附件：幽門螺桿菌抗原/抗體檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2018年第36號）.doc

幽門螺桿菌抗原/抗體檢測試劑
注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對幽門螺桿菌抗原/抗體檢測試劑注冊申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時(shí)也為技術(shù)審評部門對注冊申報(bào)資料的技術(shù)審評提供參考。

本指導(dǎo)原則是對幽門螺桿菌抗原抗體檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是對申請人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料，相關(guān)人員應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。

一、范圍

幽門螺桿菌（Helicobacter pylori，H.pylori）是一種寄生在胃部和十二指腸的革蘭氏陰性微量需氧細(xì)菌，其感染非常普遍，全球自然人群感染率超過50%。影響幽門螺桿菌感染率的因素包括經(jīng)濟(jì)狀況、居住條件、文化程度、職業(yè)及飲水習(xí)慣等，普遍來說，發(fā)展中國家高于發(fā)達(dá)國家。目前認(rèn)為，在自然環(huán)境中，人是幽門螺桿菌唯一的傳染源，傳播途徑推測為經(jīng)口感染。

幾乎所有的幽門螺桿菌感染者在組織學(xué)上均存在活動(dòng)性炎性反應(yīng)，幽門螺桿菌感染為一種感染（傳染）性疾病，可導(dǎo)致慢性胃炎、消化性潰瘍等，常見癥狀包括胃上部不適感以及疼痛、脹氣、厭食、惡心、嘔吐以及深色或焦油色糞便等，其中約70%以上感染者無明顯癥狀。幽門螺桿菌是胃炎、消化性潰瘍的主要致病因素，并與功能性消化不良、胃黏膜相關(guān)性淋巴組織（MALT）淋巴瘤和胃癌的發(fā)生密切相關(guān)，世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機(jī)構(gòu)已將其列為Ⅰ類致癌因子。根除幽門螺桿菌可顯著減少胃和十二指腸疾病包括胃癌的發(fā)病率，并可在未來減少幽門螺桿菌感染的新發(fā)病例。

幽門螺桿菌感染的診斷方法依據(jù)取材有無創(chuàng)傷性分為兩大類：侵入性檢測方法和非侵入性檢測方法。前者是指依賴胃鏡取材的檢測方法，包括組織學(xué)檢測（如HE染色、Warthin-Starry銀染、改良Giemsa染色、甲苯胺藍(lán)染色、丫啶橙染色、免疫組織化學(xué)染色等）、細(xì)菌培養(yǎng)、快速尿素酶試驗(yàn)（RUT）以及幽門螺桿菌核酸檢測；后者則包括血清學(xué)（抗體）檢測、糞便幽門螺桿菌抗原檢測或基因檢測以及尿素呼氣試驗(yàn)（UBT）等。不同診斷方法有各自的優(yōu)勢和局限性。

有關(guān)幽門螺桿菌感染診斷最新的國際、國內(nèi)專家共識認(rèn)為：

1.對于幽門螺桿菌現(xiàn)癥感染的診斷，臨床應(yīng)用的非侵入性幽門螺桿菌檢測試驗(yàn)中，最為推薦的是UBT方法，單克隆抗體糞便抗原檢測可作為備選，血清學(xué)抗體檢測陽性提示曾經(jīng)感染，對于從未治療者可視為現(xiàn)癥感染；如受試者有內(nèi)鏡檢查指征而無活檢禁忌，且胃鏡檢查需要活檢時(shí)，推薦RUT試驗(yàn)；對于胃炎活檢標(biāo)本，組織學(xué)染色陽性即可診斷幽門螺桿菌感染，陰性者可行免疫組化染色；如需進(jìn)行幽門螺桿菌藥物敏感性評價(jià)，可采用細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)合藥敏試驗(yàn)的方法，或采用分子生物學(xué)方法檢測相關(guān)耐藥基因。

2.幽門螺桿菌根除治療后，應(yīng)常規(guī)評估根除效果，若患者根除治療后不需要復(fù)查胃鏡，可采用非侵入性方法檢測幽門螺桿菌。UBT是最佳評估方法，單克隆抗體糞便抗原檢測可作為備選；血清抗體檢測不適用于根除治療后的近期根除效果評價(jià)。

本指導(dǎo)原則所述幽門螺桿菌抗原/抗體檢測試劑是指利用膠體金法、酶聯(lián)免疫法等基于抗原抗體反應(yīng)原理，針對人體糞便樣本中的幽門螺桿菌抗原，或者血清/血漿、尿液樣本中的幽門螺桿菌抗體進(jìn)行體外定性檢測的試劑。結(jié)合臨床和其他實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，可用于人群中幽門螺桿菌感染的輔助診斷。

