附件：弓形蟲、風(fēng)疹病毒、巨細(xì)胞病毒、單純皰疹病毒抗體及G型免疫球蛋白抗體親合力檢測(cè)試劑注冊(cè)審查指導(dǎo)原則（2023年修訂版）（2024年第2號(hào)）.doc

弓形蟲、風(fēng)疹病毒、巨細(xì)胞病毒、單純皰疹病毒抗體及G型免疫球蛋白抗體親合力
檢測(cè)試劑注冊(cè)審查指導(dǎo)原則
（2023年修訂版）

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)弓形蟲、風(fēng)疹病毒、巨細(xì)胞病毒、單純皰疹病毒抗體及G型免疫球蛋白（Immunoglobulin G, IgG）抗體親合力檢測(cè)試劑注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門提供參考。

本指導(dǎo)原則是對(duì)弓形蟲、風(fēng)疹病毒、巨細(xì)胞病毒、單純皰疹病毒抗體及IgG抗體親合力檢測(cè)試劑的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是供注冊(cè)申請(qǐng)人和技術(shù)審評(píng)人員使用的指導(dǎo)性文件，但不包括審評(píng)審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍

弓形蟲(Toxoplasma, TOXO) 、風(fēng)疹病毒(Rubella virus, RV) 、巨細(xì)胞病毒(Cytomegalovirus, CMV) 及單純皰疹病毒 (Herpes simplex virus, HSV) 四種病原體（以下簡(jiǎn)稱“ToRCH”）已引起圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)家和優(yōu)生優(yōu)育學(xué)家的關(guān)注，如何應(yīng)用應(yīng)基于大量的研究及相關(guān)學(xué)科的診療指南。

本指導(dǎo)原則適用于采用免疫學(xué)方法，如酶聯(lián)免疫法、化學(xué)發(fā)光法、免疫層析法等，對(duì)人體血清、血漿、靜脈全血樣本中的ToRCH特異性抗體進(jìn)行體外定性和/或半定量和/或定量檢測(cè)的試劑。結(jié)合臨床表現(xiàn)和其他實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，可用于ToRCH感染輔助診斷。同時(shí)也適用于對(duì)ToRCH特異性IgG抗體陽性的人血清和/或血漿和/或靜脈全血樣本中ToRCH特異性IgG親合力進(jìn)行體外定性檢測(cè)的試劑，用于輔助判斷感染時(shí)間，排除近期原發(fā)性感染。本類試劑尚不用作產(chǎn)前篩查。對(duì)基于其他方法學(xué)的試劑，可能部分要求不完全適用或本文所述內(nèi)容不夠全面，申請(qǐng)人可以參照本指導(dǎo)原則，根據(jù)產(chǎn)品特性對(duì)適用部分進(jìn)行評(píng)價(jià)或補(bǔ)充其他的評(píng)價(jià)資料進(jìn)行相應(yīng)驗(yàn)證。

本指導(dǎo)原則適用于弓形蟲、風(fēng)疹病毒、巨細(xì)胞病毒、單純皰疹病毒抗體及G型免疫球蛋白抗體親合力檢測(cè)試劑注冊(cè)申請(qǐng)和變更注冊(cè)申請(qǐng)的情形。本指導(dǎo)原則針對(duì)相關(guān)產(chǎn)品注冊(cè)申報(bào)資料中的部分內(nèi)容進(jìn)行撰寫，其他未盡事宜應(yīng)當(dāng)符合相關(guān)法規(guī)要求。

二、注冊(cè)審查要點(diǎn)

（一）監(jiān)管信息

1.產(chǎn)品名稱及分類編碼

產(chǎn)品名稱應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)的要求。根據(jù)《體外診斷試劑分類規(guī)則》，該產(chǎn)品按照第三類體外診斷試劑管理，分類編碼為6840。

2.其他信息還包括產(chǎn)品列表、關(guān)聯(lián)文件、申報(bào)前與監(jiān)管機(jī)構(gòu)的聯(lián)系情況和溝通記錄以及符合性聲明等文件。

（二）綜述資料

綜述資料主要包括概述、產(chǎn)品描述、預(yù)期用途、申報(bào)產(chǎn)品上市歷史及其他需說明的內(nèi)容。其中,產(chǎn)品描述應(yīng)詳述技術(shù)原理、產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評(píng)價(jià)、與同類和/或前代產(chǎn)品的比較等。與同類和/或前代產(chǎn)品的比較應(yīng)著重從技術(shù)原理、特異性抗原等主要組成成分、預(yù)期用途、性能指標(biāo)、臨床應(yīng)用情況等方面寫明擬申報(bào)產(chǎn)品與目前市場(chǎng)上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。

另外，建議申請(qǐng)人對(duì)以下幾方面內(nèi)容進(jìn)行著重介紹：

1.特定病原體的生物學(xué)特性，包括形態(tài)與結(jié)構(gòu)、抵抗力、感染過程等。

2.特定病原體感染的傳播途徑、潛伏期、不同人群感染的臨床癥狀、流行病學(xué)以及易感人群的說明。

3.ToRCH特異性抗體及特異性IgG抗體親合力動(dòng)力學(xué)。

（三）非臨床資料

1.產(chǎn)品技術(shù)要求及檢驗(yàn)報(bào)告

注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)產(chǎn)品研制、前期評(píng)價(jià)等結(jié)果，依據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)文獻(xiàn)資料，結(jié)合產(chǎn)品特性按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》的要求編寫。該類產(chǎn)品作為第三類體外診斷試劑，應(yīng)當(dāng)以附錄形式明確主要原材料以及生產(chǎn)工藝要求。

第三類體外診斷試劑應(yīng)當(dāng)提供三個(gè)不同生產(chǎn)批次產(chǎn)品的檢驗(yàn)報(bào)告。如該項(xiàng)目已有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品，技術(shù)要求中應(yīng)體現(xiàn)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品的相關(guān)要求，并使用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行檢驗(yàn)。

可提交以下任一形式的檢驗(yàn)報(bào)告：

（1）申請(qǐng)人出具的自檢報(bào)告。

（2）委托有資質(zhì)的醫(yī)療器械檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)出具的檢驗(yàn)報(bào)告。

如果擬申報(bào)試劑已有相應(yīng)的國(guó)家/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布，則性能指標(biāo)要求不得低于上述標(biāo)準(zhǔn)要求。

2.分析性能評(píng)估資料

注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)提交在符合質(zhì)量管理體系的環(huán)境下生產(chǎn)的試劑盒進(jìn)行的所有分析性能評(píng)估資料，包括具體研究方法、試驗(yàn)方案、試驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)分析等詳細(xì)資料。有關(guān)分析性能評(píng)估的背景信息也應(yīng)在申報(bào)資料中進(jìn)行描述，包括試驗(yàn)地點(diǎn)，采用的試劑名稱、規(guī)格和批號(hào)，儀器名稱和型號(hào)，樣本類型和來源等。分析性能評(píng)估的試驗(yàn)方法可以參考國(guó)際或國(guó)內(nèi)有關(guān)體外診斷試劑性能評(píng)估的指導(dǎo)原則進(jìn)行，對(duì)于本類產(chǎn)品建議著重對(duì)以下分析性能進(jìn)行研究。

