附件：單純皰疹病毒（HSV）核酸檢測(cè)及分型試劑注冊(cè)審查指導(dǎo)原則（2024年第2號(hào)）.doc

單純皰疹病毒（HSV）核酸檢測(cè)及分型試劑
注冊(cè)審查指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)單純皰疹病毒核酸檢測(cè)及分型試劑注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫(xiě)，同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門提供參考。

本指導(dǎo)原則是對(duì)單純皰疹病毒核酸檢測(cè)及分型試劑的一般要求，注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用。若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是供注冊(cè)申請(qǐng)人和技術(shù)審評(píng)人員使用的指導(dǎo)性文件，但不包括審評(píng)審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細(xì)的研究和驗(yàn)證資料。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍

本指導(dǎo)原則適用于利用基于實(shí)時(shí)熒光PCR（Real-Time PCR）的核酸檢測(cè)技術(shù)，以特定的單純皰疹病毒1型（Herpes simplex virus type 1，HSV-1）和/或單純皰疹病毒2型（Herpes simplex virus type 2，HSV-2）基因序列為檢測(cè)目標(biāo)，對(duì)來(lái)源于人體樣本中的單純皰疹病毒DNA進(jìn)行體外定性檢測(cè)或分型檢測(cè)的試劑，臨床主要應(yīng)用于生殖器皰疹中單純皰疹病毒感染的輔助診斷。如應(yīng)用于其他部位，應(yīng)另行設(shè)計(jì)合理的臨床試驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。

臨床用于檢測(cè)單純皰疹病毒的檢測(cè)試劑，可根據(jù)不同的適應(yīng)證選擇適用的樣本類型，生殖器皰疹的主要樣本類型為生殖器皮膚黏膜皮損標(biāo)本（如潰瘍面滲液拭子，皰液等）、人泌尿生殖道拭子（如女性的宮頸拭子或陰道拭子、男性的尿道拭子）。當(dāng)應(yīng)用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染時(shí)，可能涉及腦脊液樣本。

對(duì)于采用其他方法學(xué)（如等溫?cái)U(kuò)增、測(cè)序方法及其他方法等）、或者采用其他樣本類型（如腦脊液等）的HSV核酸檢測(cè)或分型試劑，可能部分要求不完全適用或本文所述內(nèi)容不夠全面，注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)參照本指導(dǎo)原則，根據(jù)產(chǎn)品特性對(duì)適用部分進(jìn)行評(píng)價(jià)，并補(bǔ)充其他的評(píng)價(jià)。

本指導(dǎo)原則適用于HSV核酸檢測(cè)及分型試劑進(jìn)行產(chǎn)品注冊(cè)和變更注冊(cè)的情形。本指導(dǎo)原則針對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料中的部分內(nèi)容進(jìn)行撰寫(xiě)，其他未盡事宜應(yīng)當(dāng)符合《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》等相關(guān)法規(guī)要求，同時(shí)建議參考《定性檢測(cè)試劑分析性能評(píng)估注冊(cè)審查指導(dǎo)原則》等適用的技術(shù)文件要求。

二、注冊(cè)審查要點(diǎn)

（一）監(jiān)管信息

1.產(chǎn)品名稱及分類編碼

產(chǎn)品名稱應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)與備案管理辦法》及相關(guān)法規(guī)的要求，如單純皰疹病毒1型（HSV-1）核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?、單純皰疹病?型（HSV-2）核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ┑取０凑铡扼w外診斷試劑分類規(guī)則》，該產(chǎn)品按照第三類體外診斷試劑管理，分類編碼為6840。

2.注冊(cè)申請(qǐng)人還需提交產(chǎn)品列表、關(guān)聯(lián)文件、申報(bào)前與監(jiān)管機(jī)構(gòu)的聯(lián)系情況和溝通記錄及符合性聲明等文件。

（二）綜述資料

綜述資料主要包括概述、產(chǎn)品描述、預(yù)期用途、申報(bào)產(chǎn)品上市歷史及其他需說(shuō)明的內(nèi)容。其中，需注意以下內(nèi)容：

1. 檢驗(yàn)原理應(yīng)詳細(xì)說(shuō)明產(chǎn)品所采用的技術(shù)原理及檢測(cè)流程，明確產(chǎn)品檢測(cè)的靶基因及靶序列，需選擇保守性和特異性相對(duì)較高的基因和靶序列，同時(shí)還應(yīng)考慮擴(kuò)增效率。提供引物和探針的設(shè)計(jì)依據(jù)。提供核酸提?。ㄊ止ず妥詣?dòng)提取方式應(yīng)分別明確）和PCR擴(kuò)增的時(shí)間，提供不同適用機(jī)型的檢測(cè)通量（如適用）。

2. 預(yù)期用途需明確可檢測(cè)的型別、靶基因、樣本類型、采樣部位、適用人群、臨床適應(yīng)證等。

3. 與已上市同類和/或前代產(chǎn)品的比較部分應(yīng)著重包括方法學(xué)、檢驗(yàn)原理、樣本類型、采樣部位及采樣方式、檢測(cè)靶基因、組成成分、內(nèi)標(biāo)、質(zhì)控品、判讀規(guī)則、不同HSV分型檢出能力、預(yù)期用途、適用人群、分析性能和臨床性能等方面。

（三）非臨床資料

1.產(chǎn)品技術(shù)要求及檢驗(yàn)報(bào)告

按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫(xiě)指導(dǎo)原則》的要求編寫(xiě)產(chǎn)品技術(shù)要求，并提交三個(gè)不同批次符合產(chǎn)品技術(shù)要求的全項(xiàng)目檢驗(yàn)報(bào)告。提交資料應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求及說(shuō)明》《醫(yī)療器械注冊(cè)自檢管理規(guī)定》等相關(guān)文件的要求。

2.分析性能研究

注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)在原材料和生產(chǎn)工藝經(jīng)過(guò)選擇和確認(rèn)、質(zhì)量管理體系得到有效控制并且保證產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定的基礎(chǔ)上，采用完整、確定的檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行分析性能評(píng)估。

對(duì)于每項(xiàng)分析性能的評(píng)價(jià)都應(yīng)包括具體研究目的、研究方法、試驗(yàn)方案、試驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)分析等詳細(xì)資料。有關(guān)分析性能驗(yàn)證的背景信息也應(yīng)在申報(bào)資料中有所體現(xiàn)，包括試驗(yàn)地點(diǎn)、采用的試劑名稱、規(guī)格和批號(hào)，儀器名稱和型號(hào)，樣本類型和來(lái)源等。分析性能評(píng)估的試驗(yàn)方法可以參考國(guó)際或國(guó)內(nèi)有關(guān)體外診斷試劑性能評(píng)估的指導(dǎo)原則進(jìn)行。