幽門螺桿菌抗原/抗體檢測的準(zhǔn)確性至關(guān)重要，不正確的檢測結(jié)果可能導(dǎo)致對患者管理決策失誤，假陰性結(jié)果可能導(dǎo)致診斷不及時(shí)而延誤治療，假陽性結(jié)果可能導(dǎo)致不必要的干預(yù)措施。申請人應(yīng)建立良好的產(chǎn)品性能，并對安全性和有效性進(jìn)行科學(xué)合理的驗(yàn)證。

本指導(dǎo)原則僅包括對幽門螺桿菌抗原/抗體檢測試劑申報(bào)資料中部分項(xiàng)目的要求，適用于進(jìn)行產(chǎn)品注冊和相關(guān)許可事項(xiàng)變更的產(chǎn)品。其他未盡事宜，應(yīng)當(dāng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）（以下簡稱《辦法》）、《體外診斷試劑注冊申報(bào)資料基本要求》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）等相關(guān)法規(guī)和文件的要求。

二、注冊申報(bào)資料要求

（一）綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、臨床適應(yīng)癥背景情況、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、研究結(jié)果的總結(jié)評價(jià)以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容。其中，需注意以下內(nèi)容：

1.臨床適應(yīng)癥背景情況

描述幽門螺桿菌的生物學(xué)特征、流行病學(xué)、潛伏期、易感人群、感染后的臨床表現(xiàn)和相關(guān)疾病等。說明現(xiàn)有的臨床或其他實(shí)驗(yàn)室診斷方法等。對于尿液抗體檢測試劑，還應(yīng)詳述幽門螺桿菌抗體在尿液中的分布情況，并與血液幽門螺桿菌抗體的分布情況進(jìn)行對比，包括濃度水平、產(chǎn)生和消失的時(shí)間等。

2.同類產(chǎn)品上市情況

應(yīng)著重從技術(shù)方法及臨床適用范圍等方面寫明擬申報(bào)產(chǎn)品與現(xiàn)行臨床診斷方法，以及目前市場上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的主要異同點(diǎn)。

（二）主要原材料研究資料

由于幽門螺桿菌菌株間差異較大，不同地域、不同人群感染的幽門螺桿菌菌株之間，在基因特征和抗原表型上可能有明顯不同，因此在選擇抗原、抗體原料時(shí)，應(yīng)注重抗原表位的選擇，避免菌株間差異造成的假陰性。抗原、抗體原材料研究資料中應(yīng)將此方面的考慮進(jìn)行詳述。

1.幽門螺桿菌抗原檢測試劑所用病原體特異性抗體

首先應(yīng)詳述抗體所針對的抗原表位、抗體制備所用免疫原以及確定該抗體作為主要原材料的依據(jù)，此外應(yīng)提交抗體來源、制備、篩選、鑒定及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（蛋白純度、濃度、效價(jià)、功能性試驗(yàn)等）等詳細(xì)試驗(yàn)資料。

主要包括以下兩種情況：

1.1企業(yè)自制抗體

如使用天然抗原作為免疫原，應(yīng)提供該天然抗原的來源；如使用重組抗原或其他人工合成抗原作為免疫原，應(yīng)提供相應(yīng)的核酸或者蛋白序列信息。針對抗體的制備、鑒定等過程，應(yīng)提交詳細(xì)的研究資料和工藝穩(wěn)定性驗(yàn)證資料。

1.2企業(yè)外購抗體

應(yīng)詳述抗體的名稱及生物學(xué)來源，供應(yīng)商名稱；提交供應(yīng)商選擇的研究資料及供應(yīng)商出具的抗體性能指標(biāo)及檢驗(yàn)報(bào)告。

2.幽門螺桿菌抗體檢測試劑所用病原體抗原

首先應(yīng)詳述確定該抗原作為主要原材料的依據(jù)，此外應(yīng)提交抗原來源、制備、篩選、鑒定及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（蛋白純度、濃度、功能性試驗(yàn)等）等詳細(xì)試驗(yàn)資料。

主要包括以下兩種情況：

2.1企業(yè)自制抗原

如為天然抗原，則應(yīng)對幽門螺桿菌菌株選擇、培養(yǎng)、抗原提取、純化、鑒定等實(shí)驗(yàn)過程予以詳述。如為重組抗原，則應(yīng)提交有關(guān)特定基因選擇、序列信息，克隆構(gòu)建及轉(zhuǎn)化，抗原表達(dá)及純化、鑒定等詳細(xì)資料。

2.2企業(yè)外購抗原

應(yīng)詳述抗原的名稱，抗原生物學(xué)來源，供應(yīng)商名稱，提交供應(yīng)商選擇的研究資料及供應(yīng)商出具的抗原性能檢驗(yàn)報(bào)告。

3.其他主要原輔料

應(yīng)提交各種原輔料的選擇及驗(yàn)證資料，如固相載體、硝酸纖維素膜、反應(yīng)緩沖液等，應(yīng)詳述確定該原輔料作為主要原輔料的依據(jù)，說明每一原輔料的供應(yīng)商名稱，提交供應(yīng)商出具的每一原輔料性能指標(biāo)及檢驗(yàn)報(bào)告，詳述申請人對每一原輔料技術(shù)指標(biāo)要求并提交檢驗(yàn)數(shù)據(jù)。