2.1樣本穩(wěn)定性

樣本穩(wěn)定性一般包括樣本各種實(shí)際運(yùn)輸及儲(chǔ)存（常溫、冷藏和冷凍）條件下的保存期限驗(yàn)證，以確認(rèn)樣本的保存條件及保存時(shí)間?？梢栽诤侠淼臏囟确秶鷥?nèi)，每間隔一定的時(shí)間段即對(duì)儲(chǔ)存樣本進(jìn)行驗(yàn)證，從而確認(rèn)不同類型樣本的穩(wěn)定性。需要冷凍保存的樣本應(yīng)對(duì)凍融次數(shù)進(jìn)行合理的驗(yàn)證。如果需對(duì)采集后的樣本進(jìn)行處理再進(jìn)行檢測(cè)，需提供樣本處理前后的穩(wěn)定性的研究。

2.2適用樣本類型

如果試劑適用于多種樣本類型，應(yīng)采用合理方法評(píng)價(jià)每種樣本類型的適用性。對(duì)具有可比性的樣本類型（如血清和血漿），可采用同源比對(duì)研究，對(duì)源自同一患者的不同類型的樣本進(jìn)行檢測(cè)，以驗(yàn)證檢測(cè)結(jié)果的一致性，樣本量應(yīng)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，建議不低于50例；對(duì)于不具有可比性的樣本類型，應(yīng)對(duì)每種樣本類型分別進(jìn)行分析性能評(píng)估。

如果試劑盒的樣本類型（如：血漿、全血樣本）適用多種抗凝劑，可采用一定數(shù)量同源樣本通過比對(duì)試驗(yàn)的方法，驗(yàn)證各種抗凝劑的適用性。

2.3校準(zhǔn)品的量值溯源和質(zhì)控品的賦值

如包含校準(zhǔn)品，需提供校準(zhǔn)品的量值溯源研究資料。

描述質(zhì)控品的賦值（如適用）。需至少進(jìn)行三批產(chǎn)品分別在不同適用機(jī)型的賦值研究。

2.4準(zhǔn)確度/正確度

可采用申報(bào)試劑與對(duì)比方法（如：已上市產(chǎn)品）同時(shí)對(duì)一定數(shù)量的臨床樣本進(jìn)行方法學(xué)比對(duì)研究，評(píng)價(jià)檢測(cè)結(jié)果的一致性；也可以通過檢測(cè)參考品（盤）分析申報(bào)產(chǎn)品檢測(cè)結(jié)果與經(jīng)確認(rèn)結(jié)果的符合情況，評(píng)價(jià)申報(bào)產(chǎn)品的準(zhǔn)確度，參考品（盤）應(yīng)經(jīng)診斷準(zhǔn)確度標(biāo)準(zhǔn)/其他成熟方法檢測(cè)確認(rèn)過或有準(zhǔn)確臨床診斷信息；對(duì)于有參考物質(zhì)（國(guó)際參考物質(zhì)、國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品）的定量項(xiàng)目，也可使用參考物質(zhì)評(píng)估試劑檢測(cè)結(jié)果的偏倚。

2.5精密度

應(yīng)對(duì)精密度指標(biāo)的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求，如標(biāo)準(zhǔn)差、變異系數(shù)或顯色強(qiáng)度等，針對(duì)本類產(chǎn)品的精密度評(píng)價(jià)主要包括以下要求。

2.5.1對(duì)可能影響檢測(cè)精密度的主要變量進(jìn)行驗(yàn)證，包括不同時(shí)間、地點(diǎn)、操作者、檢測(cè)輪次、試劑批次、適用儀器（如適用）等。

2.5.2設(shè)定合理的精密度評(píng)價(jià)周期，例如：為期至少20天的檢測(cè)，每天至少由2人完成不少于2次的完整檢測(cè)，并對(duì)批內(nèi)/批間、日內(nèi)/日間以及不同操作者之間的精密度進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。

2.5.3用于精密度評(píng)價(jià)的臨床樣本應(yīng)至少包含陰性樣本、檢出限陽性樣本以及中/強(qiáng)陽性樣本三個(gè)水平。

2.6空白限、檢出限和定量限

2.6.1 ToRCH特異性抗體定性檢測(cè)項(xiàng)目

建議采用已明確ToRCH特異性抗體滴度的臨床陽性樣本，通過系列稀釋，進(jìn)行檢出限的建立和驗(yàn)證。應(yīng)采用合理方法確認(rèn)臨床樣本的抗體類型和滴度，提供詳細(xì)的確認(rèn)方法及結(jié)果。

選取至少3份臨床陽性樣本，系列稀釋獲得多個(gè)濃度梯度，每個(gè)濃度重復(fù)檢測(cè)不少于3次，以100%可檢出的最低濃度水平作為預(yù)設(shè)檢出限。在此濃度附近制備若干濃度梯度樣品，每個(gè)濃度至少重復(fù)檢測(cè)20次，將具有95%（n≥20）陽性檢出率的最低濃度作為檢出限。另選取與上述不同的3份臨床樣本，稀釋到檢出限濃度水平進(jìn)行驗(yàn)證，應(yīng)達(dá)到95%（n≥20）陽性檢出率。

可給出連續(xù)量值信號(hào)的ToRCH特異性抗體定性檢測(cè)項(xiàng)目，如基于酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)的檢測(cè)試劑采用吸光度響應(yīng)區(qū)別“有反應(yīng)”和“無反應(yīng)”結(jié)果。對(duì)于此類檢測(cè)檢測(cè)項(xiàng)目，也可參考以下內(nèi)容設(shè)定空白限和檢出限。

2.6.2 ToRCH特異性抗體定量或半定量檢測(cè)項(xiàng)目

對(duì)于可溯源至有量值的國(guó)際或國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品的定量檢測(cè)項(xiàng)目和半定量檢測(cè)項(xiàng)目，可參考國(guó)內(nèi)外相關(guān)文件對(duì)空白限、檢出限以及定量限進(jìn)行建立及驗(yàn)證。

空白限、檢出限和定量限的建立及驗(yàn)證應(yīng)分別選擇多份樣本在多天內(nèi)對(duì)樣本進(jìn)行重復(fù)測(cè)量，需綜合各種影響因素進(jìn)行試驗(yàn)設(shè)計(jì)并選擇合適的方法對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。

建立和驗(yàn)證采用的臨床樣本不應(yīng)重復(fù)。如有其他科學(xué)合理的評(píng)價(jià)方法，也可進(jìn)行選擇。

2.7抗體滴度變化（適用于半定量和/或定量檢測(cè)項(xiàng)目）和診斷靈敏度

2.7.1 ToRCH抗體檢測(cè)試劑

介紹血清轉(zhuǎn)換盤的組成和來源。檢測(cè)血清轉(zhuǎn)換盤，用于評(píng)價(jià)檢測(cè)試劑的診斷靈敏度及監(jiān)測(cè)抗體滴度變化趨勢(shì)的能力。對(duì)于TOXO、RV等已有商業(yè)化血清轉(zhuǎn)換盤的檢測(cè)項(xiàng)目，建議選用商業(yè)化血清轉(zhuǎn)換盤進(jìn)行研究；對(duì)于部分無商業(yè)化血清轉(zhuǎn)換盤的檢測(cè)項(xiàng)目，可選擇合理的方法，如將標(biāo)化的血清樣本稀釋等，對(duì)抗體滴度變化及診斷靈敏度進(jìn)行評(píng)價(jià)。

2.7.2 ToRCH IgG抗體親合力檢測(cè)試劑

對(duì)急性感染（3～4個(gè)月內(nèi)）和既往感染樣本進(jìn)行研究，樣本可來自于血清轉(zhuǎn)化盤或基于臨床診斷的臨床樣本，以評(píng)價(jià)臨床診斷靈敏度。

