附件：病原體特異性M型免疫球蛋白定性檢測試劑注冊審查指導(dǎo)原則（2023年修訂版）（2024年第1號）.doc

病原體特異性M型免疫球蛋白定性檢測試劑注冊審查指導(dǎo)原則（2023年修訂版）

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對病原體特異性M型免疫球蛋白（Immunoglobulin M，IgM）定性檢測試劑注冊申報資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門對注冊申報資料的技術(shù)審評提供參考。

本指導(dǎo)原則是對病原體特異性IgM抗體定性檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進行充實和細化。

本指導(dǎo)原則是對申請人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細的研究資料和驗證資料，相關(guān)人員應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進行調(diào)整。

一、適用范圍

在病原體感染的初次體液免疫應(yīng)答中(原發(fā)性感染)，特異性IgM抗體首先出現(xiàn)，但其普遍反應(yīng)短暫，一般幾周后即不易再測到。病原體特異性IgM抗體陽性常提示早期感染，可用于感染急性期的輔助判斷。人血液樣本中病原體特異性IgM抗體的定性檢測，對某些傳染病如甲型肝炎、乙型肝炎、弓形蟲、風(fēng)疹病毒、巨細胞病毒及單純皰疹病毒（TORCH）類病原體感染等有較高的臨床參考價值。

病原體特異性IgM抗體定性檢測試劑是指利用酶聯(lián)免疫吸附法、化學(xué)發(fā)光法等基于抗原抗體反應(yīng)原理，以特定病原體的特異性IgM抗體為檢測目標(biāo)，對人血清或血漿等樣本中病原體特異性IgM抗體進行體外定性檢測的試劑。本指導(dǎo)原則適用于進行注冊申請和變更注冊的情形。

二、注冊審查要點

（一）監(jiān)管信息

1.產(chǎn)品名稱及分類編碼

產(chǎn)品名稱應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》及相關(guān)法規(guī)的要求，如甲型肝炎病毒IgM抗體檢測試劑盒（化學(xué)發(fā)光法）。根據(jù)《體外診斷試劑分類規(guī)則》，該產(chǎn)品按照第三類體外診斷試劑管理，分類編碼為6840。

2.其他信息還包括產(chǎn)品列表、關(guān)聯(lián)文件、申報前與監(jiān)管機構(gòu)的聯(lián)系情況和溝通記錄以及符合性聲明等文件。

（二）綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品臨床適用證背景情況、預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、研究結(jié)果的總結(jié)評價以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容，其中同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應(yīng)著重從方法學(xué)及臨床適用范圍等方面寫明擬申報產(chǎn)品與目前市場上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。

建議申請人對以下幾方面內(nèi)容進行著重介紹：

1.特定病原體的生物學(xué)特性、結(jié)構(gòu)與功能、感染過程、潛伏期、特異性IgM抗體產(chǎn)生及可持續(xù)存在時間、病理背景等。

2.特定病原體感染相關(guān)的疾病情況、流行病學(xué)以及易患（高危）人群的說明。

3.對申報試劑檢測結(jié)果可能帶來的風(fēng)險進行合理評估，即由申報試劑的假陽性/假陰性結(jié)果導(dǎo)致的對患者臨床診治、孕婦或胎兒的不恰當(dāng)處理、疫苗接種、流行病學(xué)等方面的負(fù)面影響。

4.申報產(chǎn)品的研發(fā)歷程。

（三）非臨床資料

1.產(chǎn)品技術(shù)要求及檢驗報告

注冊申請人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)產(chǎn)品研制、前期評價等結(jié)果，依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)文獻資料，結(jié)合產(chǎn)品特性按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》的要求編寫。該類產(chǎn)品作為第三類體外診斷試劑，應(yīng)當(dāng)以附錄形式明確主要原材料以及生產(chǎn)工藝要求。

病原體特異性IgM抗體檢測試劑的注冊檢測應(yīng)主要包括以下性能指標(biāo)：物理性狀、陽性參考品符合率、陰性參考品符合率、精密度、最低檢測限（分析靈敏度）等。

如有適用的國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，產(chǎn)品技術(shù)要求的相關(guān)要求應(yīng)不低于相應(yīng)的要求。

如該項目已有國家標(biāo)準(zhǔn)品，產(chǎn)品技術(shù)要求中應(yīng)體現(xiàn)國家標(biāo)準(zhǔn)品的相關(guān)要求，并使用國家標(biāo)準(zhǔn)品對三批產(chǎn)品進行檢驗。