分析性能評(píng)估所用樣本的基本信息均需明確，例如樣本來(lái)源、樣本類型、樣本采集和處理方式、稀釋方式、濃度或滴度（定值）確定過(guò)程及數(shù)據(jù)等。研究中采用的HSV-1和/或HSV-2陽(yáng)性樣本，應(yīng)采用科學(xué)合理的方法確定其型別、陰陽(yáng)性和濃度水平，提交具體的試驗(yàn)資料。建議研究樣本濃度溯源到國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品。分析性能評(píng)估用樣本一般應(yīng)為真實(shí)樣本，不建議采用質(zhì)粒、假病毒等進(jìn)行分析性能評(píng)估，如涉及稀釋后檢測(cè)，應(yīng)采用與適用樣本類型一致的陰性基質(zhì)進(jìn)行稀釋。對(duì)于各項(xiàng)性能中采用的樣本，在下述各項(xiàng)性能研究資料中分別提供樣本信息列表。檢出限和包容性研究中所用樣本應(yīng)相互獨(dú)立。

針對(duì)適用的不同樣本類型分別進(jìn)行分析性能研究，應(yīng)包含常見(jiàn)的采樣部位。

如試劑用于不同適用機(jī)型，需要在不同機(jī)型上分別進(jìn)行性能評(píng)估。如申報(bào)產(chǎn)品包含不同的包裝規(guī)格，需要對(duì)各包裝規(guī)格進(jìn)行分析或驗(yàn)證。

建議著重對(duì)以下分析性能進(jìn)行研究。

2.1樣本穩(wěn)定性

應(yīng)充分考慮實(shí)際使用過(guò)程中樣本采集、處理、運(yùn)輸及保存等各個(gè)階段的條件，對(duì)不同樣本類型的樣本穩(wěn)定性分別進(jìn)行研究。如有不同的樣本采集處理方法（如不同采樣拭子、采樣過(guò)程、采集后未經(jīng)處理的樣本、加入不同裂解液/消化液的樣本等）、不同的樣本保存介質(zhì)（樣本保存液及保存容器）、不同的樣本運(yùn)輸和保存條件（如涉及），則需分別完成穩(wěn)定性研究。一般包括樣本各種實(shí)際運(yùn)輸及保存條件下的保存期限驗(yàn)證?？衫鋬霰４娴臉颖具€應(yīng)對(duì)凍融次數(shù)進(jìn)行合理驗(yàn)證。

如核酸提取液可不立即進(jìn)行檢測(cè)，還需對(duì)核酸提取液的保存條件和保存時(shí)間進(jìn)行研究。

2.2適用的樣本類型

結(jié)合產(chǎn)品的適用人群、預(yù)期用途及HSV分型，列明產(chǎn)品適用的樣本類型、采樣部位、樣本采集方法（包括收集/保存介質(zhì)）及添加劑，采用合理方法評(píng)價(jià)其適用性。

如申報(bào)產(chǎn)品包含多個(gè)樣本類型，如皰液或潰瘍面滲液拭子、男性尿道拭子、女性宮頸或陰道拭子作為不同的樣本類型需分別進(jìn)行分析性能研究。研究樣本應(yīng)包含常見(jiàn)的采樣部位（如外生殖器或肛直腸皮膚粘膜、女性陰道、宮頸、男性尿道等）。如產(chǎn)品適用于其他樣本類型，應(yīng)對(duì)其他所有樣本類型進(jìn)行全性能評(píng)估。

如采用不同樣本采集器、不同樣本保存液/稀釋液 、不同處理方法等，需分別進(jìn)行分析性能研究。

對(duì)于難獲得的樣本類型，如皰液，可部分采用與臨床陰性基質(zhì)具有一致性的人工制備陰性基質(zhì)進(jìn)行最低檢測(cè)限的確定，注冊(cè)申請(qǐng)人需充分考慮基質(zhì)效應(yīng)的影響，保證人工制備樣本與預(yù)期適用樣本的檢測(cè)結(jié)果無(wú)顯著偏差，并提交研究資料。

2.3企業(yè)參考品驗(yàn)證

根據(jù)主要原材料研究資料中的企業(yè)參考品設(shè)置情況，采用至少三批產(chǎn)品對(duì)企業(yè)參考品進(jìn)行檢驗(yàn)并提供詳細(xì)的試驗(yàn)數(shù)據(jù)。

2.4準(zhǔn)確度

可采用申報(bào)試劑與已明確型別和濃度樣本或與已上市產(chǎn)品同時(shí)檢測(cè)臨床樣本比較檢測(cè)結(jié)果之間的一致性程度。研究應(yīng)納入一定數(shù)量的陰性和陽(yáng)性樣本，并注意包含一定數(shù)量的陽(yáng)性判斷值附近的樣本和混合感染樣本。

不同的樣本類型應(yīng)分別進(jìn)行準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)。

2.5精密度

注冊(cè)申請(qǐng)人根據(jù)試劑盒檢測(cè)范圍選擇相應(yīng)的HSV型別進(jìn)行精密度驗(yàn)證。對(duì)于HSV-1和HSV-2通用及分型檢測(cè)的試劑，注冊(cè)申請(qǐng)人需針對(duì)HSV-1和HSV-2檢測(cè)靶標(biāo)分別進(jìn)行精密度評(píng)價(jià)，檢測(cè)樣本均需包含HSV-1和HSV-2的不同水平，對(duì)于分型試劑，每個(gè)樣本需分別提供HSV-1和HSV-2的分析結(jié)果。

注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)對(duì)精密度指標(biāo)的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求，如相應(yīng)型別的陰陽(yáng)性符合率，Ct值標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)的范圍等。應(yīng)對(duì)可能影響檢測(cè)精密度的主要變量設(shè)計(jì)合理的試驗(yàn)方案進(jìn)行精密度評(píng)價(jià)，包括運(yùn)行、時(shí)間、操作者、儀器、試劑批次和地點(diǎn)等影響精密度的條件等。注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)對(duì)檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，獲得重復(fù)性、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)精密度、實(shí)驗(yàn)室間精密度、批間精密度等結(jié)果。

精密度評(píng)價(jià)試驗(yàn)應(yīng)包含核酸提取步驟。應(yīng)設(shè)定合理的精密度評(píng)價(jià)周期，例如為期至少20天的檢測(cè)。可采用可溯源的病毒株、臨床分離培養(yǎng)物、臨床樣本進(jìn)行試驗(yàn)，至少采用3個(gè)濃度水平。具體要求如下：

陰性樣本：待測(cè)物濃度低于最低檢測(cè)限，陰性檢出率應(yīng)為100%（n≥20）。

檢出限樣本：待測(cè)物濃度為檢出限濃度，陽(yáng)性檢出率應(yīng)大于95%（n≥20）。

中/強(qiáng)陽(yáng)性樣本：待測(cè)物濃度呈中度到強(qiáng)陽(yáng)性，陽(yáng)性檢出率為100%，且Ct值的CV≤5%（n≥20）。