2.8分析特異性

2.8.1交叉反應(yīng)

應(yīng)對(duì)ToRCH的近緣病原體、易引起相同或相似的臨床癥狀及易合并感染的病原體（見表1）感染病人的高水平特異性抗體樣本進(jìn)行交叉反應(yīng)研究。此外，還應(yīng)對(duì)高濃度病原體特異性IgG抗體與特異性IgM抗體的交叉反應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證。

如果檢測(cè)試劑采用基因重組抗原，應(yīng)增加對(duì)重組基因?qū)胛⑸锾禺愋钥贵w的交叉反應(yīng)評(píng)價(jià)。例如，采用大腸埃希菌作為宿主菌進(jìn)行重組抗原的表達(dá)，建議考慮大腸埃希菌宿主自身蛋白以及載體骨架編碼的蛋白與被測(cè)物之間可能產(chǎn)生的交叉反應(yīng)。

交叉反應(yīng)用臨床樣本中相關(guān)病原體抗體滴度水平應(yīng)較高，并且抗體類型（IgM、IgG）應(yīng)與申報(bào)試劑檢測(cè)抗體類型一致，如檢測(cè)ToRCH IgG抗體，則應(yīng)研究其與相關(guān)病原體特異性IgG抗體的交叉反應(yīng)。申請(qǐng)人應(yīng)提交所有用于交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病原體抗體陽性樣本的來源、陰陽性和滴度確認(rèn)等信息。

2.8.2干擾研究

應(yīng)根據(jù)所采集樣本類型，選擇適用的干擾物質(zhì)進(jìn)行研究。說明樣本的制備方法及干擾研究的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，確定可接受的干擾物質(zhì)的極限濃度。

建議在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度（“最差條件”）下，采用待測(cè)抗體為弱陽性和陰性水平的多例樣本進(jìn)行試驗(yàn)，應(yīng)至少包括下列可能的干擾物質(zhì)。

2.8.2.1內(nèi)源性干擾物質(zhì)：總IgG、總IgM、膽紅素、血紅蛋白、甘油三酯、自身免疫性抗體(抗核抗體、類風(fēng)濕因子、抗線粒體抗體等)、異嗜性抗體（如：HAMA）、高濃度ToRCH特異性IgG抗體與特異性IgM抗體的干擾。

2.8.2.2常見治療性藥物：請(qǐng)依據(jù)檢測(cè)項(xiàng)目選擇合適的治療藥物進(jìn)行干擾研究。對(duì)于CMV抗體檢測(cè)試劑建議納入更昔洛韋、纈更昔洛韋等藥物進(jìn)行干擾研究；對(duì)于弓形蟲抗體檢測(cè)試劑建議評(píng)價(jià)乙酰螺旋霉素、乙胺嘧啶、磺胺嘧啶、甲酰四氫葉酸等常見治療藥物的影響；對(duì)于單純皰疹病毒抗體檢測(cè)試劑建議納入阿昔洛韋、伐昔洛韋等干擾物質(zhì)評(píng)價(jià)。

2.8.2.3如適用全血樣本，應(yīng)評(píng)價(jià)紅細(xì)胞壓積對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。

2.9 ToRCH IgM抗體破壞試驗(yàn)

可采用對(duì)至少5份含有ToRCH特異性IgM抗體的樣本進(jìn)行IgM破壞試驗(yàn)研究，方法為采用特定的化學(xué)制劑（如2－巰基乙醇或二硫蘇糖醇）處理樣本后，重新進(jìn)行檢測(cè)，IgM檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為陰性。

2.10鉤狀（HOOK）效應(yīng)

須采用多份高滴度的ToRCH特異性抗體樣本進(jìn)行梯度稀釋后由低濃度至高濃度開始檢測(cè)，每個(gè)梯度的稀釋液重復(fù)3～5次，對(duì)鉤狀效應(yīng)進(jìn)行合理的驗(yàn)證。

2.11包容性

應(yīng)選擇來源于不同時(shí)間、不同地域的多份經(jīng)合理方法確定的ToRCH特異性抗體陽性臨床樣本進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)項(xiàng)目如存在不同型別（如：HSVⅠ型和Ⅱ型），建議對(duì)所有型別進(jìn)行驗(yàn)證，驗(yàn)證內(nèi)容應(yīng)包括重復(fù)性、檢出限等，檢測(cè)結(jié)果應(yīng)滿足接收標(biāo)準(zhǔn)，需提供樣本性質(zhì)、型別及濃度的確認(rèn)方法、試驗(yàn)數(shù)據(jù)等支持性資料。

2.12線性區(qū)間及可報(bào)告區(qū)間（適用于半定量和定量項(xiàng)目）

線性區(qū)間的研究，需采用高濃度樣本和陰性樣本/低濃度樣本配制一系列不同濃度的樣本。當(dāng)建立試劑的線性區(qū)間時(shí)，需配制較預(yù)期線性區(qū)間更寬的9個(gè)左右不同濃度的樣本（不包括陰性樣本），每個(gè)樣本進(jìn)行多次重復(fù)檢測(cè)，根據(jù)可接受線性偏差和各濃度的重復(fù)性，確定檢測(cè)次數(shù)。采用重復(fù)檢測(cè)均值和預(yù)期值進(jìn)行回歸分析。當(dāng)驗(yàn)證試劑的線性區(qū)間時(shí)，需配制覆蓋整個(gè)線性區(qū)間的至少5個(gè)不同濃度的樣本，每個(gè)樣本至少重復(fù)檢測(cè)2次。建議采用加權(quán)最小二乘回歸等方法對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行回歸分析，提供散點(diǎn)圖、線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)及線性偏差等，結(jié)果應(yīng)滿足可接收標(biāo)準(zhǔn)。

測(cè)量區(qū)間，也稱分析測(cè)量區(qū)間，在該區(qū)間內(nèi)，臨床樣本在未經(jīng)稀釋、濃縮，或非常規(guī)測(cè)量程序中步驟的其他前處理情況下，檢測(cè)結(jié)果的線性偏差、不精密度和偏倚均在可接受范圍內(nèi)。測(cè)量區(qū)間下限為定量限，線性區(qū)間包含測(cè)量區(qū)間。

如對(duì)超出測(cè)量區(qū)間的樣本可進(jìn)行稀釋后檢測(cè)，應(yīng)采用合適的方法確定試劑的稀釋倍數(shù)和稀釋液（如適用），從而確定試劑的可報(bào)告區(qū)間。稀釋倍數(shù)的研究可采用多份高濃度臨床樣本進(jìn)行梯度稀釋，計(jì)算稀釋樣本的濃度并與稀釋系數(shù)相乘以計(jì)算未稀釋樣本的濃度，比較計(jì)算所得抗體濃度與已知值之間的差異。

2.13反應(yīng)體系研究

2.13.1反應(yīng)條件確定

申請(qǐng)人應(yīng)考慮反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)溫度、洗滌液體積和洗滌次數(shù)、判讀時(shí)間（如適用）等條件對(duì)產(chǎn)品性能的影響，通過試驗(yàn)確定上述條件的最佳組合。

2.13.2反應(yīng)體系中樣品加樣方式及加樣量確定

通過試驗(yàn)確定最佳的加樣方式及加樣量。如樣本需采取稀釋或其他必要的方法進(jìn)行處理后方可用于最終檢測(cè)，申請(qǐng)人還應(yīng)對(duì)樣本稀釋液及其用量、其他必要的處理方法等進(jìn)行研究。對(duì)于IgM抗體檢測(cè)試劑，如采用間接法，建議考慮高濃度特異性IgG對(duì)結(jié)果的影響，合理設(shè)置IgG去除相關(guān)樣本處理步驟，以降低特異性IgG可能造成的假陰性和假陽性。