2.分析性能研究

申請人應(yīng)提交在符合質(zhì)量管理體系的生產(chǎn)環(huán)境下生產(chǎn)的試劑進行的所有性能評估資料，包括具體研究方法、試驗方案、試驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計分析等詳細資料。有關(guān)分析性能評估的背景信息也應(yīng)在申報資料中進行描述，包括試驗地點，采用的試劑名稱、規(guī)格和批號，儀器名稱和型號，樣本類型和來源等。分析性能評估的試驗方法可以參考國際或國內(nèi)有關(guān)體外診斷試劑性能評估的指導(dǎo)原則進行，建議著重對以下分析性能進行研究。

2.1樣本穩(wěn)定性

樣本穩(wěn)定性一般包括樣本各種實際運輸及儲存（常溫、冷藏和冷凍）條件下的保存期限驗證，以確認(rèn)樣本的保存條件及效期（短期、長期）。需要冷凍保存的樣本同時應(yīng)對凍融次數(shù)進行合理驗證。某些用于防腐、冷凍用途或起穩(wěn)定保護作用的添加劑可能會對檢測造成影響，如涉及，請對該添加劑的影響進行合理驗證。若要用于加熱樣本（如熱滅活）的檢測，則應(yīng)對加熱前后的病原體特異性IgM抗體陽性及陰性樣本進行加熱因素的干擾驗證。

2.2適用的樣本類型

如產(chǎn)品適用于血清和血漿，可采用同源比對驗證樣本的可比性。方法為對不少于50例源自同一患者的病原體特異性IgM抗體陰性、弱陽性（略高于臨界值）的血清和血漿樣本進行檢測以驗證申報試劑對于血清和血漿樣本的檢測結(jié)果的一致性。如產(chǎn)品適用于靜脈全血，建議進行最低檢測限和精密度研究，同時進行同源比對試驗。

2.3企業(yè)參考品檢驗

根據(jù)主要原材料研究資料中的企業(yè)參考品設(shè)置情況，采用至少三批產(chǎn)品對企業(yè)參考品進行檢驗并提供詳細的試驗數(shù)據(jù)。

2.4最低檢測限

選取特定濃度/滴度的病原體特異性IgM抗體樣本，做系列稀釋，將檢測結(jié)果的陽性率不低于95%（n≥20）的最大稀釋倍數(shù)作為試劑盒的最低檢測限。選擇與確定樣本不同的多份樣本，采用陰性樣本稀釋到最低檢測限濃度水平進行驗證，應(yīng)不低于95%陽性檢出率。

2.5分析特異性

2.5.1交叉反應(yīng)

用于病原體特異性IgM抗體檢測試劑交叉反應(yīng)驗證主要考慮以下幾方面：

2.5.1.1對抗原結(jié)構(gòu)相近或臨床癥狀相似的其他病原體高水平IgM抗體進行交叉反應(yīng)研究，如乙型肝炎病毒核心抗體（HBc）IgM、甲型肝炎病毒（HAV）IgM、弓形蟲、風(fēng)疹病毒、單純皰疹病毒以及巨細胞病毒IgM抗體等。

2.5.1.2高濃度病原體特異性IgG抗體與特異性IgM抗體的交叉反應(yīng)驗證。

2.5.1.3如果試劑原料采用基因重組抗原，則還需考慮對重組基因?qū)胛⑸锾禺愋钥贵w的交叉反應(yīng)評價。

申請人應(yīng)提交所有用于交叉反應(yīng)驗證的樣本來源、濃度或滴度確認(rèn)等信息。

2.5.2干擾物質(zhì)

應(yīng)根據(jù)所采集樣本類型，選擇適用的干擾物質(zhì)進行研究。建議在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度下，采用病原體特異性IgM抗體陰性、弱陽性（略高于臨界值）的臨床或模擬添加樣本分別進行干擾試驗驗證。應(yīng)說明樣本的制備方法及干擾試驗的評價標(biāo)準(zhǔn)。

2.5.2.1內(nèi)源性干擾

對樣本中常見的內(nèi)源性干擾物質(zhì)進行檢測，如溶血、高脂、黃疸、類風(fēng)濕因子（RF）、抗核抗體（ANA）、抗線粒體抗體（AMA）、高濃度非特異性IgG和IgM抗體等進行干擾研究。

2.5.2.2常見治療性藥物

對不同種類的抗菌藥物、干擾素、常見的抗病毒藥物、癥狀相關(guān)其他經(jīng)驗性藥物等進行干擾研究。

2.5.2.3抗凝劑的干擾

如果試劑盒適用樣本類型包括血漿和/或靜脈全血樣本，應(yīng)采用各種適用抗凝劑抗凝的血漿和/或靜脈全血樣本分別與血清樣本進行對比試驗研究。

2.5.2.4對至少5份含有病原體特異性IgM抗體的樣本進行IgM破壞試驗研究，方法為采用特定的化學(xué)制劑（如2－巰基乙醇或二硫蘇糖醇）處理樣本后，重新進行檢測，IgM檢測結(jié)果應(yīng)為陰性。