4.試劑盒質(zhì)控品（如有）

應(yīng)包括原料來源、質(zhì)控品制備、陰陽性確認(rèn)等相關(guān)研究資料。質(zhì)控品應(yīng)至少包含陰性和陽性兩個(gè)水平?？乖瓩z測試劑陽性質(zhì)控品可選擇標(biāo)準(zhǔn)菌株或經(jīng)鑒定、可溯源的臨床分離株（以下有關(guān)幽門螺桿菌菌株的要求同）或臨床陽性樣本?？贵w檢測試劑陽性質(zhì)控品可選擇臨床陽性樣本，陰性質(zhì)控品可選擇臨床陰性樣本或緩沖溶液等。

5.企業(yè)參考品

如申報(bào)產(chǎn)品有相應(yīng)的國家參考品，則企業(yè)參考品應(yīng)參考國家參考品的項(xiàng)目設(shè)置，應(yīng)不低于國家參考品要求。若尚無國家參考品，申請人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品性能驗(yàn)證的實(shí)際情況自行設(shè)定企業(yè)參考品。

應(yīng)提交企業(yè)參考品的原料選擇、制備、陰陽性及濃度/滴度確認(rèn)等相關(guān)驗(yàn)證資料。說明參考品陰陽性及濃度/滴度確認(rèn)的方法或試劑（建議采用國內(nèi)已上市的、臨床上普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類試劑）。企業(yè)參考品的基質(zhì)應(yīng)與待測樣本相同。企業(yè)參考品的設(shè)置建議如下：

5.1幽門螺桿菌抗原檢測試劑

5.1.1陽性參考品和陰性參考品

陽性參考品應(yīng)考慮幽門螺桿菌抗原檢出能力的驗(yàn)證，可選擇多個(gè)幽門螺桿菌菌株，基質(zhì)應(yīng)與檢測樣本一致，應(yīng)設(shè)置不同濃度水平。陰性參考品應(yīng)考慮檢測特異性的評價(jià)，適當(dāng)納入其他病原體樣本。

5.1.2檢測限參考品

可設(shè)置幽門螺桿菌菌株的系列梯度濃度樣本，樣本基質(zhì)與檢測樣本一致，其中應(yīng)包含檢測限水平。

5.1.3精密度參考品

應(yīng)至少設(shè)置一個(gè)弱陽性水平參考品。

5.2幽門螺桿菌抗體檢測試劑

5.2.1陽性參考品和陰性參考品

陽性參考品應(yīng)考慮幽門螺桿菌特異性抗體檢出能力的驗(yàn)證，可選擇多份確認(rèn)為陽性的臨床樣本，并設(shè)置不同滴度水平。陰性參考品應(yīng)考慮檢測特異性的評價(jià)，適當(dāng)納入其他病原體特異性抗體陽性樣本。

5.2.2檢測限參考品

可設(shè)置臨床陽性樣本的系列稀釋樣本，其中應(yīng)包含檢測限水平。

5.2.3精密度參考品

應(yīng)至少設(shè)置一個(gè)弱陽性水平參考品。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料

1.產(chǎn)品基本反應(yīng)原理介紹。

2.主要生產(chǎn)工藝介紹，可用流程圖方式表示，并簡要說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。

3.包被/標(biāo)記工藝研究，申請人應(yīng)考慮如包被/標(biāo)記液量、濃度、時(shí)間、條件等指標(biāo)對產(chǎn)品性能的影響，通過實(shí)驗(yàn)確定上述指標(biāo)的最佳組合。

4.反應(yīng)條件確定：申請人應(yīng)考慮反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)溫度、洗滌次數(shù)等條件對產(chǎn)品性能的影響，通過實(shí)驗(yàn)確定上述條件的最佳組合。

5.反應(yīng)體系中樣品加樣方式及加樣量確定：通過實(shí)驗(yàn)確定最佳的加樣方式及加樣量。如樣本需采取稀釋或其他必要的方法進(jìn)行處理后方可用于最終檢測，申請人還應(yīng)對可用于樣本稀釋的物質(zhì)或處理方法進(jìn)行研究，通過實(shí)驗(yàn)確定最終選擇的用于樣本稀釋的物質(zhì)或處理方法。

6.顯色系統(tǒng)、酶作用底物等的介紹以及最適條件研究。

（四）分析性能評估資料

企業(yè)應(yīng)提交在產(chǎn)品研制和成品驗(yàn)證階段對試劑盒進(jìn)行的所有性能驗(yàn)證的研究資料，包括具體研究方法、所用樣本類型及數(shù)量、內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)等詳細(xì)資料。

