。

（6）取血后應(yīng)迅速將血漿或血清分離，以免因血中HCO3-與紅細胞內(nèi)氯離子發(fā)生轉(zhuǎn)移而使氯化物測定結(jié)果偏高。

（7）其他有關(guān)鉀/鈉/鈣/氯測定的注意事項。

15.【標識的解釋】

如有圖形或符號，請解釋其代表的意義。

16.【參考文獻】

應(yīng)當注明在編制說明書時所引用的參考文獻。

17.【基本信息】

符合《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑說明書編寫指導原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）對基本信息的要求。

18.【醫(yī)療器械注冊證編號/產(chǎn)品技術(shù)要求編號】

產(chǎn)品的注冊證編號/產(chǎn)品技術(shù)要求編號

19.【說明書核準日期及修改日期】

注明該產(chǎn)品說明書的核準日期。如曾進行過說明書的變更申請，還應(yīng)該同時注明說明書的修改日期。

三、審查關(guān)注點

（一）臨床研究用參比試劑和第三方確認試劑的預(yù)期用途應(yīng)與申請產(chǎn)品預(yù)期用途一致。申報樣本類型應(yīng)在臨床研究中進行驗證。

（二）審查產(chǎn)品技術(shù)要求時應(yīng)注意產(chǎn)品應(yīng)不低于YY/T 1202鉀測定試劑盒（酶法）、YY/T 1203 鈉測定試劑盒（酶法）、YY/T 1229鈣測定試劑（盒）、YY/T 1196氯測定試劑盒（酶法）的有關(guān)規(guī)定。

（三）說明書中預(yù)期用途（樣本類型）、儲存條件及有效期、檢驗方法、參考區(qū)間、產(chǎn)品性能指標等描述應(yīng)分別與臨床研究資料、穩(wěn)定性研究資料、主要生產(chǎn)工藝和反應(yīng)體系研究資料、參考區(qū)間研究資料、分析性能評估資料的研究結(jié)論相一致。

（四）干粉試劑應(yīng)提供復溶穩(wěn)定性研究資料并在說明書儲存條件及有效期中說明。

四、編寫單位

上海食品藥品監(jiān)督管理局認證審評中心。