2.6精密度

申請人應(yīng)對每項精密度指標(biāo)的評價標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求，如標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)的范圍等，針對本類產(chǎn)品的精密度評價主要包括以下要求。

2.6.1對可能影響檢測精密度的主要變量進行驗證，除申報試劑本身外，還應(yīng)對運行、時間、操作者、儀器、試劑批次和地點等影響檢測精密度的主要變量進行相關(guān)的驗證。

2.6.2設(shè)定合理的精密度評價周期。

2.6.3用于精密度評價的臨床樣本應(yīng)至少包括三個水平:

2.6.3.1陰性樣本：待測物濃度為零，陰性符合率應(yīng)為100%（n≥20）。

2.6.3.2弱陽性樣本：待測物濃度略高于試劑的最低檢測限，陽性符合率應(yīng)不低于95%（n≥20）。

2.6.3.3中/強陽性樣本：待測物濃度呈中到強陽性，陽性符合率為100%，且CV≤15%（n≥20）（如適用）。

2.7鉤狀（HOOK）效應(yīng)（如適用）

須采用高滴度的病原體特異性IgM抗體的樣本進行梯度稀釋后由低濃度至高濃度開始檢測，每個梯度的稀釋液重復(fù)3～5份，對鉤狀效應(yīng)進行合理的驗證。

2.8包容性

應(yīng)選擇來源于不同時間、不同地域的多份臨床確診且經(jīng)合理方法確定的病原體特異性IgM抗體弱陽性的患者樣本進行研究。

2.9其他需注意問題

對于使用儀器進行結(jié)果判讀的產(chǎn)品，應(yīng)提供產(chǎn)品說明書【適用機型】項中所有型號儀器的性能評估資料。

2.10反應(yīng)體系

2.10.1反應(yīng)條件確定

申請人應(yīng)考慮反應(yīng)時間、反應(yīng)溫度、洗滌次數(shù)（如涉及）等條件對產(chǎn)品性能的影響，通過試驗確定上述條件的最佳組合。

2.10.2反應(yīng)體系中樣品加樣方式及加樣量確定

申請人應(yīng)考慮樣品加樣方式、加樣量對產(chǎn)品檢測結(jié)果的影響，通過試驗確定最佳的加樣方式及加樣量。如樣本需采取稀釋或其他必要的方法進行處理后方可用于最終檢測，申請人還應(yīng)對可用于樣本稀釋的基質(zhì)或處理方法進行研究，通過試驗確定最終選擇的用于樣本稀釋的基質(zhì)或處理方法。

采用間接法的試劑，建議考慮高濃度特異性IgG對結(jié)果的影響，合理設(shè)置IgG去除相關(guān)樣本處理步驟（例如采用含有IgG吸附劑的樣本稀釋液等），或者詳述產(chǎn)品設(shè)計中關(guān)于避免IgG影響IgM檢測結(jié)果的合理措施，盡量減少特異性IgG對IgM檢測造成的假陰性和假陽性。對至少10份臨界值附近的病原體特異性IgM抗體弱陽性并含有多水平病原體特異性IgG抗體的樣本進行檢測，比較去除總IgG前后的結(jié)果，驗證IgG吸附劑消除干擾的效果，以上試驗可以采用人工制備的樣本進行。

3.穩(wěn)定性研究

穩(wěn)定性研究主要包括實時穩(wěn)定性、使用穩(wěn)定性及運輸穩(wěn)定性等研究，申請人可根據(jù)實際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實施方案、詳細的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對于實時穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

4.陽性判斷值研究

應(yīng)提交對申報試劑陰性/灰區(qū)/陽性等結(jié)果判斷的陽性判斷值確定的試驗研究資料，應(yīng)包括具體的試驗方案、評價標(biāo)準(zhǔn)、統(tǒng)計學(xué)分析、研究數(shù)據(jù)等研究資料。如適用，建議采用受試者工作特征曲線（ROC）的分析方式來選擇確定合理的陽性判斷值，如試驗結(jié)果分析存在灰區(qū)，則應(yīng)明確灰區(qū)建立的基礎(chǔ)。建立陽性判斷值的樣本來源選擇應(yīng)考慮到地域性、年齡、不同生理狀態(tài)等因素的影響，并明確陽性判斷值在不同的樣本類型是否有差異。應(yīng)搜集采用分布均勻的真實樣本對所確定的陽性判斷值進行驗證。注意，陽性判斷值的驗證樣本不應(yīng)與陽性判斷值的確定樣本以及臨床試驗樣本重復(fù)。