對于幽門螺桿菌抗原/抗體檢測試劑，建議著重對以下分析性能進(jìn)行研究。不同樣本類型應(yīng)分別研究。

1.陽性檢出能力

前文提及幽門螺桿菌不同菌株之間可能存在較大差異，因此應(yīng)充分驗(yàn)證申報(bào)試劑對不同地域來源菌株的陽性檢出能力。

1.1對于抗原檢測試劑，應(yīng)選擇中國境內(nèi)具有區(qū)域特征性的多個(gè)幽門螺桿菌菌株進(jìn)行研究，以證明產(chǎn)品對于不同地區(qū)流行菌株的檢出能力。

1.2對于抗體檢測試劑，應(yīng)選擇中國境內(nèi)來源于不同地域、不同人群的多份臨床確診為幽門螺桿菌抗體陽性的患者樣本進(jìn)行研究。

2.最低檢測限（分析靈敏度）

采用系列稀釋的方法進(jìn)行最低檢測限的研究。建議設(shè)置多個(gè)濃度梯度，每個(gè)濃度重復(fù)檢測不少于3次，以100%可檢出的最低濃度水平作為預(yù)設(shè)檢測限。在此濃度附近制備若干濃度梯度樣品，每個(gè)濃度至少重復(fù)檢測20次，將具有95%陽性檢出率的最低濃度作為最低檢測限。

2.1抗原檢測試劑：建議使用幽門螺桿菌菌株的梯度稀釋液加入到陰性臨床樣本進(jìn)行評價(jià)。

2.2抗體檢測試劑：建議采用幽門螺桿菌特異性抗體陽性臨床樣本進(jìn)行評價(jià)。

3.分析特異性

3.1交叉反應(yīng)

用于幽門螺桿菌交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病原體種類主要考慮以下幾方面：抗原結(jié)構(gòu)具有同源性（如幽門螺桿菌在細(xì)菌分類學(xué)上的近緣菌）、易引起相同或相似的臨床癥狀、采樣部位正常寄生或易并發(fā)的其他微生物，對于以尿素酶抗原、抗體為檢測靶物質(zhì)的試劑盒，還應(yīng)針對消化道常見其他產(chǎn)尿素酶細(xì)菌（見表1）進(jìn)行交叉反應(yīng)驗(yàn)證。

對于幽門螺桿菌抗體檢測試劑，如果試劑原料采用基因重組抗原，則還需考慮對重組基因?qū)胛⑸锾禺愋钥贵w的交叉反應(yīng)評價(jià)。例如，如果采用大腸埃希菌作為宿主菌，原核載體作為表達(dá)載體，建議考慮大腸埃希菌宿主自身蛋白以及載體骨架編碼的蛋白與被測物之間可能產(chǎn)生的交叉反應(yīng)。

試驗(yàn)方法：對于幽門螺桿菌抗原檢測試劑，建議針對表1中所列菌種或各菌屬的常見菌種，在病原體感染的醫(yī)學(xué)相關(guān)水平進(jìn)行交叉反應(yīng)的驗(yàn)證。通常細(xì)菌感染的水平為106CFU/mL或更高。對于幽門螺桿菌抗體檢測試劑，可考慮采用抗體中和抑制試驗(yàn)，針對表1中所列菌種或各菌屬的常見菌種進(jìn)行交叉反應(yīng)評價(jià)，即：選取若干份不同濃度水平的幽門螺桿菌抗體陽性樣本，分別加入幽門螺桿菌及其他待驗(yàn)證病原體，將加入病原體后的樣本和未處理樣本進(jìn)行比對，計(jì)算平均抑制率，以考察是否存在交叉反應(yīng)，其中各種病原體均應(yīng)為經(jīng)鑒定的菌株，濃度水平建議在107CFU/mL或更高。如有其他適合的方法，申請人亦可采用，并詳細(xì)說明原理和步驟。

申請人應(yīng)提供所有用于交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病原體的來源、鑒定和濃度確認(rèn)等試驗(yàn)資料，說明交叉反應(yīng)判定標(biāo)準(zhǔn)。有關(guān)交叉反應(yīng)驗(yàn)證的信息應(yīng)在產(chǎn)品說明書的【產(chǎn)品性能指標(biāo)】項(xiàng)中有所體現(xiàn)。

3.2干擾實(shí)驗(yàn)

3.2.1內(nèi)源性及外源性干擾

應(yīng)對樣本中可能存在的內(nèi)源性及外源性干擾物質(zhì)（見表2、表3及表4）進(jìn)行研究。方法為：對幽門螺桿菌抗原/抗體陰性、弱陽性的臨床樣本，使用醫(yī)學(xué)相關(guān)水平的干擾物質(zhì)濃度（建議為潛在最大濃度）分別進(jìn)行添加，評價(jià)待測物回收率，確定是否產(chǎn)生干擾。如有干擾，梯度稀釋干擾物并進(jìn)一步確定可接受的干擾物質(zhì)的最高濃度水平，或產(chǎn)生干擾的濃度水平。應(yīng)使用多份臨床樣本，每個(gè)樣本重復(fù)檢測不少于3次。申請人應(yīng)描述干擾物質(zhì)的種類，說明樣本的制備方法及待測物的水平，以及不產(chǎn)生干擾的驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)。