2.6檢出限

注冊(cè)申請(qǐng)人根據(jù)試劑盒檢測(cè)范圍選擇相應(yīng)的HSV型別進(jìn)行檢出限驗(yàn)證。對(duì)于HSV-1和HSV-2通用及分型檢測(cè)的試劑，應(yīng)分別針對(duì)HSV-1和HSV-2進(jìn)行最低檢出限的確定和驗(yàn)證。使用已明確HSV分型和濃度/滴度的多例病毒株/臨床分離培養(yǎng)物，采用與適用樣本類型及樣本保存液一致的陰性基質(zhì)進(jìn)行系列稀釋，進(jìn)行最低檢測(cè)限的建立和驗(yàn)證。應(yīng)提供上述病毒株或臨床分離培養(yǎng)物的來(lái)源、制備方法、型別確認(rèn)及量值確認(rèn)等試驗(yàn)信息。

2.6.1檢出限確定

每個(gè)型別選取至少3種不同病毒株/臨床分離培養(yǎng)物，分別進(jìn)行系列稀釋獲得多個(gè)濃度梯度，每個(gè)濃度梯度重復(fù)檢測(cè)不少于3次，記錄每個(gè)濃度梯度的定性檢測(cè)結(jié)果以及Ct值，以100%可檢出的最低濃度水平作為預(yù)設(shè)檢測(cè)限。在此濃度附近制備若干濃度梯度樣品，每個(gè)濃度至少重復(fù)檢測(cè)20次，將具有95%陽(yáng)性檢出率的最低濃度作為最低檢測(cè)限。也可采用適當(dāng)?shù)哪Ｐ停ㄈ鏟robit分析）和分析方法將具有95%陽(yáng)性檢出率的最低濃度水平作為確定的檢出限。

2.6.2檢出限驗(yàn)證

分別選擇與2.6.1不同來(lái)源的HSV-1和HSV-2樣本，至少各3例在檢出限濃度水平進(jìn)行驗(yàn)證，采用臨床陰性基質(zhì)稀釋到最低檢測(cè)限濃度水平重復(fù)20次檢測(cè)，陽(yáng)性檢出率應(yīng)不低于95%。

注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)能夠提供用于最低檢出限驗(yàn)證的病毒株的來(lái)源、濃度及型別確認(rèn)試驗(yàn)等信息。應(yīng)對(duì)不同樣本類型及不同樣本保存液（如涉及）分別評(píng)價(jià)最低檢出限。

2.7包容性

2.7.1采用生物信息學(xué)方法對(duì)產(chǎn)品檢測(cè)的包容性進(jìn)行分析，應(yīng)覆蓋已公布的單純皰疹病毒核酸序列。

2.7.2根據(jù)試劑盒檢測(cè)范圍選擇具有時(shí)間和區(qū)域特征性的不同來(lái)源的HSV-1和/或HSV-2陽(yáng)性臨床樣本或分型及濃度明確的HSV-1及HSV-2病毒株各不少于5例進(jìn)行包容性研究。研究?jī)?nèi)容應(yīng)包括重復(fù)性、檢出限等。注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)能夠提供用于包容性驗(yàn)證的樣本來(lái)源、樣本類型、型別及確認(rèn)方法、濃度或滴度及其確定方法、試驗(yàn)數(shù)據(jù)等詳細(xì)信息。對(duì)于檢出限濃度附近樣本未能檢出的樣本，應(yīng)逐步提高濃度進(jìn)行分析以確定其最低檢出限。包容性驗(yàn)證所用臨床樣本或病毒株與最低檢測(cè)限研究的樣本不能重復(fù)使用。

2.8分析特異性

2.8.1交叉反應(yīng)

注冊(cè)申請(qǐng)人首先應(yīng)針對(duì)被檢測(cè)靶序列與人基因組及可能存在于生殖器皮膚粘膜、人類泌尿、生殖道的微生物基因組進(jìn)行基因序列比對(duì)，并提交比對(duì)結(jié)果，如有同源性序列則應(yīng)進(jìn)行交叉反應(yīng)驗(yàn)證。

建議使用相應(yīng)病原體陽(yáng)性的臨床樣本或添加了病原體培養(yǎng)物的陰性臨床樣本進(jìn)行交叉反應(yīng)研究。樣本基質(zhì)應(yīng)與預(yù)期檢測(cè)樣本類型一致，應(yīng)對(duì)每種適用的樣本類型進(jìn)行交叉反應(yīng)研究。

交叉反應(yīng)驗(yàn)證主要考慮下述的可能性：人基因組DNA、采樣部位可能存在的定植菌、可經(jīng)性傳播的其他病原體、易引起相同或相似臨床癥狀的其他病原體、核酸序列具有同源性的病原體及需要驗(yàn)證的其他常見(jiàn)病原體等，以及臨床需進(jìn)行鑒別診斷的其他情形。

需驗(yàn)證多例高濃度人類基因組DNA和適用樣本類型可能存在的相關(guān)微生物的交叉反應(yīng)。建議對(duì)以下微生物進(jìn)行交叉反應(yīng)研究（“*”表示必做項(xiàng)目, “/”表示選擇其中一種,括號(hào)中“、”表示相應(yīng)型別均需要驗(yàn)證）：

病毒類：常見(jiàn)高危型人乳頭瘤病毒（16、18、52、58)*、單純皰疹病毒1型*、單純皰疹病毒2型*、水痘-帶狀皰疹病毒*、EB病毒*、巨細(xì)胞病毒*、傳染性軟疣病毒*、人類免疫缺陷病毒*、腸道病毒（70、71）*、腺病毒（3、7型）*、人皰疹病毒6型、人類皰疹病毒7型、人類皰疹病毒8型*、柯薩奇病毒、腮腺炎病毒、風(fēng)疹病毒、人雙埃可病毒。

細(xì)菌類：淋病奈瑟菌*、B群鏈球菌*、杜克雷嗜血桿菌*、肉芽腫莢膜桿菌*、陰道加德納菌*、厭氧菌*（消化球菌屬/消化鏈球菌屬）、卷曲乳桿菌/惰性乳桿菌/克氏動(dòng)彎桿菌/陰道陌生菌/普雷沃菌屬/纖毛菌屬*、大腸埃希菌*、干酪乳桿菌*、嗜酸乳桿菌*、表皮葡萄球菌/腐生葡萄球菌*、糞腸球菌*、屎腸球菌*、金黃色葡萄球菌*、陰道棒狀桿菌、短小棒狀桿菌、鮑曼不動(dòng)桿菌、恥垢分枝桿菌、脆弱類桿菌、陰溝腸桿菌、甲型鏈球菌。