5.其他資料

5.1主要原材料研究資料

5.1.1試劑盒所用病原體抗原

應(yīng)注重抗原表位的選擇，原材料研究資料中應(yīng)將此方面的考慮進行詳述。詳細描述抗原的名稱，天然/重組表達信息及選擇該抗原的依據(jù)。提交抗原來源、供應(yīng)商選擇、制備、純化、鑒定、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（外觀、蛋白濃度、純度、分子量、功能性試驗等）及檢驗等詳細試驗資料。

（1）企業(yè)自制抗原

如為天然抗原，則應(yīng)對病原體毒株選擇、病原體培養(yǎng)、抗原提取及純化、鑒定等試驗過程予以詳述；如為重組抗原，則應(yīng)提交有關(guān)特定基因選擇、基因序列、基因克隆、抗原表達及抗原純化鑒定等詳細內(nèi)容，并對基因克隆的整個過程進行詳述，如特定脫氧核糖核酸（DNA）分子的體外處理、重組連接、導(dǎo)入宿主細胞、宿主細胞繁殖以及重組子表達等試驗過程。

（2）企業(yè)外購抗原，則應(yīng)詳述抗原的名稱及生物學(xué)來源，供應(yīng)商名稱，提交供應(yīng)商出具的抗原性能指標(biāo)及檢驗證書，詳述申請人對該抗原技術(shù)指標(biāo)的要求以及申請人確定該抗原作為主要原材料的依據(jù)。供應(yīng)商應(yīng)相對固定，不得隨意更換。

5.1.2試劑盒所用病原體抗體

詳述抗體的選擇過程，提交抗體生物學(xué)來源、免疫原及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（外觀、蛋白濃度、純度、分子量、效價、功能性試驗等）等詳細試驗資料。

（1）企業(yè)自制抗體

如使用天然抗原作為免疫原則應(yīng)明確該天然抗原的來源；如使用重組抗原或其他人工合成抗原作為免疫原，應(yīng)提供相應(yīng)的核酸組分及重組抗原的序列信息。申請人對所選抗體的技術(shù)指標(biāo)要求，確定該抗體作為主要原材料的依據(jù)。

（2）企業(yè)外購抗體

應(yīng)詳述抗體的名稱及生物學(xué)來源，供應(yīng)商名稱，提交供應(yīng)商出具的抗體性能指標(biāo)及檢驗證書，詳述申請人對該抗體技術(shù)指標(biāo)的要求以及申請人確定該抗體作為主要原材料的依據(jù)。供應(yīng)商應(yīng)相對固定，不得隨意更換。

5.1.3其他主要原材料

除上述主要原材料外，產(chǎn)品中包含的其他原材料，如固相載體、硝酸纖維素膜、反應(yīng)緩沖液等，該類原材料一般均為外購，應(yīng)詳述每一原材料的供應(yīng)商名稱，提交供應(yīng)商出具的每一原材料性能指標(biāo)及檢驗證書，詳述申請人對每一原材料技術(shù)指標(biāo)的要求以及申請人確定該原材料作為主要原材料的依據(jù)。免疫層析方法學(xué)的產(chǎn)品如適用于全血，應(yīng)介紹血細胞去除方式及相關(guān)原材料，并驗證去除效果。

5.1.4企業(yè)參考品

應(yīng)提供企業(yè)參考品的原料選擇、制備、陰陽性及濃度/滴度確認(rèn)等相關(guān)的驗證資料，提供對參考品性質(zhì)確認(rèn)的方法或試劑（建議采用國內(nèi)已上市的、臨床上普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類試劑）的相關(guān)信息。

如申報產(chǎn)品有相應(yīng)的國家參考品，則企業(yè)參考品應(yīng)參考國家參考品的項目設(shè)置。在不低于國家參考品要求的前提下，申請人可以結(jié)合實際情況設(shè)置合理的企業(yè)參考品。對于沒有國家參考品的產(chǎn)品，申請人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品性能驗證的實際情況自行設(shè)定企業(yè)參考品，陽性參考品應(yīng)著重考慮抗體滴度要求，陰性參考品則主要涉及對分析特異性（交叉反應(yīng)）的驗證情況。

5.2生產(chǎn)工藝研究資料

5.2.1主要生產(chǎn)工藝介紹，可用流程圖方式表示，并簡要說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。

5.2.2產(chǎn)品基本反應(yīng)原理介紹。

5.2.3包被工藝研究，申請人應(yīng)考慮如包被液量、濃度、時間等指標(biāo)對產(chǎn)品性能的影響，通過試驗確定上述指標(biāo)的最佳組合。