3.2.2抗凝劑的干擾

如果試劑盒適用樣本類型包括血漿樣本，可采用一定數(shù)量血清、血漿同源樣本進(jìn)行對比試驗(yàn)的方法，或采用回收試驗(yàn)的方法，驗(yàn)證各種抗凝劑的適用性。

4.精密度

申請人應(yīng)對每項(xiàng)精密度指標(biāo)的評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求，如標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)的范圍等。研究資料應(yīng)包括時(shí)間、地點(diǎn)、操作人員、檢測次數(shù)、所用試劑批次、樣本濃度、適用儀器（如適用）、研究過程以及結(jié)果分析方法等。應(yīng)考慮以下幾個(gè)方面：

4.1對可能影響檢測精密度的主要變量進(jìn)行驗(yàn)證：除申報(bào)試劑本身外，還應(yīng)對不同日期、地點(diǎn)、操作人員、測試運(yùn)行間的差異進(jìn)行相關(guān)的驗(yàn)證。如有條件，申請人應(yīng)選擇不同的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行室間精密度的評價(jià)。

4.2設(shè)定合理的精密度評價(jià)周期。

4.3用于精密度評價(jià)的參考品可以使用臨床混合樣本或者商業(yè)化質(zhì)控品（基質(zhì)相同或相似）。至少包括三個(gè)水平，具體要求如下：

4.3.1 陰性參考品：陰性檢出率應(yīng)為100%（n≥20）。

4.3.2弱陽性參考品：參考品濃度略高于最低檢測限，陽性檢出率應(yīng)大于95%（n≥20）。

4.3.3中等陽性參考品：建議參考品濃度約為陽性判斷值水平的2至3倍，陽性檢出率應(yīng)為100%，CV≤10%（如適用）（n≥20）。

5.鉤狀（HOOK）效應(yīng)

建議采用高濃度的幽門螺桿菌抗原陽性參考品，或者高滴度的幽門螺桿菌抗體陽性樣本進(jìn)行梯度稀釋后分別檢測，每個(gè)梯度重復(fù)3至5次，將顯色深度或檢測值隨濃度/滴度升高反而變淺或降低時(shí)的濃度/滴度作為出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)時(shí)幽門螺桿菌抗原、抗體的最低濃度/滴度。

（五）陽性判斷值確定資料

申請人應(yīng)根據(jù)具體情況選擇適當(dāng)?shù)姆椒?，如受試者工作特征曲線（ROC）的分析方式，來確定合理的陽性判斷值。若試驗(yàn)結(jié)果存在灰區(qū)，則應(yīng)明確灰區(qū)建立的基礎(chǔ)。試驗(yàn)所用樣本來源應(yīng)考慮到地域、年齡、職業(yè)、是否接受抗菌治療等因素的影響。

申請人應(yīng)提交具體的試驗(yàn)方案、評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析、研究數(shù)據(jù)等研究資料。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報(bào)試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。前者主要包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性（如涉及）及凍融穩(wěn)定性（如涉及）等研究，申請人可根據(jù)實(shí)際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實(shí)施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對于實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實(shí)際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

樣本穩(wěn)定性一般包括樣本各種實(shí)際運(yùn)輸及儲存（常溫、冷藏和冷凍）條件下的保存期限驗(yàn)證，以確認(rèn)樣本的保存條件及效期（短期、長期）。需要冷凍保存的樣本同時(shí)應(yīng)對凍融次數(shù)進(jìn)行合理驗(yàn)證。某些用于防腐、冷凍用途或起穩(wěn)定保護(hù)作用的添加劑可能會對檢測造成影響，如涉及，請對該添加劑的影響進(jìn)行合理驗(yàn)證。

試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果應(yīng)在說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】兩項(xiàng)中進(jìn)行詳細(xì)說明。

（七）臨床試驗(yàn)資料

臨床試驗(yàn)的開展應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)、文件的要求。臨床試驗(yàn)資料應(yīng)符合《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）要求。

1.試驗(yàn)方法

體外診斷試劑的臨床試驗(yàn)可采用試驗(yàn)用體外診斷試劑與臨床診斷“金標(biāo)準(zhǔn)”進(jìn)行盲法同步比較，驗(yàn)證試驗(yàn)用體外診斷試劑的臨床性能，或與已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行比較研究試驗(yàn)，證明兩者等效。