應(yīng)對(duì)樣本是否可以滅活，以及可采用的滅活方式、滅活時(shí)間進(jìn)行研究確定。

3.穩(wěn)定性研究資料

申請(qǐng)人可根據(jù)實(shí)際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實(shí)施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。

3.1實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究

提交至少三批申報(bào)產(chǎn)品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的研究資料。明確儲(chǔ)存的環(huán)境條件（如溫度、濕度和光照）及有效期。

3.2使用穩(wěn)定性

提交申報(bào)產(chǎn)品實(shí)際使用期間穩(wěn)定性的研究資料，應(yīng)包括所有組成成分的開封穩(wěn)定性。適用時(shí)提交復(fù)溶穩(wěn)定性、機(jī)載穩(wěn)定性及凍融次數(shù)研究資料等。如涉及校準(zhǔn)品，還應(yīng)提交校準(zhǔn)頻率或校準(zhǔn)穩(wěn)定性研究資料。明確產(chǎn)品使用的溫度、濕度條件等。

3.3運(yùn)輸穩(wěn)定性

提交申報(bào)產(chǎn)品可在特定或者預(yù)期的條件下運(yùn)輸?shù)难芯抠Y料，應(yīng)說明產(chǎn)品正確運(yùn)輸?shù)沫h(huán)境條件（如溫度、濕度、光照和機(jī)械保護(hù)等）。同時(shí)說明產(chǎn)品的包裝方式以及暴露的最差運(yùn)輸條件。注意應(yīng)考察經(jīng)過運(yùn)輸條件后實(shí)時(shí)穩(wěn)定性。

4.陽性判斷值研究

提交對(duì)申報(bào)試劑陰性/灰區(qū)/陽性等結(jié)果判斷的陽性判斷值（cut-off,CO）確定的研究資料，應(yīng)包括具體的試驗(yàn)方案、人群及樣本選擇、評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析和研究數(shù)據(jù)等。建立CO值的樣本選擇應(yīng)考慮到地域性、季節(jié)、不同的感染階段和生理狀態(tài)等因素的影響，并納入一定數(shù)量的弱陽性樣本。

建議采用受試者工作特征曲線（receiver operating characteristic curve, ROC）的分析方式來選擇確定合理的CO值，如試驗(yàn)結(jié)果分析存在灰區(qū)（equivocal zone），則應(yīng)明確灰區(qū)建立的基礎(chǔ)。

對(duì)于采用酶聯(lián)免疫分析技術(shù)的檢測(cè)試劑，在各檢測(cè)條件固定的情況下，申請(qǐng)人也可以采用確定臨界值的常用方法，通過：①確定CO值中的n數(shù)值（CO值=陰性樣品平均A值+n×標(biāo)準(zhǔn)偏差）；②確定陰性樣品A值的標(biāo)準(zhǔn)差；③臨床樣本CO值的驗(yàn)證；這三個(gè)步驟檢測(cè)并計(jì)算確定試劑盒的CO值。

如產(chǎn)品適用多個(gè)樣本類型，應(yīng)明確CO值在不同的樣本類型是否存在差異，如有差異，應(yīng)分別進(jìn)行CO值的確定。

5.其他資料

5.1主要原材料研究資料

此類產(chǎn)品的主要原材料一般包括抗原、抗體、質(zhì)控品和/或校準(zhǔn)品、企業(yè)參考品等。應(yīng)提供主要原材料的選擇與來源、制備過程、質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)等相關(guān)研究資料。如主要原材料為企業(yè)自制，應(yīng)提供其詳細(xì)的制備、鑒定和質(zhì)量控制過程；如主要原材料源于外購(gòu)，應(yīng)提供資料包括：選擇該原材料的依據(jù)及對(duì)比篩選試驗(yàn)資料、供應(yīng)商提供的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、出廠檢測(cè)報(bào)告以及該原材料到貨后的入廠檢驗(yàn)報(bào)告。

5.1.1抗原

應(yīng)注重抗原選擇，詳細(xì)描述抗原的名稱、生物學(xué)來源、天然/重組表達(dá)信息及選擇該抗原的依據(jù)。提交抗原來源、制備過程、篩選及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（外觀、蛋白濃度、純度、分子量、功能性試驗(yàn)等）等詳細(xì)試驗(yàn)資料。

如抗原為企業(yè)自制，需提供以下資料：如為天然抗原，則應(yīng)對(duì)病原體毒株選擇、病原體培養(yǎng)、抗原提取及純化、鑒定等試驗(yàn)過程予以詳述并提供相應(yīng)研究資料；如為重組抗原，則應(yīng)提交有關(guān)特定基因選擇、基因序列、克隆構(gòu)建及轉(zhuǎn)化、抗原表達(dá)及純化、鑒定等詳細(xì)試驗(yàn)資料，重組抗原應(yīng)明確與天然抗原結(jié)構(gòu)的異同。

5.1.2抗體

詳述抗體的選擇過程，提交抗體的名稱、生物學(xué)來源、免疫原及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（外觀、蛋白濃度、純度、分子量、效價(jià)、功能性試驗(yàn)等）等詳細(xì)試驗(yàn)資料。

如抗體為企業(yè)自制，需提供以下資料：如使用天然抗原作為免疫原則應(yīng)明確該天然抗原的來源；如使用重組抗原或其他人工合成抗原作為免疫原，應(yīng)提供相應(yīng)的核酸組分及重組抗原的序列信息。

5.1.3其他主要原材料

除上述主要原材料外，產(chǎn)品中包含的其他原料，如固相載體、化學(xué)發(fā)光劑、樣本緩沖液等，均應(yīng)提交原料的選擇及驗(yàn)證資料。明確原料的供應(yīng)商和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。免疫層析方法學(xué)的產(chǎn)品如適用于全血，應(yīng)介紹血細(xì)胞去除方式及相關(guān)原材料，并驗(yàn)證去除效果。

5.1.4質(zhì)控和/或校準(zhǔn)品

校準(zhǔn)品應(yīng)溯源至現(xiàn)行的國(guó)家或國(guó)際參考品（如有），質(zhì)控品應(yīng)至少包含陰性和陽性兩個(gè)水平。校準(zhǔn)品和質(zhì)控品基質(zhì)應(yīng)與待測(cè)樣本相同或相似。應(yīng)提交相關(guān)原料的來源、選擇和陰、陽性確認(rèn)等相關(guān)研究資料，詳述質(zhì)控品和/或校準(zhǔn)品的制備過程，明確供應(yīng)商和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。企業(yè)應(yīng)對(duì)質(zhì)控品的檢測(cè)結(jié)果做出明確的范圍要求（試驗(yàn)有效性的判斷）。

免疫層析方法學(xué)的產(chǎn)品應(yīng)設(shè)置質(zhì)控線，詳述質(zhì)控線相關(guān)原材料（例如羊抗鼠IgG多克隆抗體）的選擇依據(jù)和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

5.1.5企業(yè)參考品

應(yīng)提交企業(yè)參考品的原料來源、選擇、制備、陰陽性及濃度/滴度確認(rèn)方法或試劑（建議采用國(guó)內(nèi)已上市的、臨床上普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類試劑）等相關(guān)研究資料并對(duì)企業(yè)參考品進(jìn)行充分驗(yàn)證。企業(yè)參考品的基質(zhì)應(yīng)與待測(cè)樣本相同。