5.2.4顯色（發(fā)光）系統(tǒng)、酶作用底物等的介紹及最適條件研究。

（四）臨床試驗資料

臨床試驗的開展、方案的制定以及報告的撰寫等均應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)及《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求，如相關(guān)法規(guī)、文件有更新，臨床試驗應(yīng)符合更新后的要求。

1.臨床試驗方法

1.1對于有已上市同類產(chǎn)品的試驗體外診斷試劑，采用試驗體外診斷試劑與已上市同類產(chǎn)品（對比試劑）進行比較研究，評價兩種方法檢測結(jié)果的一致性，評價指標(biāo)通常包括陽性符合率、陰性符合率等。對比試劑在預(yù)期用途、適用人群、樣本類型、檢測方法學(xué)、檢測性能等方面應(yīng)與試驗體外診斷試劑具有較好的可比性。

1.2對于尚無已上市同類產(chǎn)品的試驗體外診斷試劑，應(yīng)結(jié)合臨床指南等資料，明確IgM檢測的臨床意義。根據(jù)臨床意義，申請人可選擇病原體急性感染檢測的臨床參考標(biāo)準(zhǔn)并結(jié)合臨床診斷進行比較研究。如病原體分離培養(yǎng)鑒定。如果病原體分離培養(yǎng)鑒定的方法不可行也可以采用其他用于感染急性期判斷的方法進行比對研究，例如：病原體IgG抗體的血清學(xué)轉(zhuǎn)換（動態(tài)監(jiān)測2份或以上的血清IgG，恢復(fù)期與急性期比較IgG呈4倍以上升高）、病原體核酸檢測或直接抗原檢測等方法。對于病原體感染急性期的判斷應(yīng)按照臨床指南等資料的描述確定。

還應(yīng)納入一定量的連續(xù)樣本，觀察其轉(zhuǎn)歸情況。

針對不一致的樣本，建議進一步隨訪其IgM的檢測情況并確認(rèn)病例的感染狀態(tài)，綜合臨床其他因素進行分析。

2.受試者選擇及樣本收集

2.1受試者選擇

臨床試驗方案中應(yīng)根據(jù)試驗用體外診斷試劑的預(yù)期用途、目標(biāo)人群和檢測要求等合理確定臨床試驗受試者的選擇要求和樣本收集方法，包括：受試者入組/排除標(biāo)準(zhǔn)等。

根據(jù)產(chǎn)品臨床驗證的目的，入組人群應(yīng)選擇具有特定病原體感染癥狀/體征、相似癥狀或有密切接觸史等疑似特定病原體感染人群作為研究對象。還應(yīng)納入靶病原體之外的其他感染癥狀相似的、易混淆的病原體感染的患者樣本，以從臨床角度考察其特異性。

2.2樣本類型

病原體特異性IgM抗體檢測試劑適用的樣本類型一般包括血清、血漿、靜脈全血。如申報產(chǎn)品所適用的樣本類型同時包含血清、血漿，且臨床前研究證實檢測性能沒有差異（如血清、血漿），則臨床試驗中可匯總統(tǒng)計。

對于靜脈全血樣本類型，建議進行同源比對。

3.臨床試驗機構(gòu)數(shù)量和要求

應(yīng)選擇不少于3家（含3家）已備案的臨床試驗機構(gòu)，按照相關(guān)法規(guī)、指導(dǎo)原則的要求開展臨床試驗。申辦者應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特點及其預(yù)期用途，綜合不同地區(qū)病原體流行情況等因素選擇具有代表性的機構(gòu)開展臨床試驗，包括受試人群的代表性等。

4.臨床評價指標(biāo)

該類產(chǎn)品臨床評價指標(biāo)主要包括試驗用體外診斷試劑與已上市同類產(chǎn)品相比的陽性符合率、陰性符合率等。如試驗用體外診斷試劑與臨床參考方法進行對比研究，其臨床評價標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)包括臨床靈敏度、臨床特異度等。

5.臨床試驗樣本量估算

臨床試驗樣本量應(yīng)滿足統(tǒng)計學(xué)要求，可采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計學(xué)方法進行估算，同時應(yīng)滿足法規(guī)最低樣本量的要求。

臨床試驗采用申報產(chǎn)品與已上市同類產(chǎn)品進行比對的試驗設(shè)計，臨床樣本量的估算建議采用單組目標(biāo)值法進行計算，陰陽性符合率的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)（P0）建議不低于90%。當(dāng)評價指標(biāo)P接近100%時，該樣本量估算方法可能不適用，應(yīng)考慮選擇更加適宜的方法進行樣本量估算和統(tǒng)計學(xué)分析，如精確概率法等。