對于幽門螺桿菌抗原/抗體檢測試劑而言，鑒于UBT方法是目前最為推薦的非侵入性幽門螺桿菌感染診斷方法和幽門螺桿菌根除效果評價(jià)方法，臨床試驗(yàn)可采用試驗(yàn)用體外診斷試劑與UBT方法進(jìn)行盲法同步比較；或采用試驗(yàn)用體外診斷試劑與已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行比較研究試驗(yàn)（尿液抗體檢測試劑應(yīng)選擇已上市血清/血漿抗體檢測試劑作為對比試劑進(jìn)行同源樣本比較研究試驗(yàn)），并選取一定數(shù)量陽性、陰性病例（陽性、陰性分別不少于100例，并包含弱陽性等不易判讀的樣本）同時(shí)與UBT方法和已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行盲法同步比較。對于比較研究試驗(yàn)中測定結(jié)果不符的樣本，應(yīng)采用UBT方法或者其他合理的方法（如臨床上普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的第三方試劑）進(jìn)行復(fù)核，明確臨床診斷結(jié)果，并對不符原因進(jìn)行分析。

2.試驗(yàn)方案

臨床試驗(yàn)實(shí)施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計(jì)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計(jì)科學(xué)合理的臨床研究方案。各臨床研究機(jī)構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)基本一致，且保證在整個(gè)臨床試驗(yàn)過程中遵循預(yù)定的方案實(shí)施，不可隨意改動(dòng)。整個(gè)試驗(yàn)過程應(yīng)在臨床研究機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)并由本實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員操作完成，申報(bào)單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實(shí)驗(yàn)進(jìn)程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。在試驗(yàn)操作過程中和判定試驗(yàn)結(jié)果時(shí)應(yīng)采用盲法以保證試驗(yàn)結(jié)果的客觀性。各研究單位選用的對比試劑/方法應(yīng)保持一致，以便進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

試驗(yàn)方案中應(yīng)確定病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。應(yīng)對檢測樣本的類型和數(shù)量提出要求。應(yīng)明確統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)假設(shè)，如評價(jià)試驗(yàn)用體外診斷試劑與對比試劑是否等效的標(biāo)準(zhǔn)，并提出適合的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析方法。

3.受試人群

幽門螺桿菌抗原/抗體檢測與臨床癥狀、體征及其他臨床診斷方法相結(jié)合，用于相關(guān)病原體感染的輔助診斷。臨床試驗(yàn)受試者應(yīng)包括各種可能接受幽門螺桿菌感染檢查的人群，例如有胃炎、消化性潰瘍、消化不良等癥狀的患者以及無相關(guān)臨床癥狀的人群，對于抗原檢測試劑還應(yīng)包括進(jìn)行幽門螺桿菌近期根除治療效果評價(jià)的患者。

受試者建議根據(jù)流行病學(xué)證據(jù)納入不同地區(qū)的患者/人群，以驗(yàn)證本產(chǎn)品的臨床檢出能力。

為考察產(chǎn)品的臨床特異性，陰性樣本應(yīng)根據(jù)分析特異性研究中的要求適當(dāng)納入干擾樣本。

4.樣本類型

對于抗原檢測試劑，樣本類型通常為糞便樣本。

對于抗體檢測試劑，可能涉及血清/血漿/尿液等不同樣本類型。若檢測樣本為尿液抗體樣本，臨床試驗(yàn)中應(yīng)重點(diǎn)論證其陽性檢出率與血清/血漿樣本檢測的一致性，能否滿足臨床需求。

凍存樣本和新鮮樣本的檢測結(jié)果如有差異應(yīng)分別統(tǒng)計(jì)。

5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計(jì)方法對臨床試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。對于此類定性檢測試劑與已上市同類產(chǎn)品或參比方法的比較研究試驗(yàn)，常選擇配對四格（2×2）表或列聯(lián)表的形式總結(jié)試驗(yàn)用體外診斷試劑與對比試劑/參比方法的檢測結(jié)果，計(jì)算陽性符合率、陰性符合率、總符合率以及95%置信區(qū)間。并對定性結(jié)果進(jìn)行配對χ2檢驗(yàn)證明兩種試劑/方法的檢測結(jié)果無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，或采用kappa檢驗(yàn)以驗(yàn)證兩種試劑/方法檢測結(jié)果的一致性。注意不符合樣本的復(fù)核結(jié)果不應(yīng)納入到上述統(tǒng)計(jì)中。對于不同的受試者應(yīng)進(jìn)行分層統(tǒng)計(jì)分析。

建議與UBT對比的臨床靈敏度和特異性95%置信區(qū)間的下限應(yīng)高于85%。

（八）產(chǎn)品技術(shù)要求

申請人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)申請人產(chǎn)品研制、前期臨床評價(jià)等結(jié)果，依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及相關(guān)文獻(xiàn)，按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的有關(guān)要求，編寫產(chǎn)品技術(shù)要求。

幽門螺桿菌抗原/抗體檢測試劑的產(chǎn)品性能指標(biāo)應(yīng)主要包括：物理性狀、陰/陽性參考品符合率、精密度、最低檢測限等。陽性參考品主要考察對幽門螺桿菌抗原/抗體的陽性檢出能力，陰性參考品則重點(diǎn)對分析特異性進(jìn)行驗(yàn)證。