真菌類：白色念珠菌*、光滑念珠菌*。

其他：人型支原體*、生殖支原體*、解脲脲原體*、沙眼衣原體沙眼生物變種*、沙眼衣原體性病淋巴肉芽腫變種*、梅毒螺旋體蒼白亞種*、陰道毛滴蟲(chóng)*、剛地弓形蟲(chóng)。

建議在病毒和細(xì)菌感染的醫(yī)學(xué)相關(guān)水平進(jìn)行交叉反應(yīng)的驗(yàn)證，通常細(xì)菌感染的水平為106 CFU/mL或更高，病毒為105 PFU/mL或更高，也可采用其他合理方法定值的濃度，例如核酸濃度107 copies/mL。

注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)提供所有用于交叉反應(yīng)驗(yàn)證微生物的來(lái)源、組成、種屬/型別和濃度確認(rèn)等試驗(yàn)資料。

2.8.2微生物干擾

注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)充分考慮臨床上容易與HSV1或HSV2合并感染的病原體，在高濃度的情況下對(duì)低濃度（例如檢出限濃度）HSV1或HSV2核酸檢測(cè)的影響。（如HSV-1/2對(duì)HSV-2/1的干擾，HIV、HPV對(duì)HSV-1和/或HSV-2的干擾及其他可能共感染的病原體對(duì)HSV的干擾）。建議注冊(cè)申請(qǐng)人結(jié)合申報(bào)試劑的反應(yīng)模式，采用可能混合感染的高濃度病原體對(duì)最低檢測(cè)限濃度附近的HSV-1或HSV-2分別進(jìn)行微生物干擾研究。

2.8.3競(jìng)爭(zhēng)性干擾

競(jìng)爭(zhēng)性干擾研究的病原體組合建議為同一反應(yīng)體系內(nèi)病原體、常見(jiàn)重癥感染病原體及常見(jiàn)混合感染病原體。對(duì)于HSV1和HSV2的多重核酸檢測(cè)，注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)驗(yàn)證HSV-1及HSV-2相互之間的競(jìng)爭(zhēng)性干擾。

2.8.4其他干擾試驗(yàn)

應(yīng)針對(duì)不同樣本類型，分別評(píng)價(jià)可能存在的干擾情況。建議采用單純皰疹病毒臨界陽(yáng)性樣本和陰性樣本，在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度（“最差條件”）條件下進(jìn)行干擾試驗(yàn)。HSV-1和HSV-2需分別進(jìn)行干擾性研究。提供干擾性研究的試驗(yàn)方案、分析方法、無(wú)干擾的接受標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)結(jié)果進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)分析，對(duì)比添加干擾物質(zhì)前后的Ct值差異。潛在的干擾物質(zhì)包括內(nèi)源性、外源性、在樣本采集和處理期間引入的物質(zhì)及其他已報(bào)道的干擾物質(zhì)。

泌尿生殖道拭子樣本應(yīng)至少選取全血（或血紅蛋白和白細(xì)胞）、人白蛋白、膽紅素、宮頸粘液等進(jìn)行研究。

常用藥物的干擾：四環(huán)素、阿奇霉素、螺旋霉素、羅紅霉素、米諾環(huán)素、磺胺嘧啶、氫化可的松、地塞米松、阿昔洛韋、更昔洛韋、抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物等抗病毒藥物、陰道常用藥物（如避孕藥物、抗真菌藥物，陰道炎治療相關(guān)藥物，激素類藥物）、女性衛(wèi)生用品、陰道栓劑、陰道潤(rùn)滑劑、陰道清洗劑以及可引發(fā)采樣部位藥疹的常見(jiàn)藥物。

其他樣本類型的干擾性研究應(yīng)根據(jù)適用樣本類型可能含有的干擾物質(zhì)進(jìn)行相應(yīng)研究，需提供干擾物及濃度選擇依據(jù)。注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)對(duì)采用的不同核酸提取試劑、樣本采集器（包括采樣拭子、采樣管、樣本保存液等）等樣本采樣處理過(guò)程可能引入的對(duì)檢測(cè)系統(tǒng)的干擾物質(zhì)進(jìn)行充分的干擾性研究。

2.9 HSV核酸DNA提取

在進(jìn)行核酸檢測(cè)之前，建議有核酸（DNA）提取/純化步驟。該步驟的目的除最大量分離出目標(biāo)DNA外，還應(yīng)有相應(yīng)的純化作用，盡可能去除PCR抑制物。無(wú)論申報(bào)產(chǎn)品是否含有DNA分離/純化的組分，注冊(cè)申請(qǐng)人都應(yīng)對(duì)配合使用的所有核酸提取試劑進(jìn)行提取核酸純度、濃度、提取效率的研究，并與質(zhì)量較好的核酸提取試劑進(jìn)行平行比對(duì)。若產(chǎn)品適用兩種或以上核酸提取試劑，則每一種核酸提取試劑均需配合檢測(cè)試劑進(jìn)行抗干擾、精密度和檢出限的驗(yàn)證。如果配套核酸提取試劑提取原理存在差異，還需額外進(jìn)行檢出限的建立研究。

2.10反應(yīng)體系

2.10.1樣本采集和處理

2.10.1.1詳述樣本采集部位、采集方式、樣本處理方式的選擇，提供相關(guān)的研究資料。包括對(duì)樣本的收集、制備或處理、運(yùn)輸（如涉及）和儲(chǔ)存的方式進(jìn)行驗(yàn)證，必要時(shí)進(jìn)行選擇和確認(rèn)并提供相關(guān)的研究資料。不同類型的樣本應(yīng)分別進(jìn)行研究。

2.10.1.2詳述采樣拭子及樣本保存液的選擇：如對(duì)樣本采集拭子的適用性驗(yàn)證，拭子對(duì)樣本的洗脫效率。提供詳細(xì)的保存液或裂解液的成分、濃度、使用量的要求及適用性驗(yàn)證資料等。配套的不同保存液或裂解液需驗(yàn)證檢出限和重復(fù)性。

2.10.2核酸提取和反應(yīng)體系

研究確定最佳核酸提取和反應(yīng)體系，包括核酸提取用的樣本體積、洗脫體積和PCR反應(yīng)加樣體積、各種酶濃度、引物/探針濃度、dNTPs濃度、dUTP濃度（如有）、陽(yáng)離子濃度及反應(yīng)各階段溫度、時(shí)間、循環(huán)數(shù)、熒光采集條件及反應(yīng)體積等。建議在保證核酸提取質(zhì)量的情況下盡量擴(kuò)大總反應(yīng)體系和加樣量，以提高檢測(cè)靈敏度。