公式中，n為樣本量；Z1-α/2、Z1-β為顯著性水平和把握度的標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布的分?jǐn)?shù)位，P0為評價指標(biāo)的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)，PT為試驗體外診斷試劑評價指標(biāo)預(yù)期值。

對于無已上市產(chǎn)品的新的試驗體外診斷試劑，靈敏度特異性的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)參照相關(guān)文獻及前期研究結(jié)果設(shè)定合理的指標(biāo)。

臨床試驗總體樣本量確定時應(yīng)在上述陰、陽性樣本最低樣本量估算的基礎(chǔ)上，同時考慮其他可能造成受試者脫落的情況以及可能需要納入的干擾樣本、交叉反應(yīng)樣本等情況適當(dāng)增加入組樣本量。

6.統(tǒng)計分析

臨床試驗統(tǒng)計分析，應(yīng)與臨床試驗?zāi)康囊恢拢缗R床試驗?zāi)康臑轵炞C申報產(chǎn)品與已上市產(chǎn)品的一致性，統(tǒng)計分析一般以2×2四格表的形式總結(jié)兩種分析方法的檢測結(jié)果，并據(jù)此計算陽性符合率、陰性符合率、總符合率、Kappa值等指標(biāo)及其95%置信區(qū)間。

對于采取與臨床參考標(biāo)準(zhǔn)比較的臨床試驗，考慮到對不同樣本類型以及不同人群的檢測結(jié)果可能存在一定差異，故建議根據(jù)產(chǎn)品特點，對不同樣本類型及不同人群分別進行統(tǒng)計分析，以對考核試劑的臨床性能進行綜合分析。

7.倫理學(xué)要求

臨床試驗必須符合赫爾辛基宣言的倫理學(xué)準(zhǔn)則，必須獲得臨床試驗機構(gòu)倫理委員會的同意。研究者應(yīng)充分考慮臨床試驗用樣本的獲得和試驗結(jié)果對受試者的風(fēng)險性，應(yīng)提交倫理委員會的審查意見。

8.質(zhì)量控制

臨床試驗開始前，建議進行臨床試驗的預(yù)試驗，以熟悉并掌握相關(guān)試驗方法的操作、儀器、技術(shù)性能等，最大限度控制試驗誤差。整個試驗過程都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。

9.臨床試驗報告和小結(jié)撰寫

臨床試驗報告和小結(jié)的撰寫應(yīng)參考《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》的相關(guān)要求，應(yīng)該對試驗的整體設(shè)計及各個關(guān)鍵點給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對整個臨床試驗實施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法，最后得出臨床試驗結(jié)論。

（五）產(chǎn)品說明書和標(biāo)簽樣稿

產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。產(chǎn)品說明書的格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求，進口體外診斷試劑的中文說明書除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說明書的一致性，翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達習(xí)慣。產(chǎn)品說明書的所有內(nèi)容均應(yīng)與申請人提交的注冊申報資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻，則應(yīng)以規(guī)范格式對此內(nèi)容進行標(biāo)注，并單獨注明文獻的相關(guān)信息。

結(jié)合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求，病原體特異性IgM抗體定性檢測試劑說明書編寫應(yīng)重點關(guān)注以下內(nèi)容。

1.【預(yù)期用途】應(yīng)至少包括以下幾部分內(nèi)容：

1.1試劑盒用于體外定性檢測人血清和/或血漿和/或靜脈全血樣本中xx的特異性IgM抗體。用于xx感染的輔助診斷。

1.2簡單介紹待測目標(biāo)的特征，如特定病原體的生物學(xué)性狀、潛伏期、易感人群、感染后的臨床表現(xiàn)等臨床背景相關(guān)的信息介紹；適用于對哪些患者人群的檢測，如具有何種癥狀/體征的患者、相關(guān)的密切接觸者、地域要求或年齡限制（如有）等。

1.3病原體特異性IgM抗體的產(chǎn)生、持續(xù)時間、與特異性IgG、病原體核酸等其他檢測指標(biāo)的關(guān)聯(lián)；

1.4與靶抗體檢測相關(guān)的其他臨床或?qū)嶒炇以\斷方法。

2.【主要組成成分】

2.1說明試劑盒包含組分的名稱、數(shù)量、比例或濃度等信息，陰性/陽性對照品可能含有人源組分，應(yīng)提供其生物學(xué)來源。

2.2對檢測中使用的抗原及抗體的信息進行簡單介紹。

2.3試劑盒中不包含但對該項檢測必須的組分，企業(yè)應(yīng)列出相關(guān)試劑/耗材的名稱、注冊證號/備案號（如有）、貨號及其他相關(guān)信息。