該類產(chǎn)品的企業(yè)參考品一般包括：陽性參考品、陰性參考品、檢出限參考品、重復(fù)性參考品、親合力參考品等，申請(qǐng)人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特性及適用情況科學(xué)設(shè)置。其中陽性參考品重在評(píng)估產(chǎn)品的包容性，應(yīng)選擇不同來源的臨床樣本，并設(shè)置不同滴度水平。陰性參考品應(yīng)可評(píng)價(jià)產(chǎn)品的特異性，除設(shè)置正常人血清/血漿樣本外，還應(yīng)包含可能的干擾（溶血、脂血、黃疸及自身免疫性疾病樣本）和交叉樣本，對(duì)于檢測(cè)ToRCH IgM抗體的試劑，陰性參考品中建議包括ToRCH IgG抗體陽性樣本。檢出限參考品可設(shè)置臨床陽性樣本的系列稀釋樣本，其中應(yīng)包含最低檢出限水平。重復(fù)性參考品可設(shè)置至少兩個(gè)水平的臨床陽性樣本，包括最低檢出限附近濃度。親合力參考品一般包括高濃度親合力參考品、低濃度親合力參考品等，對(duì)于同時(shí)檢測(cè)ToRCH IgM和IgG抗體的試劑，企業(yè)參考品需對(duì)IgM抗體和IgG抗體分別設(shè)置。

5.2生產(chǎn)工藝研究資料

5.2.1產(chǎn)品基本反應(yīng)原理介紹。

5.2.2主要生產(chǎn)工藝介紹，可用流程圖方式表示，并簡(jiǎn)要說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。

5.2.3包被/標(biāo)記工藝研究，申請(qǐng)人應(yīng)考慮如包被/標(biāo)記液量、濃度、時(shí)間、條件等指標(biāo)對(duì)產(chǎn)品性能的影響，通過試驗(yàn)確定上述指標(biāo)的最佳組合。

5.2.4顯色（發(fā)光）系統(tǒng)、酶作用底物等的介紹以及最適條件研究。

（四）臨床評(píng)價(jià)資料

對(duì)于免于進(jìn)行臨床試驗(yàn)的臨床評(píng)價(jià)檢測(cè)項(xiàng)目，臨床評(píng)價(jià)可參照《免于臨床試驗(yàn)的體外診斷試劑臨床評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則》相關(guān)內(nèi)容開展研究，如相關(guān)法規(guī)、文件有更新，臨床評(píng)價(jià)應(yīng)符合更新后的要求。

對(duì)于未在《免于臨床試驗(yàn)體外診斷試劑目錄》的產(chǎn)品，應(yīng)進(jìn)行臨床試驗(yàn)。其臨床試驗(yàn)的開展、方案的制定以及報(bào)告的撰寫等均應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)及《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求，如相關(guān)法規(guī)、文件有更新，臨床試驗(yàn)應(yīng)符合更新后的要求。

1.臨床試驗(yàn)方法

臨床試驗(yàn)可采用試驗(yàn)體外診斷試劑與臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行比較研究試驗(yàn)，證明兩者等效，從而間接證明試驗(yàn)用體外診斷試劑臨床性能滿足預(yù)期用途的要求。對(duì)比試劑在預(yù)期用途、適用人群、樣本類型、檢測(cè)性能等方面應(yīng)與試驗(yàn)用體外診斷試劑具有較好的可比性。臨床試驗(yàn)方案中應(yīng)針對(duì)對(duì)比試劑的選擇及依據(jù)進(jìn)行詳細(xì)描述。

2.受試者選擇及樣本收集

臨床試驗(yàn)方案中應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)體外診斷試劑的預(yù)期用途、適用人群和檢測(cè)要求等合理確定臨床試驗(yàn)受試者選擇要求，包括：受試者入組/排除標(biāo)準(zhǔn)等。

根據(jù)產(chǎn)品臨床驗(yàn)證的目的，入組人群應(yīng)選擇具有ToRCH感染癥狀/體征的人群、與傳染源有密切接觸史的人群、育齡婦女及孕婦作為研究對(duì)象。

應(yīng)適當(dāng)納入感染癥狀相似、易混淆的其他病原體感染患者及自身免疫性疾病患者。

臨床樣本的采集、處理、保存等應(yīng)分別滿足臨床試驗(yàn)中所涉及各產(chǎn)品說明書相關(guān)要求。

對(duì)于CMV等ToRCH病原體IgG抗體親合力檢測(cè)，其臨床適用人群應(yīng)為疑似原發(fā)性感染的人群。入組方式可選擇ToRCH特異性IgM和ToRCH特異性IgG抗體同時(shí)為陽性的樣本作為親合力檢測(cè)的入組樣本。建議在臨床報(bào)告的試驗(yàn)設(shè)計(jì)和研究結(jié)果中對(duì)入組樣本的篩選入組過程進(jìn)行詳細(xì)描述。

3.臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)數(shù)量及要求

該類產(chǎn)品臨床試驗(yàn)應(yīng)在三家及以上符合要求的臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)開展。申請(qǐng)人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特點(diǎn)及其預(yù)期用途，綜合流行病學(xué)背景，選擇具有一定地域代表性的機(jī)構(gòu)開展臨床試驗(yàn)。

4.樣本類型

ToRCH抗體及G型免疫球蛋白抗體親合力檢測(cè)試劑適用的樣本類型一般包括血清、血漿和靜脈全血。

如申報(bào)產(chǎn)品所適用的樣本類型同時(shí)包含血清、血漿，且臨床前研究證實(shí)檢測(cè)性能沒有差異（如血清、血漿），則臨床試驗(yàn)中可匯總統(tǒng)計(jì)。對(duì)于靜脈全血樣本類型，建議進(jìn)行同源比對(duì)。

5.臨床試驗(yàn)樣本量估算

適當(dāng)?shù)臉颖玖渴潜ＷC申報(bào)產(chǎn)品臨床性能得到準(zhǔn)確評(píng)價(jià)的必要條件。臨床試驗(yàn)樣本量應(yīng)滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)要求，可采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行估算。

當(dāng)采用申報(bào)產(chǎn)品與已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)時(shí)，可采用單組目標(biāo)值法樣本量公式估算最低樣本量。

公式中，n為樣本量；Z1-α/2、Z1-β為顯著性水平和把握度的標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布的分?jǐn)?shù)位，P0為評(píng)價(jià)指標(biāo)的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)，PT為試驗(yàn)用體外診斷試劑評(píng)價(jià)指標(biāo)預(yù)期值。

對(duì)于ToRCH病原體抗體檢測(cè)試劑的臨床陰/陽性符合率，基于目前的科學(xué)認(rèn)識(shí)，建議P0不低于90%。當(dāng)選定的產(chǎn)品的符合率預(yù)期值（PT）遠(yuǎn)高于預(yù)期目標(biāo)值時(shí)，應(yīng)采用其他的方法進(jìn)行樣本類的估算。當(dāng)評(píng)價(jià)指標(biāo)P接近100%時(shí)，上述樣本量估算方法可能不適用，應(yīng)考慮選擇更加適宜的方法進(jìn)行樣本量估算，如精確概率法等。