提交不同適用機(jī)型基線和閾值循環(huán)數(shù)的確定資料。

不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別詳述，并提交驗(yàn)證資料。

2.11提交攜帶污染研究資料（如適用）。采用合理的檢測(cè)順序?qū)Χ嘟M高濃度陽(yáng)性樣本和陰性樣本交替檢測(cè)評(píng)估攜帶污染。

3.穩(wěn)定性研究資料

申報(bào)試劑的穩(wěn)定性主要包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性、開(kāi)瓶穩(wěn)定性、機(jī)載穩(wěn)定性（如適用）及凍融次數(shù)限制等研究，注冊(cè)申請(qǐng)人可根據(jù)實(shí)際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實(shí)施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對(duì)于實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的研究資料。對(duì)于開(kāi)瓶穩(wěn)定性研究應(yīng)模擬真實(shí)使用情形，包括開(kāi)瓶穩(wěn)定性的開(kāi)瓶頻次和開(kāi)瓶時(shí)間等。

4.陽(yáng)性判斷值研究資料

陽(yáng)性判斷值確定資料主要指對(duì)申報(bào)產(chǎn)品用于結(jié)果判斷的核酸檢測(cè)的Ct值和/或核酸濃度臨界值進(jìn)行確認(rèn)的資料。包括確定基線、閾值、閾值循環(huán)數(shù)（Ct）、核酸濃度（如適用）等的研究資料等。如判定值存在灰區(qū)，應(yīng)提供灰區(qū)的確認(rèn)資料。

陽(yáng)性判斷值研究樣本來(lái)源應(yīng)為預(yù)期人群，并考慮不同性別、年齡、地域、種族等因素，盡可能考慮樣本來(lái)源的多樣性、代表性，納入申報(bào)產(chǎn)品覆蓋的樣本類型、皮損部位（如適用），盡量納入較多弱陽(yáng)性的樣本。對(duì)HSV-1和HSV-2應(yīng)分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，對(duì)于僅申報(bào)檢測(cè)一種亞型的試劑，注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)納入另一種亞型作為陰性樣本進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。提交陽(yáng)性判斷值研究所用樣本的背景信息列表，至少包括性別、年齡、樣本類型、皮損部位（如適用）、臨床診斷信息、樣本來(lái)源機(jī)構(gòu)、檢測(cè)結(jié)果等信息。如采用其他研究方法，應(yīng)說(shuō)明其合理性。

另外，建議注冊(cè)申請(qǐng)人考慮建立陽(yáng)性判斷值時(shí)使用的受試者樣本對(duì)于目標(biāo)人群的代表性，，通過(guò)臨床評(píng)價(jià)進(jìn)一步驗(yàn)證和確認(rèn)陽(yáng)性判斷值的準(zhǔn)確性。

如果產(chǎn)品適用不同樣本類型，應(yīng)對(duì)各樣本類型進(jìn)行陽(yáng)性判斷值的驗(yàn)證。

提供內(nèi)標(biāo)檢測(cè)結(jié)果范圍的確定方法和研究資料。

5.其他資料

5.1主要原材料研究資料

此類產(chǎn)品的主要原材料包括引物、探針、酶、dNTP、核酸分離/純化組分（如有）、企業(yè)參考品、對(duì)照品、質(zhì)控品等。應(yīng)提供主要原材料的來(lái)源、選擇、制備方法的研究資料，質(zhì)量分析證書(shū)，主要原材料質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定和檢驗(yàn)資料。如主要原材料為企業(yè)自制，應(yīng)提供其詳細(xì)的制備、鑒定和質(zhì)量控制過(guò)程，其制備工藝必須相對(duì)穩(wěn)定；如主要原材料源于外購(gòu)，應(yīng)提供資料包括：選擇該原材料的依據(jù)及對(duì)比篩選試驗(yàn)資料、選定的供應(yīng)商名稱，供應(yīng)商提供的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、原材料檢驗(yàn)報(bào)告（質(zhì)量證書(shū)），以及該原材料到貨后的入廠檢驗(yàn)報(bào)告，供應(yīng)商應(yīng)為原材料的生產(chǎn)商，不得隨意更換。注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)對(duì)各主要原材料均明確質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

5.1.1核酸分離/純化組分（如有）的主要組成、原理介紹及相關(guān)的驗(yàn)證資料。

5.1.2引物和探針

應(yīng)詳述引物和探針的設(shè)計(jì)原則，包括對(duì)包容性和特異性的考慮情況。提供引物、探針核酸序列、模板核酸序列及兩者的對(duì)應(yīng)情況。建議每種病毒設(shè)計(jì)兩套或多套引物、探針以供篩選，針對(duì)所有預(yù)期適用的基因型別進(jìn)行檢出能力和特異性（如交叉反應(yīng)）的評(píng)價(jià)，選擇最佳組合，并提交篩選的研究數(shù)據(jù)。引物、探針的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)至少包括序列準(zhǔn)確性、純度、濃度、探針標(biāo)記的熒光素及功能性試驗(yàn)等。注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)提供驗(yàn)證資料或合成機(jī)構(gòu)出具的質(zhì)檢證明，如PAGE電泳結(jié)果或高效液相色譜法（HPLC）分析圖譜等。

5.1.3脫氧三磷酸核苷（dNTPs）

包括：dATP、dUTP、dGTP、dCTP和dTTP，應(yīng)提交對(duì)其純度、濃度、保存穩(wěn)定性等的驗(yàn)證資料。

5.1.4酶

需要的酶主要包括DNA聚合酶、尿嘧啶DNA糖基化酶（如有）等，應(yīng)分別對(duì)酶活性、功能性等進(jìn)行評(píng)價(jià)和驗(yàn)證。

DNA聚合酶，應(yīng)具有DNA聚合酶活性，無(wú)核酸內(nèi)切酶活性，具熱穩(wěn)定性，如：94℃保溫1小時(shí)后仍保持50%活性。根據(jù)酶的特性明確其外切酶活性。

尿嘧啶DNA糖基化酶（UDG/UNG），具有水解尿嘧啶糖苷鍵的活性，無(wú)核酸外切酶及核酸內(nèi)切酶活性。應(yīng)對(duì)酶活性及熱穩(wěn)定性進(jìn)行合理驗(yàn)證。

5.1.5核酸類檢測(cè)試劑的包裝材料和耗材應(yīng)無(wú)脫氧核糖核酸酶（DNase）和核糖核酸酶（RNase）污染。

5.1.6企業(yè)參考品：

如適用，應(yīng)提交企業(yè)參考品的原料來(lái)源、組成、選擇、制備、毒株特性(如名稱、型別)、陰/陽(yáng)性及濃度/滴度確認(rèn)方法或試劑等相關(guān)驗(yàn)證資料（溯源及定值資料等信息）。企業(yè)參考品的核酸性質(zhì)應(yīng)與產(chǎn)品預(yù)期檢測(cè)的靶物質(zhì)一致。企業(yè)參考品的基質(zhì)與臨床樣本收集/保存介質(zhì)一致。建議采用病毒株、臨床分離培養(yǎng)物、臨床樣本建立參考品，不宜使用質(zhì)粒、假病毒、基因組提取/純化物等。