3.【儲存條件及有效期】

對試劑盒的效期穩(wěn)定性、開封穩(wěn)定性等信息做詳細介紹。

膠體金試紙條產(chǎn)品應(yīng)對開封后未使用產(chǎn)品允許暴露于空氣中的溫度、濕度及期限等條件予以明確。

4.【樣本要求】 重點明確以下內(nèi)容：

4.1樣本采集前對患者的要求：如采集時間、采集順序等，是否受臨床癥狀、用藥情況等因素的影響。

4.2樣本采集：說明采集方法及樣本類型，如有血漿樣本，應(yīng)注明對抗凝劑的要求。

4.3樣本處理及保存：樣本處理方法、保存條件及期限（短期、長期）、運輸條件等。冷藏/冷凍樣本檢測前是否須恢復(fù)室溫，凍融次數(shù)。經(jīng)熱處理樣本是否可用、對儲存樣本的添加劑要求等。

4.4如果檢測系統(tǒng)含有某種IgG抗體的去除技術(shù)（IgG吸附劑），如抗人IgG抗體等，則應(yīng)包括IgG吸附劑使用相關(guān)的注意事項。例如：經(jīng)IgG吸附劑處理的樣本不能用于 IgG類抗體的檢測；在檢測IgM類抗體的同時，檢測處理過的混合物中的IgG類抗體，以證實對IgG、類風(fēng)濕因子（RF）等去除的有效性等。

5.【檢驗方法】 詳細說明試驗操作的各個步驟：

5.1試驗環(huán)境：溫、濕度條件，檢測試劑及樣本的復(fù)溫要求及相關(guān)注意事項。例如：凍存樣本在復(fù)融后應(yīng)經(jīng)過充分的混勻再行檢測。

5.2試劑配制方法、注意事項，試劑開封后使用方法及注意事項等。

5.3試驗條件：操作步驟、溫度、時間、儀器波長等以及試驗過程中的注意事項。不同型號產(chǎn)品，加樣方法如有差異，建議分別以圖示方式描述清楚。

6.【檢驗結(jié)果的解釋】

結(jié)果判斷或計算：詳細描述對檢測結(jié)果的判定或計算方法、對質(zhì)控品（對照品）的檢測結(jié)果要求（試驗有效性的判斷）等。如果質(zhì)控品和病人樣本的使用方法不同，生產(chǎn)商應(yīng)注明必要的指導(dǎo)和解釋。建議在質(zhì)控品（對照品）結(jié)果解釋環(huán)節(jié)注明以下字樣：“如果質(zhì)控結(jié)果與預(yù)期不符，實驗室不應(yīng)出具檢測報告。”

7.【檢驗方法局限性】

綜合產(chǎn)品的預(yù)期用途、臨床背景、檢測方法及適用范圍等信息，對可能出現(xiàn)的局限性進行相關(guān)說明，主要包括以下描述，請申請人選擇適用的條款在產(chǎn)品說明書中予以闡述。

7.1本產(chǎn)品檢測結(jié)果僅供臨床參考，不應(yīng)作為臨床診治的唯一依據(jù)，對患者的臨床管理應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其他實驗室檢查（尤其是病原學(xué)檢測）、治療反應(yīng)及流行病學(xué)等信息綜合考慮。

7.2感染初期，病原體特異性IgM抗體未產(chǎn)生或滴度很低會導(dǎo)致陰性結(jié)果，如懷疑有病原體感染，應(yīng)提示患者在7－14天內(nèi)復(fù)查，抽取第二份樣本，并和第一份樣本在同條件下同時檢測，以確定是否有初次感染的血清轉(zhuǎn)化或病原體特異IgM或IgG抗體滴度明顯升高。

7.3高滴度病原體特異性IgG抗體會與特異性IgM抗體競爭抗原結(jié)合部位，會使檢測的敏感性降低，IgM結(jié)果可能會出現(xiàn)假性低值或陰性結(jié)果。尤其是懷疑先天性病原體感染的新生兒樣本，他們的血清中可能含有母親來源的高水平病原體特異的IgG抗體和胎兒產(chǎn)生的相對低水平的病原體特異IgM抗體，因此，對于該類樣本的陰性結(jié)果應(yīng)慎重分析。

7.4由于臍帶血中可能含有源于母體的病原體特異性IgM抗體（胎盤滲漏），因此，最好在出生后5天內(nèi)再對嬰兒的后續(xù)樣本進行檢測，以證實臍帶血樣本病原體特異性IgM抗體的陽性結(jié)果。建議將新生兒與母親的血清樣本平行進行測試，如果是胎兒的先天性感染,其IgM抗體水平(以及IgG抗體水平) 會持續(xù)存在或呈上升趨勢, 反之,如果抗體來源于母體，則在在平行試驗中嬰兒的抗體水平會逐漸下降或消失。