對(duì)于ToRCH病原體G型免疫球蛋白抗體親合力檢測(cè)試劑的臨床高/低親和性符合率，基于目前的科學(xué)認(rèn)識(shí)，建議P0不低于90%。當(dāng)選定的產(chǎn)品的符合率預(yù)期值（PT）遠(yuǎn)高于預(yù)期目標(biāo)值時(shí)，應(yīng)采用其他的方法進(jìn)行樣本類的估算。當(dāng)評(píng)價(jià)指標(biāo)P接近100%時(shí)，上述樣本量估算方法可能不適用，應(yīng)考慮選擇更加適宜的方法進(jìn)行樣本量估算。

對(duì)于ToRCH特異性IgG定量檢測(cè)試劑，樣本待測(cè)物濃度應(yīng)覆蓋檢測(cè)范圍，并在各個(gè)濃度水平均應(yīng)有一定量的樣本例數(shù)。

臨床試驗(yàn)樣本量除需滿足上述統(tǒng)計(jì)學(xué)估算的最低樣本量要求外，還應(yīng)保證入組病例覆蓋受試者的各種特征；臨床試驗(yàn)樣本應(yīng)包含一定數(shù)量的醫(yī)學(xué)決定水平附近樣本或灰區(qū)樣本。

6.臨床評(píng)價(jià)指標(biāo)的選擇與統(tǒng)計(jì)分析

臨床評(píng)價(jià)指標(biāo)應(yīng)在臨床試驗(yàn)的設(shè)計(jì)階段確定，并在臨床試驗(yàn)方案中予以明確。

對(duì)于ToRCH抗體檢測(cè)試劑，臨床評(píng)價(jià)指標(biāo)主要包括試驗(yàn)體外診斷試劑與已上市同類產(chǎn)品相比的陽性符合率、陰性符合率等。統(tǒng)計(jì)分析一般以2×2四格表的形式總結(jié)兩種分析方法的檢測(cè)結(jié)果，并據(jù)此計(jì)算陽性符合率、陰性符合率、總符合率、Kappa值等指標(biāo)及其95%置信區(qū)間。結(jié)果不符樣本的復(fù)核結(jié)果不應(yīng)納入上述統(tǒng)計(jì)。對(duì)于申請(qǐng)半定量意義的檢測(cè)試劑，其對(duì)比試驗(yàn)的等效性研究，應(yīng)在上述統(tǒng)計(jì)分析的基礎(chǔ)上，根據(jù)臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)分布特點(diǎn)，采用Pearson相關(guān)系數(shù)等統(tǒng)計(jì)方法對(duì)考核試劑檢測(cè)值與對(duì)比試劑檢測(cè)值線性相關(guān)關(guān)系進(jìn)行分析。申請(qǐng)定量意義的IgG檢測(cè)試劑，比如風(fēng)疹病毒IgG檢測(cè)試劑，評(píng)價(jià)指標(biāo)通常還包括回歸分析的回歸系數(shù)、截距、相關(guān)系數(shù)和決定系數(shù)等。根據(jù)臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)繪制散點(diǎn)圖，并進(jìn)行相關(guān)性分析。并采用Bland-Altman法，計(jì)算一致性限度，評(píng)價(jià)兩種檢測(cè)結(jié)果的一致性。一致性限度應(yīng)在臨床所能接受的界值范圍內(nèi)。還應(yīng)采用回歸分析對(duì)兩種檢測(cè)方法的一致性進(jìn)行評(píng)價(jià)。根據(jù)數(shù)據(jù)分布特點(diǎn)等因素選擇適用的回歸分析方法，回歸分析應(yīng)重點(diǎn)觀察回歸方程的回歸系數(shù)和截距等指標(biāo)，計(jì)算回歸系數(shù)和截距的置信區(qū)間。同時(shí)對(duì)相關(guān)評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)行假設(shè)檢驗(yàn)。

對(duì)于ToRCH病原體G型免疫球蛋白抗體親合力檢測(cè)試劑，臨床評(píng)價(jià)指標(biāo)主要包括試驗(yàn)體外診斷試劑與已上市同類產(chǎn)品相比的高親和性符合率、低親和性符合率等。統(tǒng)計(jì)分析一般以2×2四格表的形式總結(jié)兩種分析方法的檢測(cè)結(jié)果，并據(jù)此計(jì)算高親和性符合率、低親和性符合率、總符合率、Kappa值等指標(biāo)及其95%置信區(qū)間。

7.結(jié)果不符的樣本

對(duì)于比較研究試驗(yàn)中申報(bào)產(chǎn)品與對(duì)比產(chǎn)品結(jié)果檢測(cè)不一致以及量值差異較大的情況，應(yīng)進(jìn)行合理的分析。如采用實(shí)驗(yàn)室參考方法或第三方檢測(cè)試劑進(jìn)行確認(rèn)，結(jié)果不應(yīng)用于修訂原有統(tǒng)計(jì)結(jié)果。

（五）產(chǎn)品說明書和標(biāo)簽樣稿

產(chǎn)品說明書格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求，境外試劑的中文說明書除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說明書的一致性，翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達(dá)習(xí)慣。產(chǎn)品說明書的技術(shù)內(nèi)容應(yīng)與注冊(cè)申報(bào)資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，則應(yīng)以規(guī)范格式對(duì)此內(nèi)容進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)注明文獻(xiàn)的相關(guān)信息。

ToRCH特異性抗體和IgG抗體親合力檢測(cè)試劑說明書編寫應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注以下內(nèi)容：

1．【預(yù)期用途】應(yīng)至少包括以下幾部分內(nèi)容：

1.1試劑盒用于體外定性和/或半定量和/或定量，檢測(cè)人血清和/或血漿和/或靜脈全血樣本中xx的特異性IgG或IgM抗體。用于ToRCH病原體感染的輔助診斷。

1.2試劑盒用于體外定性檢測(cè)人體血清和/或血漿和/或靜脈全血樣本中xx的特異性IgG親合力。作為ToRCH抗體檢測(cè)的一種補(bǔ)充，用于輔助判斷感染時(shí)間，排除近期原發(fā)性感染。

1.3簡(jiǎn)單介紹病原體的特征，如特定病原體的生物學(xué)特征、流行病學(xué)、潛伏期、易感人群、不同人群感染后的臨床表現(xiàn)等臨床背景相關(guān)的信息介紹；適用人群的介紹，如具有何種癥狀/體征的患者、相關(guān)的密切接觸者、相關(guān)疾病流行情況、地域要求等。

1.4人群中ToRCH特異性抗體的陽性率、ToRCH特異性抗體的產(chǎn)生、持續(xù)時(shí)間、臨床提示作用及與ToRCH核酸和抗體親合力等其他檢測(cè)指標(biāo)的關(guān)聯(lián)。

1.5明確說明ToRCH特異性IgM抗體檢測(cè)不得用于無癥狀人群的產(chǎn)前篩查；不得將本試劑的檢測(cè)結(jié)果單獨(dú)作為終止妊娠的依據(jù)。

1.6特異性IgG抗體的親合力檢測(cè)試劑還應(yīng)介紹親合力動(dòng)力學(xué)，親合力高低與感染時(shí)間的關(guān)系，并明確不得將本試劑IgG抗體的低親合力結(jié)果單獨(dú)作為近期急性感染判斷的依據(jù)。

1.7關(guān)于預(yù)期用途的幾點(diǎn)考慮：

1.7.1 ToRCH抗體檢測(cè)試劑作為病原體抗體檢測(cè)試劑，目前的臨床意義僅限于抗體陰陽性及IgG抗體親合力高低的判斷和病原體特異性IgG抗體滴度變化趨勢(shì)的觀察。

1.7.2定量檢測(cè)試劑可溯源至國(guó)家或國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品如WHO標(biāo)準(zhǔn)品等標(biāo)準(zhǔn)品。鑒于現(xiàn)在國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品的情況和臨床需求，建議ToRCH IgM檢測(cè)試劑的預(yù)期用途定義為定性檢測(cè)。