企業(yè)參考品的項(xiàng)目應(yīng)包括：陽(yáng)性參考品、陰性參考品、最低檢測(cè)限參考品、精密度參考品等。

陽(yáng)性參考品的設(shè)置應(yīng)著重考慮檢出能力的驗(yàn)證，建議采用多個(gè)不同病例來(lái)源的HSV陽(yáng)性樣本進(jìn)行制備，并設(shè)置不同滴度水平。無(wú)論試劑盒能否進(jìn)行HSV分型，陽(yáng)性參考品均應(yīng)針對(duì)所有適用的HSV分型分別設(shè)置。

陰性參考品應(yīng)考慮分析特異性的評(píng)價(jià)，應(yīng)納入正常臨床樣本、含干擾因素的樣本、不在試劑盒檢測(cè)范圍內(nèi)的HSV分型樣本、易引發(fā)相似癥狀的、易共感染的其他病原體陽(yáng)性樣品。

最低檢測(cè)限參考品：注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)明確檢測(cè)限參考品中病毒核酸濃度的確定方法，明確檢測(cè)限參考品中病毒核酸濃度的確定依據(jù)，檢測(cè)限參考品中HSV核酸濃度應(yīng)為申報(bào)產(chǎn)品檢測(cè)限濃度或略高于檢測(cè)限濃度。

精密度參考品應(yīng)至少包含兩個(gè)濃度水平，其中包含弱陽(yáng)性水平。

5.1.7內(nèi)對(duì)照（內(nèi)標(biāo)）、質(zhì)控品

內(nèi)對(duì)照（內(nèi)標(biāo)）設(shè)置應(yīng)合理，陰/陽(yáng)性質(zhì)控品宜采用混合臨床樣本或病毒株或假病毒制備。

內(nèi)標(biāo)以對(duì)管內(nèi)抑制可能造成的假陰性結(jié)果進(jìn)行質(zhì)控。注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)對(duì)內(nèi)標(biāo)的引物、探針和模板的濃度做精確驗(yàn)證，保證內(nèi)標(biāo)熒光通道呈明顯的陽(yáng)性曲線，不應(yīng)對(duì)目的基因的檢測(cè)造成競(jìng)爭(zhēng)性抑制而導(dǎo)致假陰性，對(duì)內(nèi)標(biāo)的Ct應(yīng)有明確的范圍要求。

陰/陽(yáng)性質(zhì)控品應(yīng)參與樣本核酸的平行提取，以對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)過(guò)程、試劑/設(shè)備、交叉污染等環(huán)節(jié)進(jìn)行合理質(zhì)量控制。注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)對(duì)各種質(zhì)控品的Ct做出明確的范圍要求。

5.2生產(chǎn)工藝研究資料

介紹產(chǎn)品主要生產(chǎn)工藝，明確關(guān)鍵質(zhì)量控制點(diǎn)，可用流程圖結(jié)合文字的方式表述，提交主要生產(chǎn)工藝的確定及優(yōu)化研究資料。

（四）臨床試驗(yàn)

臨床試驗(yàn)的開(kāi)展、方案的制定以及報(bào)告的撰寫(xiě)等均應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)及《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求。下面僅說(shuō)明該類產(chǎn)品臨床試驗(yàn)中應(yīng)關(guān)注的重點(diǎn)問(wèn)題。

1.研究方法

對(duì)于已有同類產(chǎn)品上市的試劑的臨床研究，選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市、臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為對(duì)比試劑，采用試驗(yàn)體外診斷試劑與之進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)研究，評(píng)價(jià)本產(chǎn)品的臨床性能。

2.適用人群

臨床試驗(yàn)受試者應(yīng)包括各種可能有單純皰疹病毒感染的人群，具有單純皰疹病毒感染疑似癥狀的患者，如生殖器皰疹、丘皰疹、疼痛性丘疹等。男性和女性受試者應(yīng)盡量均勻分布。

3.臨床試驗(yàn)病例數(shù)

適當(dāng)?shù)臉颖玖渴潜ＷC試驗(yàn)體外診斷試劑臨床性能得到準(zhǔn)確評(píng)價(jià)的必要條件。臨床試驗(yàn)樣本量應(yīng)滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)要求，可采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行估算。根據(jù)相應(yīng)臨床試驗(yàn)設(shè)計(jì)，可選擇陰性符合率/特異度和陽(yáng)性符合率/靈敏度，分別估算最低陰性樣本例數(shù)和陽(yáng)性樣本例數(shù)。

對(duì)于泌尿生殖道拭子（如女性宮頸拭子或陰道拭子、男性尿道拭子），如臨床試驗(yàn)采用試驗(yàn)體外診斷試劑與已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行比對(duì)的試驗(yàn)設(shè)計(jì)，可采用單組目標(biāo)值法樣本量公式估算最低樣本量。

公式中，n為樣本量；Z1-α/2、Z1-β為顯著性水平和把握度的標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布的分位數(shù)，P0為評(píng)價(jià)指標(biāo)的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)，PT為試驗(yàn)體外診斷試劑評(píng)價(jià)指標(biāo)預(yù)期值。

基于現(xiàn)有認(rèn)知，評(píng)價(jià)指標(biāo)的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)（P0）即HSV-1/HSV-2核酸試劑陽(yáng)性符合率和陰性符合率原則上建議不低于95%。當(dāng)評(píng)價(jià)指標(biāo)P接近100%時(shí)，上述樣本量估算方法可能不適用，應(yīng)考慮選擇更加適宜的方法進(jìn)行樣本量估算，如精確概率法等。如臨床試驗(yàn)研究有更合理的樣本量估算方式，在說(shuō)明其合理性后亦可采用。

樣本量估算過(guò)程中需要考慮臨床試驗(yàn)中病例的脫落剔除率，一般而言，病例脫落剔除率不應(yīng)高于10%。此外，臨床試驗(yàn)應(yīng)納入一定數(shù)量的弱陽(yáng)性樣本。

對(duì)于生殖器皰疹皮膚黏膜皮損標(biāo)本（如潰瘍面滲液拭子，皰液），臨床試驗(yàn)樣本量應(yīng)采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行估算，并詳細(xì)描述所使用統(tǒng)計(jì)方法及各個(gè)參數(shù)的確定依據(jù)。  

如申報(bào)產(chǎn)品具有多種適用的樣本類型，不同樣本類型之間存在較大差異，例如：分析性能不同、臨床性能不同、適用人群不同、適應(yīng)證不同、陽(yáng)性判斷值不同等，則可能需要分別進(jìn)行臨床試驗(yàn)設(shè)計(jì)，包括分別進(jìn)行樣本量估算和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

如申請(qǐng)產(chǎn)品適用于腦炎/腦膜炎等其他相關(guān)適應(yīng)證，應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品預(yù)期用途，綜合考慮產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行科學(xué)的臨床試驗(yàn)設(shè)計(jì)。