7.5由于孕婦的實驗室檢查不能可靠地鑒定胎兒患病的風(fēng)險，故不建議采用本試劑對無癥狀的母體感染進行篩查，不得將本試劑的檢測結(jié)果單獨作為終止妊娠的依據(jù)。

7.6免疫功能受損或接受免疫抑制治療的患者，如人類免疫缺陷病毒（HIV）感染患者或器官移植后接受免疫抑制治療的患者，其血清學(xué)IgM抗體檢測的參考價值有限，可能會導(dǎo)致錯誤的醫(yī)學(xué)解釋。

7.7在近幾個月內(nèi)接受過輸血或其他血液制品治療的人群，對其陽性檢測結(jié)果的分析應(yīng)慎重。

7.8病原體特異性IgM抗體不僅出現(xiàn)于初次感染，當(dāng)二次感染和復(fù)發(fā)感染時也可能出現(xiàn)。

7.9當(dāng)疾病的流行程度降低時陽性預(yù)測值降低，對低危人群陽性結(jié)果的解釋應(yīng)當(dāng)謹(jǐn)慎。建議對申報試劑臨床研究中的病例人群特征進行說明，并對適用人群的性別、年齡、地域等特征進行明示。

8.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】 詳述以下性能指標(biāo)：

8.1最低檢測限：說明試劑的最低檢測限，簡單介紹最低檢測限的確定方法。

8.2企業(yè)陽性/陰性參考品符合率。

8.3精密度：精密度參考品的組分、濃度及評價標(biāo)準(zhǔn)。

8.4分析特異性

8.4.1交叉反應(yīng)：對易產(chǎn)生交叉反應(yīng)的其他病原體的高水平IgM抗體、特異性IgG抗體等的驗證情況。

8.4.2干擾物質(zhì)：樣本中常見干擾物質(zhì)對檢測結(jié)果的影響，如溶血、高脂、黃疸等干擾因子研究（結(jié)果應(yīng)量化表示，禁用輕度、嚴(yán)重等模糊表述），有關(guān)高濃度總IgM和IgG抗體、自身抗體、類風(fēng)濕因子（RF）、嗜異型性抗體等的干擾驗證。

8.4.3藥物影響：較常見的用于病原體感染治療的外用或內(nèi)服藥物對檢測結(jié)果的影響。

8.5鉤狀（HOOK）效應(yīng)（如適用）：對高濃度特異性IgM抗體的鉤狀效應(yīng)驗證情況。

8.6對比試驗研究（如有）：簡要介紹對比試劑（方法）的信息、所采用的統(tǒng)計學(xué)方法及統(tǒng)計分析結(jié)果。

8.7臨床性能。

9.【注意事項】應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

9.1有關(guān)試劑盒內(nèi)人源組分（如有）生物安全性的警告。

9.2有關(guān)試驗操作、樣本保存及處理等其他注意事項。

三、參考文獻

[1]國家市場監(jiān)督管理總局.《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》：國家市場監(jiān)督管理總局令第48號[Z].

[2]國家藥品監(jiān)督管理局.《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》：國家藥品監(jiān)督管理局通告2021年第122號[Z].

[3]國家藥品監(jiān)督管理局.體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則：國家藥品監(jiān)督管理局通告2021年第72號[Z].

[4]國家藥品監(jiān)督管理局.體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則：國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號[Z].

[5]CDRH FDA. Review Criteria for In Vitro Diagnostic Devices for Detection of IgM Antibodies to Viral Agents: USA, 1997[Z].

[6]National Committee for Clinical Laboratory Standards. Specifications for immunological testing for infectious diseases: proposed guideline[Z].

[7]彭文偉.《傳染病學(xué)》（第五版）[M].人民衛(wèi)生出版社，2001.

[8]劉艷芳、張勇建、蘇明.《臨床病原體學(xué)檢驗》[M].軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)出版社，2009.

[9]陳敬賢.《診斷病原體學(xué)》（第一版）[M].人民衛(wèi)生出版社，2008.

[10]馮仁豐.《臨床檢驗質(zhì)量管理技術(shù)基礎(chǔ)》[M].第二版，上?？茖W(xué)技術(shù)文獻出版社，2007.

[11]國家藥典委員.《中華人民共和國藥典》[M].中國醫(yī)藥科技出版社，2020.

[12]李洪源，王志玉.《病原體學(xué)檢驗》（第一版）[M].人民衛(wèi)生出版社，2006.

[13]Nathanson.N.《病原體致病與免疫》（第2版）[M].科學(xué)出版社，2008年.

[14]曹雪濤.《免疫學(xué)技術(shù)及其應(yīng)用》（第一版）[M].科學(xué)出版社，2010年.