1.7.3抗體親合力檢測(cè)項(xiàng)目的確定，應(yīng)建立在明確的臨床意義和技術(shù)可行性基礎(chǔ)上。

2.【適用儀器】

對(duì)于采用酶聯(lián)免疫吸附法的檢測(cè)試劑應(yīng)明確適用酶標(biāo)儀的波長(zhǎng)要求，其他方法學(xué)檢測(cè)試劑應(yīng)明確具體的適用儀器型號(hào)。

3.【樣本要求】重點(diǎn)明確以下內(nèi)容：

3.1對(duì)于ToRCH病原體IgM抗體檢測(cè)試劑，如果檢測(cè)系統(tǒng)含有某種IgG抗體的去除技術(shù)（IgG吸附劑），如抗人IgG抗體等，則應(yīng)包括IgG吸附劑使用相關(guān)的注意事項(xiàng)。例如：經(jīng)IgG吸附劑處理的樣本不能用于IgG類抗體的檢測(cè)；在檢測(cè)IgM類抗體的同時(shí)，檢測(cè)處理過的混合物中的IgG類抗體，以證實(shí)對(duì)IgG和類風(fēng)濕因子（RF）等去除的有效性。

3.2對(duì)于IgG抗體親合力檢測(cè)試劑應(yīng)明確適用的特異性IgG抗體陽性樣本的濃度范圍或信號(hào)值范圍。

4.【檢驗(yàn)方法】詳細(xì)說明試驗(yàn)操作的各個(gè)步驟：

4.1檢測(cè)試劑及樣本的復(fù)溫要求及相關(guān)注意事項(xiàng)。例如：凍存樣本在復(fù)融后應(yīng)經(jīng)過充分的混勻再行檢測(cè)。

4.2試劑配制方法、注意事項(xiàng)，試劑開封后使用方法及注意事項(xiàng)等。

4.3高濃度樣本稀釋的方法及注意事項(xiàng)。

4.4試驗(yàn)條件：操作步驟、溫度、時(shí)間、儀器波長(zhǎng)以及試驗(yàn)過程中的注意事項(xiàng)等。

4.5定標(biāo)（如適用）：標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定，對(duì)需要進(jìn)行重新定標(biāo)情況的說明及對(duì)定標(biāo)周期的建議。

4.6質(zhì)量控制：操作步驟，質(zhì)控結(jié)果的要求（試驗(yàn)有效性的判斷），質(zhì)控結(jié)果不符合要求的處理方式。如果質(zhì)控品和病人樣本的使用方法不同，生產(chǎn)商應(yīng)注明必要的指導(dǎo)和解釋。建議在質(zhì)控品結(jié)果解釋環(huán)節(jié)注明以下字樣：“如果質(zhì)控結(jié)果與預(yù)期不符，實(shí)驗(yàn)室不應(yīng)出具檢測(cè)報(bào)告”。

5.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

詳細(xì)描述檢測(cè)結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)或計(jì)算方法。對(duì)陰陽性及血清轉(zhuǎn)換或親合力高低臨床意義的說明，對(duì)后續(xù)試驗(yàn)的建議。例：對(duì)于巨細(xì)胞病毒IgG抗體檢測(cè)灰區(qū)樣本，建議另外進(jìn)行巨細(xì)胞病毒IgM抗體檢測(cè)或于2周后進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)；對(duì)于IgG抗體親合力灰區(qū)樣本，應(yīng)于2周后進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)。對(duì)于半定量和定量的特異性IgG抗體檢測(cè)試劑，還應(yīng)明確抗體滴度變化的意義。由于ToRCH IgM假陽性結(jié)果可能造成不良后果，建議提示臨床醫(yī)生對(duì)所有ToRCH IgM陽性結(jié)果應(yīng)結(jié)合臨床病史及其他的檢測(cè)結(jié)果綜合判斷，不得作為ToRCH急性感染診斷的唯一依據(jù)。

對(duì)于ToRCH IgG定量檢測(cè)試劑，由于抗體的檢測(cè)結(jié)果與檢測(cè)方法及量值的溯源性相關(guān)，不同檢測(cè)系統(tǒng)間的結(jié)果可能不一致。建議企業(yè)給予相關(guān)提示。

對(duì)于IgG抗體親合力檢測(cè)試劑，還應(yīng)明確指出應(yīng)配合相應(yīng)的ToRCH IgG和IgM抗體檢測(cè)試劑結(jié)果進(jìn)行分析。應(yīng)提示：臨床醫(yī)生檢測(cè)的低親合力結(jié)果不得作為近期急性感染判斷的依據(jù)。

6.【檢驗(yàn)方法局限性】

綜合產(chǎn)品的預(yù)期用途、臨床背景、檢測(cè)方法及適用范圍等信息，對(duì)可能出現(xiàn)的局限性進(jìn)行相關(guān)說明，主要包括以下描述，請(qǐng)申請(qǐng)人選擇適用的條款在產(chǎn)品說明書中予以闡述。

6.1本產(chǎn)品檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考，不應(yīng)作為臨床診治的唯一依據(jù)，對(duì)患者的臨床診斷應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、流行病學(xué)、其他實(shí)驗(yàn)室檢查（如病原學(xué)檢測(cè)）等信息綜合考慮。

6.2感染初期，ToRCH特異性抗體未產(chǎn)生或低于檢出限，會(huì)導(dǎo)致陰性結(jié)果，如懷疑有病原體感染，應(yīng)提示患者在一段時(shí)間內(nèi)復(fù)查，如2周以上，抽取第二份樣本，并在與第一份樣本同條件下時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，以確定是否有初次感染的血清轉(zhuǎn)化或ToRCH特異性IgM或IgG抗體明顯升高。（企業(yè)應(yīng)注明第一份樣本的保存條件，并提交相應(yīng)的支持資料）

6.3ToRCH特異性IgG陰性，可能出現(xiàn)于疾病急性感染的早期，陰性結(jié)果應(yīng)結(jié)合臨床癥狀或病原接觸情況，并結(jié)合其他診斷檢測(cè)方法加以解釋。

6.4對(duì)于采用間接法的ToRCH IgM抗體檢測(cè)試劑，高滴度ToRCH特異性IgG抗體會(huì)與特異性IgM抗體競(jìng)爭(zhēng)抗原結(jié)合部位，會(huì)使檢測(cè)的敏感性降低，特異性IgM抗體結(jié)果可能會(huì)出現(xiàn)假性低值或陰性結(jié)果。

6.5由于孕婦ToRCH IgM抗體的實(shí)驗(yàn)室檢查存在較高的假陽性風(fēng)險(xiǎn)，不能可靠地鑒定胎兒患病的風(fēng)險(xiǎn)，故不建議對(duì)無癥狀孕婦的ToRCH IgM抗體進(jìn)行篩查。不得將本試劑的檢測(cè)結(jié)果單獨(dú)作為終止妊娠的依據(jù)。

6.6免疫功能受損或接受免疫抑制治療的患者，如人類免疫缺陷病毒（HIV）感染患者或器官移植后接受免疫抑制治療的患者，其抗體及抗體親合力檢測(cè)的參考價(jià)值有限，可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的醫(yī)學(xué)解釋。