4.臨床研究單位的選擇

應(yīng)選擇不少于3家（含3家）臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)，按照相關(guān)法規(guī)、指導(dǎo)原則的要求開(kāi)展臨床試驗(yàn)。臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的選擇應(yīng)盡量考慮試驗(yàn)體外診斷試劑的特點(diǎn)和預(yù)期用途，綜合流行病學(xué)背景，受試者的選擇具有一定的地域代表性。且臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)具有分子生物學(xué)方法檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)，試驗(yàn)操作人員應(yīng)有足夠的時(shí)間熟悉檢測(cè)系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)，熟悉評(píng)價(jià)方案。

5.臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計(jì)方法對(duì)臨床試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，對(duì)于試驗(yàn)體外診斷試劑與對(duì)比試劑/方法的一致性評(píng)價(jià)，一般選擇2×2表的形式總結(jié)兩種試劑/方法的檢測(cè)結(jié)果，并據(jù)此計(jì)算陽(yáng)性符合率/靈敏度、陰性符合率/特異度、總符合率、Kappa值等指標(biāo)及其置信區(qū)間。

對(duì)于不一致樣本，應(yīng)進(jìn)行原因分析。如臨床試驗(yàn)方案規(guī)定采用其他方法進(jìn)行確認(rèn)，則確認(rèn)結(jié)果不應(yīng)納入統(tǒng)計(jì)分析。

6.倫理學(xué)要求

臨床試驗(yàn)必須符合赫爾辛基宣言的倫理學(xué)準(zhǔn)則，必須獲得臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)倫理委員會(huì)的同意。研究者應(yīng)充分考慮臨床試驗(yàn)用樣本的獲得和試驗(yàn)結(jié)果對(duì)受試者的風(fēng)險(xiǎn)性，應(yīng)提交倫理委員會(huì)的審查意見(jiàn)。

7.質(zhì)量控制

臨床試驗(yàn)開(kāi)始前，建議進(jìn)行臨床試驗(yàn)的培訓(xùn)，以熟悉并掌握相關(guān)試驗(yàn)方法的操作、儀器、技術(shù)性能等，最大限度控制試驗(yàn)誤差。整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。

8.臨床試驗(yàn)方案

體外診斷試劑臨床試驗(yàn)應(yīng)按照同一臨床試驗(yàn)方案在多家臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)開(kāi)展，且保證在整個(gè)臨床試驗(yàn)過(guò)程中遵循預(yù)定的方案，不可隨意改動(dòng)。整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程應(yīng)在臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)并由該實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員操作完成，申報(bào)單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實(shí)驗(yàn)進(jìn)程。

試驗(yàn)方案應(yīng)確定嚴(yán)格的入選/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已入選的樣本被排除出臨床試驗(yàn)都應(yīng)記錄在案并明確說(shuō)明原因。在試驗(yàn)操作過(guò)程和結(jié)果判定時(shí)，應(yīng)采用盲法以保證試驗(yàn)結(jié)果的客觀性。各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)選用的對(duì)比試劑/方法應(yīng)保持一致，以便進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。另外，應(yīng)考慮試驗(yàn)體外診斷試劑樣本類型與對(duì)比試劑/方法樣本類型的可比性；如有差異，需提供充分的驗(yàn)證。

9.臨床試驗(yàn)報(bào)告

應(yīng)對(duì)試驗(yàn)的整體設(shè)計(jì)及各個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對(duì)整個(gè)臨床試驗(yàn)實(shí)施過(guò)程、結(jié)果分析、結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析方法。

（五）產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)和標(biāo)簽樣稿

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)指導(dǎo)原則》的要求。產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)中技術(shù)內(nèi)容均應(yīng)與注冊(cè)申報(bào)資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，應(yīng)以規(guī)范格式進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)列明文獻(xiàn)的相關(guān)信息。

HSV病毒核酸檢測(cè)及分型試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注以下內(nèi)容。

1.【預(yù)期用途】

1.1試劑盒用于體外定性檢測(cè)XX樣本中的HSV-1和HSV-2 核酸（DNA），如可分型則需明確。適用樣本類型應(yīng)依據(jù)申報(bào)產(chǎn)品的分析性能評(píng)估和臨床研究情況進(jìn)行確認(rèn)。

1.2產(chǎn)品功能：結(jié)合目標(biāo)人群的臨床表現(xiàn)和其他診斷指標(biāo)，可用于生殖器皰疹中單純皰疹病毒感染的輔助診斷。

1.3 臨床背景信息：簡(jiǎn)要描述病原體生物學(xué)特征及致病性，流行病學(xué)特征、感染后臨床表現(xiàn)及相關(guān)疾病等。簡(jiǎn)要介紹HSV相關(guān)的臨床或?qū)嶒?yàn)室診斷方法。

2.【檢驗(yàn)原理】

簡(jiǎn)述核酸提取純化及試劑盒檢測(cè)原理，明確產(chǎn)品能夠檢測(cè)的目標(biāo)基因信息及序列特征，明確內(nèi)標(biāo)基因名稱及其作用，明確引物探針設(shè)計(jì)及探針標(biāo)記熒光信息如采用了防污染措施，進(jìn)行簡(jiǎn)要描述。

3.【主要組成成分】

明確試劑盒中各組分及具體成分，明確需要但未提供的材料，如核酸提取試劑、樣本采集管、拭子、病毒保存液及其他配套使用的材料的產(chǎn)品名稱、生產(chǎn)廠家、貨號(hào)及注冊(cè)證號(hào)或備案號(hào)等信息。

4.【樣本要求】

4.1樣本采集要求：包括樣本采集時(shí)間點(diǎn)的選擇，是否受臨床癥狀、用藥情況等因素的影響等；

4.2樣本采集方法：針對(duì)不同的樣本類型分別詳細(xì)描述樣本采集方法和設(shè)備要求，包括采樣步驟、對(duì)采樣拭子、樣本保存容器和保存液的要求、樣本保存液體積、離心要求等。建議明確經(jīng)驗(yàn)證的配套使用的樣本保存容器、采樣拭子和保存液的信息。如有臨床公認(rèn)推薦的采樣要求，應(yīng)遵循，并引用相應(yīng)的技術(shù)規(guī)范或指南。

4.3樣本處理、運(yùn)送及保存：根據(jù)研究資料，明確對(duì)樣本核酸提取前的預(yù)處理、運(yùn)送條件、保存條件及期限等信息。根據(jù)適用的情形，針對(duì)采樣后放入保存液前的干燥拭子、加入樣本保存液后核酸提取前、核酸提取后樣本等不同階段的處理方式、保存穩(wěn)定性及運(yùn)送條件等。如聲稱樣本可冷凍，需明確凍融次數(shù)。