如果申報(bào)試劑已有適用的國家標(biāo)準(zhǔn)品、參考品發(fā)布，則申請人應(yīng)在產(chǎn)品技術(shù)要求中提出檢驗(yàn)要求。

按照《辦法》的規(guī)定，此類產(chǎn)品為第三類體外診斷試劑，申請人應(yīng)按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》的要求，以附錄形式明確主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品要求，附錄的編制應(yīng)符合相關(guān)編寫規(guī)范的要求。

（九）產(chǎn)品注冊檢驗(yàn)報(bào)告

根據(jù)《辦法》的要求，首次申請注冊的第三類體外診斷試劑產(chǎn)品應(yīng)在具有相應(yīng)醫(yī)療器械檢驗(yàn)資質(zhì)和承檢范圍的醫(yī)療器械檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)進(jìn)行連續(xù)3個(gè)生產(chǎn)批次樣品的注冊檢驗(yàn)。對于已經(jīng)有國家標(biāo)準(zhǔn)品、參考品的檢測項(xiàng)目，應(yīng)采用相應(yīng)的國家標(biāo)準(zhǔn)品、參考品進(jìn)行注冊檢驗(yàn)。對于目前尚無國家標(biāo)準(zhǔn)品的、參考品的檢測項(xiàng)目，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)建立自己的參考品體系并提供相應(yīng)的企業(yè)參考品。

（十）產(chǎn)品說明書

說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、標(biāo)本采集及處理、檢驗(yàn)方法、檢驗(yàn)結(jié)果解釋以及注意事項(xiàng)等重要信息，是指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗(yàn)結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)。因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報(bào)最重要的文件之一。產(chǎn)品說明書的格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求，進(jìn)口體外診斷試劑的中文說明書除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說明書的一致性，翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達(dá)習(xí)慣。產(chǎn)品說明書中相關(guān)技術(shù)內(nèi)容均應(yīng)與申請人提交的注冊申報(bào)資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，則應(yīng)以規(guī)范格式對此內(nèi)容進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)列明文獻(xiàn)的相關(guān)信息。

結(jié)合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求，下面對幽門螺桿菌抗原/抗體檢測試劑說明書的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說明，以指導(dǎo)注冊申報(bào)人員更合理地完成說明書編制。

1.【預(yù)期用途】

1.1幽門螺桿菌糞便抗原檢測試劑

1.1.1該產(chǎn)品用于體外定性檢測人糞便樣本中的幽門螺桿菌抗原。

1.1.2結(jié)合臨床和其他實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，用于幽門螺桿菌感染的輔助診斷、根除治療效果評價(jià)。

1.1.3臨床背景描述：簡單介紹病原體的生物學(xué)特征、流行病學(xué)、潛伏期、易感人群、感染后的臨床表現(xiàn)及相關(guān)疾病等。簡要介紹現(xiàn)有的幽門螺桿菌臨床或?qū)嶒?yàn)室診斷方法。

1.2幽門螺桿菌抗體檢測試劑

1.2.1該產(chǎn)品用于體外定性檢測人血清/血漿/尿液樣本中的幽門螺桿菌抗體/IgG/IgA。

1.2.2對于未經(jīng)幽門螺桿菌根除治療的人群，結(jié)合臨床和其他實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，用于幽門螺桿菌感染的輔助診斷。注明抗體檢測產(chǎn)品不能用于幽門螺桿菌根除效果評價(jià)的近期判斷。

1.2.3臨床背景描述同1.1.3。

2.【主要組成成分】

2.1說明試劑盒包含組分的名稱、數(shù)量、比例或濃度等信息，質(zhì)控品應(yīng)明確具體基質(zhì)成分。對于膠體金試劑應(yīng)描述試劑條/卡結(jié)構(gòu)組成。

2.2介紹檢測中使用的抗原/抗體信息及標(biāo)記物信息，包括抗原的性質(zhì)（如純化的天然抗原、重組抗原等）、抗體的動(dòng)物源性、抗體的性質(zhì)（單克隆或多克?。?、標(biāo)記物種類等。

2.3試劑盒中不包含但對該項(xiàng)檢測必須的組分，企業(yè)應(yīng)列出相關(guān)試劑的名稱、注冊證號/備案號（如有）、貨號等其他相關(guān)信息。

3.【儲存條件及有效期】

詳細(xì)介紹試劑盒的效期穩(wěn)定性、開封穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性等信息。

4.【適用機(jī)型】

對于采用酶聯(lián)免疫吸附法的檢測試劑應(yīng)明確適用酶標(biāo)儀的波長要求，其他方法學(xué)檢測試劑應(yīng)明確具體的適用機(jī)型型號。