6.7在近幾個(gè)月內(nèi)接受過輸血或其他血液制品治療的人群，對(duì)其陽性檢測(cè)結(jié)果的分析應(yīng)慎重。

6.8部分ToRCH（如風(fēng)疹病毒）特異性IgM抗體不僅出現(xiàn)于初次感染，當(dāng)二次感染和復(fù)發(fā)感染時(shí)也可能出現(xiàn)。個(gè)別個(gè)體的ToRCH特異性IgM抗體,在初次感染較長(zhǎng)時(shí)間后仍能檢出，因此對(duì)特異性IgM抗體陽性在判斷初次感染時(shí)間的解釋中應(yīng)慎重。

6.9當(dāng)處于低流行率地區(qū)的無癥狀人群或已接種過特定ToRCH疫苗的個(gè)體檢出ToRCH IgM陽性結(jié)果時(shí)，應(yīng)警惕可能出現(xiàn)的假陽性結(jié)果。同時(shí)建議臨床醫(yī)生結(jié)合其癥狀/體征、病史、流行病學(xué)、其他實(shí)驗(yàn)室檢查（如IgG抗體親合力和病原學(xué)檢測(cè)）進(jìn)行判斷。建議對(duì)申報(bào)試劑臨床研究中的病例人群特征進(jìn)行說明，并對(duì)適用人群的年齡、地域等特征進(jìn)行明示。

6.10人血清中的異嗜性抗體可能與試劑中的免疫球蛋白結(jié)合干擾試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)于經(jīng)常接觸動(dòng)物或動(dòng)物血清制品的人群，應(yīng)警惕可能出現(xiàn)的異常干擾結(jié)果。

6.11接受過小鼠單克隆抗體治療的患者樣本中，可能含有人抗小鼠抗體（HAMA）。對(duì)于試劑盒組成成份中含有小鼠源性抗體的檢測(cè)試劑，若待測(cè)樣本中含有HAMA，會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

6.12體內(nèi)存在的高濃度的鏈霉親合素（親合素）抗體和發(fā)光標(biāo)志物抗體可能會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。

6.13由于ToRCH IgG抗體親合力成熟過程存在個(gè)體差異，個(gè)別個(gè)體在初次感染較長(zhǎng)時(shí)間后仍呈現(xiàn)ToRCH IgG抗體低親合力，因此不得將本試劑IgG抗體的低親合力結(jié)果單獨(dú)作為近期急性感染判斷的依據(jù)。

7.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】 請(qǐng)依據(jù)研究資料詳述各性能指標(biāo)，應(yīng)注意以下方面：

7.1最低檢出限：說明試劑的最低檢出濃度或滴度，簡(jiǎn)單介紹最低檢出限的確定方法。

7.2 分析特異性

7.2.1交叉反應(yīng)：對(duì)易產(chǎn)生交叉反應(yīng)的其他病原體的高水平抗體、高濃度ToRCH特異性IgG抗體等的驗(yàn)證情況。

7.2.2干擾物質(zhì)：樣本中常見干擾物質(zhì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，如溶血、脂血、黃疸等干擾因子研究（結(jié)果應(yīng)量化表示，禁用輕度、嚴(yán)重等模糊表述），有關(guān)高濃度總IgM和總IgG抗體、自身性免疫抗體（抗核抗體、類風(fēng)濕因子）等的干擾驗(yàn)證。

7.3抗體滴度變化（適用于半定量和/或定量檢測(cè)試劑）和診斷靈敏度：介紹血清轉(zhuǎn)換盤的來源，將檢測(cè)結(jié)果以圖或表的形式列出。

8.【注意事項(xiàng)】應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：有關(guān)試劑盒內(nèi)人源組分（如有）生物安全性的警告。如：試劑盒內(nèi)對(duì)照品（質(zhì)控品）或其他可能含有人源物質(zhì)的組分，雖已經(jīng)通過了乙型肝炎病毒表面抗原（HBs-Ag）、人類免疫缺陷病毒1/2型抗體（HIV1/2-Ab）、丙型肝炎病毒抗體（HCV-Ab）等項(xiàng)目的檢測(cè)，但截至目前，沒有任何一項(xiàng)檢測(cè)可以確保絕對(duì)安全，故仍應(yīng)將這些組分作為潛在傳染源對(duì)待。

（六）質(zhì)量管理體系文件

申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)在申請(qǐng)注冊(cè)時(shí)提交與產(chǎn)品研制、生產(chǎn)有關(guān)的質(zhì)量管理體系相關(guān)資料。詳述產(chǎn)品的生產(chǎn)過程，提供生產(chǎn)工藝流程圖。明確申報(bào)產(chǎn)品反應(yīng)及檢測(cè)原理和過程，標(biāo)明主要控制點(diǎn)與項(xiàng)目及主要原材料、采購(gòu)件的來源及質(zhì)量控制方法。

如適用，應(yīng)當(dāng)提供擬核查產(chǎn)品與既往已通過核查產(chǎn)品在生產(chǎn)條件、生產(chǎn)工藝等方面的對(duì)比說明。

三、參考文獻(xiàn)

[1] 國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局.體外診斷試劑注冊(cè)與備案管理辦法: 國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局令第48號(hào)[Z].

[2] 國(guó)家藥品監(jiān)督管理局.體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式: 國(guó)家藥品監(jiān)督管理局2021年第122號(hào)公告[Z]. 

[3] 國(guó)家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評(píng)中心.定性檢測(cè)體外診斷試劑分析性能評(píng)估注冊(cè)審查指導(dǎo)原則：國(guó)家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評(píng)中心2022年第36號(hào)通告[Z].

[4] 國(guó)家藥品監(jiān)督管理局.體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則：國(guó)家藥品監(jiān)督管理局2021年第72號(hào)通告 [Z].

[5]Review Criteria for In Vitro Diagnostic Devices for  Detection of IgM Antibodies to Viral Agents, CDRH FDA, USA February 27, 1997[Z].

[6]National Committee for Clinical Laboratory Standards. Specifications for immunological testing for infectious diseases; Approved guideline, LA18-A2, 2001[Z].

[7]王玉蘭，吳建民.臨床免疫學(xué)與檢驗(yàn)（第4版）[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2007.

[8] 李衛(wèi).醫(yī)療器械臨床試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)方法（第一版）[M].北京：人民軍醫(yī)出版社，2012.

[9] 陳敬賢.診斷病原體學(xué)（第一版）[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2008.

[10]馮仁豐.臨床檢驗(yàn)質(zhì)量管理技術(shù)基礎(chǔ)（第二版）[M].上海：上海科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社，2007.

[11]Class II Special Controls Guidance Document: Herpes Simplex Virus Types 1 and 2 Serological Assays, CDRH FDA, August 9, 2011[Z].

[12]National Committee for Clinical Laboratory Standards. Clinical use and interpretation of serologic tests for toxoplasma gondii; Approved guideline, M36-A, 2004[Z].

[13]焦奎，張書圣.酶聯(lián)免疫分析技術(shù)及應(yīng)用（第一版）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2004.

[14] 國(guó)家藥品監(jiān)督管理局.免于臨床試驗(yàn)的體外診斷試劑臨床評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則：國(guó)家藥品監(jiān)督管理局2021年第74號(hào)通告[Z].

[15]EP17-A2：Evaluation of Detection Capability for Clinical Laboratory Measurement Procedures; Approved Guideline-Second Edition [Z].

[16]EP34：Establishing and Verifying an Extended Measuring Interval Through Specimen Dilution and Spiking [Z].