5.【檢驗(yàn)方法】

詳細(xì)說(shuō)明試驗(yàn)操作的各個(gè)步驟。

明確核酸提取用的樣本體積、洗脫體積和PCR加樣體積，陰陽(yáng)性質(zhì)控品與待測(cè)樣本同步進(jìn)行核酸提取操作。明確各適用機(jī)型的反應(yīng)參數(shù)設(shè)置，基線、循環(huán)閾值（Ct值）的選擇方法，以及各檢測(cè)靶標(biāo)對(duì)應(yīng)的熒光通道。明確內(nèi)標(biāo)、質(zhì)控的檢測(cè)結(jié)果Ct值范圍。

6.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

結(jié)合陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照、內(nèi)對(duì)照（內(nèi)標(biāo)）以及目標(biāo)基因的檢測(cè)結(jié)果，通過(guò)擴(kuò)增曲線和Ct值進(jìn)行陰陽(yáng)性的判斷，詳述所有可能出現(xiàn)的結(jié)果組合及相應(yīng)的解釋Ct。如存在灰區(qū)，應(yīng)同時(shí)說(shuō)明對(duì)灰區(qū)的處理方式，包括在何種情況下需要進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)，重復(fù)檢測(cè)的方法，對(duì)樣本可能采取的優(yōu)化條件（如采集要求或采集方法）等。

7.【檢驗(yàn)方法局限性】

7.1本檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考，如需確診病例請(qǐng)結(jié)合臨床癥狀及其他檢測(cè)手段。

本試劑盒的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)結(jié)合患者的癥狀/體征、病史、其他實(shí)驗(yàn)室診斷結(jié)果等情況進(jìn)行綜合分析以及解釋，不得作為患者臨床診治或管理的唯一依據(jù)。

7.2 HSV DNA檢測(cè)陰性不能排除HSV感染。

7.3導(dǎo)致假陰性/假陽(yáng)性結(jié)果的可能性分析：

7.3.1不合理的樣本采集、處理、運(yùn)輸及保存條件，樣本中目標(biāo)物滴度過(guò)低。

7.3.2 HSV病毒核酸目標(biāo)基因序列的變異或其他原因?qū)е碌男蛄懈淖儭?/p>

7.3.3同一患者不同時(shí)間、不同部位或者多次采集樣本會(huì)降低假陰性結(jié)果的可能性。

7.3.4未經(jīng)驗(yàn)證的其他干擾，如內(nèi)源性或外源引入樣本的物質(zhì)。

7.3.5樣本間的交叉污染。

7.3.6未經(jīng)驗(yàn)證的其他交叉反應(yīng)物質(zhì)。

8.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】詳述以下性能指標(biāo)：

描述產(chǎn)品性能，包括以下內(nèi)容：

8.1 國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（如有）和企業(yè)參考品的符合率。

8.2 檢出限：說(shuō)明不同類型樣本的最低檢測(cè)限，簡(jiǎn)要介紹最低檢出限的確定方法以及驗(yàn)證最低檢出限所采用的菌株分型。如HSV-1和HSV-2最低檢測(cè)限不同，應(yīng)分別列出。

8.3精密度：說(shuō)明不同類型樣本的重復(fù)性和重現(xiàn)性評(píng)價(jià)結(jié)果。

8.4分析特異性：包括交叉反應(yīng)和干擾物質(zhì)。

8.4.1可能產(chǎn)生交叉反應(yīng)的其他病原體的驗(yàn)證情況，建議以列表的方式描述病原體名稱、型別、濃度等信息。

8.4.2樣本中常見(jiàn)干擾物質(zhì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，應(yīng)注明可接受的最高限值。

8.5臨床試驗(yàn)：簡(jiǎn)要介紹試驗(yàn)方法、受試者及樣本、試驗(yàn)結(jié)果和結(jié)論等。

9.【注意事項(xiàng)】應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

9.1如產(chǎn)品含有人源或動(dòng)物源性物質(zhì)，應(yīng)提供具有潛在傳染性的警示性信息。

9.2臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)嚴(yán)格遵守《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理辦法》等臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的管理規(guī)范。核酸擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)應(yīng)由經(jīng)過(guò)專業(yè)培訓(xùn)的實(shí)驗(yàn)室人員嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行。

9.3強(qiáng)調(diào)產(chǎn)品性能僅針對(duì)聲稱的適用樣本類型及【樣本要求】項(xiàng)下說(shuō)明的樣本采集和處理方法（包括采樣拭子、樣本采集液等）進(jìn)行了驗(yàn)證，其他樣本類型或樣本采集、處理方法不能保證產(chǎn)品性能。

三、參考文獻(xiàn)

[1]國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局.體外診斷試劑注冊(cè)與備案管理辦法: 國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局令第48號(hào)[Z].

[2]國(guó)家藥品監(jiān)督管理局.關(guān)于公布體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告:國(guó)家藥品監(jiān)督管理局2021年第122號(hào)[Z].

[3] 國(guó)家藥監(jiān)局 國(guó)家衛(wèi)生健康委. 醫(yī)療器械臨床試驗(yàn)質(zhì)量管理規(guī)范: 國(guó)家藥監(jiān)局 國(guó)家衛(wèi)生健康委2022年第28號(hào)[Z].

[4]國(guó)家藥品監(jiān)督管理局.關(guān)于發(fā)布《醫(yī)療器械注冊(cè)自檢管理規(guī)定》的公告:國(guó)家藥品監(jiān)督管理局2021年第126號(hào)[Z].

[5]國(guó)家藥品監(jiān)督管理局. 體外診斷試劑分類規(guī)則:國(guó)家藥品監(jiān)督管理局2021年第129號(hào)[Z].

[6]國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局.體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)指導(dǎo)原則.國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第17號(hào)[Z].

[7]國(guó)家藥品監(jiān)督管理局.體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則：國(guó)家藥品監(jiān)督管理局2021年第72號(hào)[Z].

[8]國(guó)家藥品監(jiān)督管理局.醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫(xiě)指導(dǎo)原則：國(guó)家藥品監(jiān)督管理局2022年第8號(hào)[Z]. 

[9]國(guó)家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評(píng)中心.定性檢測(cè)體外診斷試劑分析性能評(píng)估注冊(cè)審查指導(dǎo)原則：國(guó)家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評(píng)中心2022年第36號(hào)[Z].

[10]WS/T 236-2017，生殖器皰疹診斷[S].

[11]李金明，《實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)》，第2版，科學(xué)出版社，2016[M].

[12]WHO. Laboratory diagnosis of sexually transmitted infections, including human immunodeficiency virus.2013 [Z].

[13]WHO. Guidelines for the treatment of Genital Herpes Simplex Virus. 2021[Z].

[14]WHO. Guidelines for The Management of Symptomatic Sexually Transmitted Infections, 2021 [Z].

[15]CDC. Sexually Transmitted Infections Treatment Guidelines, 2021 [Z].