5.【樣本要求】重點(diǎn)明確以下內(nèi)容

5.1樣本采集前的要求：如采集時(shí)間、采集順序、采集量等，是否受臨床癥狀、用藥情況等因素的影響。對于幽門螺桿菌根除效果評價(jià)應(yīng)根據(jù)相關(guān)臨床指南或共識文件提出采樣時(shí)間要求。

5.2樣本采集：說明采集方法及樣本類型，對于血漿樣本，應(yīng)注明對抗凝劑的要求。

5.3干擾物的影響：明確常見干擾物對實(shí)驗(yàn)結(jié)果是否產(chǎn)生影響，明確可接受的最大干擾物濃度。

5.4樣本處理及保存：樣本處理方法、保存條件（如冷藏、冷凍等）及不同保存條件下的保存時(shí)限和運(yùn)輸條件等。冷藏、冷凍樣本檢測前是否需要恢復(fù)室溫，冷凍樣本的凍融次數(shù)限制等。

6.【檢驗(yàn)方法】

詳細(xì)說明試驗(yàn)操作的各個(gè)步驟：

6.1實(shí)驗(yàn)環(huán)境：檢測試劑及樣本的復(fù)溫要求等。

6.2試劑配制方法，試劑開封后使用方法等。

6.3高濃度樣本稀釋的方法。

6.4試驗(yàn)條件：操作步驟、溫度、時(shí)間、儀器波長等。

6.5質(zhì)量控制：操作步驟，質(zhì)控結(jié)果的要求（試驗(yàn)有效性的判斷），質(zhì)控結(jié)果不符合要求的處理方式。

6.6對于膠體金法檢測試劑可以圖示形式顯示正確的檢驗(yàn)操作方法、程序及注意事項(xiàng)等。特別注意應(yīng)強(qiáng)調(diào)操作溫度及濕度條件、讀取結(jié)果的時(shí)間。

6.7特別說明檢驗(yàn)操作過程中的注意事項(xiàng)。

7.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

詳細(xì)描述檢測結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)或計(jì)算方法，如有灰區(qū)判定，應(yīng)詳細(xì)說明灰區(qū)樣本的處理方法。

詳細(xì)描述抗原/抗體檢測結(jié)果在臨床幽門螺桿菌診斷感染或治療后根除效果評價(jià)中的作用，特別是由于幽門螺桿菌抗菌治療后特異性抗體仍將存在一定時(shí)間，因此抗體檢測對于根除效果的評價(jià)具有一定的局限性。

檢驗(yàn)結(jié)果的解釋應(yīng)結(jié)合相應(yīng)的臨床診療指南進(jìn)行描述。

8.【檢驗(yàn)方法局限性】

綜合產(chǎn)品的預(yù)期用途、臨床背景、檢測方法及適用范圍等信息，對可能出現(xiàn)的局限性進(jìn)行相關(guān)說明。

9.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

詳述以下性能指標(biāo)：

9.1對相應(yīng)國家參考品（如有）檢測的符合情況。

9.2企業(yè)內(nèi)部陽性和陰性參考品符合率。簡單介紹陽性參考品的來源、濃度梯度；陰性參考品的組成、來源以及濃度梯度設(shè)置等信息。

9.3陽性檢出能力：說明已驗(yàn)證的幽門螺桿菌菌株或樣本來源及陽性檢出率。

9.4最低檢測限：簡要介紹評價(jià)方法、所用幽門螺桿菌菌株或樣本情況以及評價(jià)結(jié)果。

9.5分析特異性

9.5.1交叉反應(yīng)：詳述交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病原體種類，及有/無交叉反應(yīng)的濃度水平。

9.5.2干擾物質(zhì)：說明驗(yàn)證的干擾物質(zhì)種類及有/無干擾反應(yīng)的濃度水平。

9.6精密度：精密度參考品的組分、濃度及評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。

9.7鉤狀（HOOK）效應(yīng)：對高濃度抗原/抗體鉤狀效應(yīng)的驗(yàn)證情況進(jìn)行總結(jié)。

10.【注意事項(xiàng)】

應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

10.1有關(guān)試劑盒內(nèi)人源組分（如有）生物安全性的警告。如：試劑盒內(nèi)對照品（質(zhì)控品）或其他可能含有人源物質(zhì)的組分，雖已經(jīng)通過了乙型肝炎病毒表面抗原（HBs-Ag）、人類免疫缺陷病毒1/2型抗體（HIV1/2-Ab）、丙型肝炎病毒抗體（HCV-Ab）等項(xiàng)目的檢測，結(jié)果為陰性，但截至目前，沒有任何一項(xiàng)檢測可以確保絕對安全，故仍應(yīng)將這些組分作為潛在傳染源對待。

10.2有關(guān)實(shí)驗(yàn)操作、樣本保存及處理等其他注意事項(xiàng)。

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四、起草單位

國家食品藥品監(jiān)督管理總局醫(yī)療器械技術(shù)審評中心